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文档简介
1、会计学1兽医专业英语兽医专业英语第一页,编辑于星期三:十七点 三十四分。vaccine formulation,that contains swine CCL20 chemokine, resulted in the homogenous induction of detectablelevels of CSFV antibodies at 36 days after the first injection. 这项工作的目的是探讨这项工作的目的是探讨CCL20 CCL20 趋化因子质粒表达是否可以提高趋化因子质粒表达是否可以提高DNA DNA 疫苗表达疫苗表达E2 E2 蛋白联合控制加强对猪瘟
2、病毒的免疫应答。免疫猪的蛋白联合控制加强对猪瘟病毒的免疫应答。免疫猪的 DNA DNA 疫苗配方包含猪疫苗配方包含猪 CCL20 CCL20 趋化因子,结果在疫苗第一次注射后的趋化因子,结果在疫苗第一次注射后的第第36 36 天检测到同源诱导的猪瘟病毒的抗体水平。天检测到同源诱导的猪瘟病毒的抗体水平。第1页/共29页第二页,编辑于星期三:十七点 三十四分。 Remarkably, immunized animals with E2 DNA vaccine in co-administration with the plasmid containing swine CCL20 developed
3、 high titers of neutralizing antibodies against homologous and heterologous(同源和异源)CSFV strains and were totally protected upon a lethal viral challenge (sterilizing protection). 引人注意的是,引人注意的是,E2 DNA E2 DNA 疫苗和含猪疫苗和含猪 CCL20 CCL20 质粒共同质粒共同作用下的免疫动物,在致作用下的免疫动物,在致死量死量病毒的病毒的作用作用(减毒保护)下(减毒保护)下产生对同源及异源猪瘟病毒株
4、高效价的中和抗体产生对同源及异源猪瘟病毒株高效价的中和抗体,并并使之使之得到得到完全保护。这证实完全保护。这证实 CCL20 CCL20 具有增加抗体免疫反应的作用。具有增加抗体免疫反应的作用。第2页/共29页第三页,编辑于星期三:十七点 三十四分。via chemoattraction of lymphocytes and dendritic cells towards the epithelial cells(上皮细胞) surrounding these tissues. CCL20 elicits its effects on its target cells by binding a
5、nd activating the chemokine receptor CCR6.What is CCL20?第3页/共29页第四页,编辑于星期三:十七点 三十四分。virus with (+) polarity(正极)and a lipid envelope(脂质包膜)that belongs to the Pestivirus Genus(瘟病毒属瘟病毒属)of the Flaviviridae family(黄病毒科).Then,lets briefly know CSFV.第4页/共29页第五页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Cells and viruesConstruction
6、 of the plasmid expressing full-length CCL20 chemokineDNA immunization of pigsCSFV challendge第5页/共29页第六页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Isolation of porcine PBMC and Elispot assay fordetection CSFV-specific IFN-gamma producing cellsAntibody detectionRT-PCR real timeELISA for IFN-alpha and IFN-gamma detection from
7、serum samples第6页/共29页第七页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Fig.1.Induction of E2 specific antibodies after immunization and CSFV challenge. Open bars indicate pigs injected with pE2 and pCDNA3.1+ (pigs 13).Black bars indicate pigs injected with plasmids pE2 and pCCL20 (pigs 46).Grey bars indicate control pigs (pigs79
8、). Values are expressed as meanstandard deviations.第7页/共29页第八页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Fig.2.Kinetics of specific CSFV IFN gamma-producing cells induced after immunization and CSFV challenge.Open bars indicate pigs injected with pE2 and pCDNA3.1+(pigs 13).Black bars indicate pigs injected with plasmids pE2
9、and pCCL20 (pigs46).Grey bars indicate control pigs(pigs79).Specific CSFV IFN gamma-producing cells are expressed as spots per 5105PBMC.Values are expressed as mean standard deviations第8页/共29页第九页,编辑于星期三:十七点 三十四分。 of pyrexia upon CSFV challenge in pigs immunized with pE2 and pCCL20. Following CSFV ch
10、allenge, rectal temperature was daily measured.Pyrexia was considered as rectal temperature 40 C. Pigs inoculated with pE2 and pCDNA3.1+ (13). Pigs inoculated with pE2 and pCCL20 (46).Pigs injected with PBS (79).第9页/共29页第十页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Fig.4.IFN alpha levels in serum at 3 and 7days post CSFV cha
11、llenge.Open bars indicate pigs injected with pE2 and pCDNA3.1+(pigs13).Black bars indicate pigs injected with plasmids pE2 and pCCL20 (pigs46).Grey bars indicate control pigs (pigs 79).Levels of IFN-alpha are expressed as Units of IFN-alpha/mL of serum.Values are expressed as mean standard deviation
12、s.第10页/共29页第十一页,编辑于星期三:十七点 三十四分。Lack of detectable CSFV RNA in animals co-administered pE2 and pCCL20第11页/共29页第十二页,编辑于星期三:十七点 三十四分。The protection conferred by pE2 and pCCL20 mixtureassociates with a better induction of neutralizing antibodies upon challenge第12页/共29页第十三页,编辑于星期三:十七点 三十四分。cytokines(细胞因
13、子),chemokines(趋化因子), co-stimulatory molecules and enhancers of Dendritic Cells (DC) recruitment have been used as adjuvants to potentiate protective immune responses against different pathogens.第13页/共29页第十四页,编辑于星期三:十七点 三十四分。 For CSFV, we have shown that immunization with E2 DNA vaccine induced speci
14、fic T cell responses in the absence of neutralizing antibodies before viral challenge.Nevertheless, some vaccinated animals showed a delay in the induction of neutralizing antibodies and they did not achieve enough clinical protection after CSFV challenge.This response was explained by an insufficie
15、nt priming of the T and B lymphocytes after vaccination.第14页/共29页第十五页,编辑于星期三:十七点 三十四分。shown that co-injection of pCCL20 with pE2 in domestic pigs results in an enhancement of the humoral response elicited, as indicated by the induction ofantibodies against E2 glycoprotein in all immunized pigs.第15页/
16、共29页第十六页,编辑于星期三:十七点 三十四分。pCCL20 in comparison with the pE2 injected pigs.Remarkably, pigs immunized with pE2 and pCCL20 elicited,at days 7 and 13 p.c., high levels of neutralizing antibodies. Also, these antibodies neutralized a heterologous(异种的)CSFV strain with high titers, suggesting that co-expre
17、ssion of CCL20expands the antigenic spectrum of the antibodies induced by E2.在pE2组的免疫后第36天,抗E2特定抗体的平均值显示的是阴性。经过CSFV的感染第3天,对比只免疫pE 2的动物,混合免疫pE2+pCCL20组,E2抗体的平均值显示阳性。值得注意的是用pE2和pCCL20进行诱导的免疫猪在攻毒后第7天、第13天,有高水平中和抗体。当然,这些抗体以一个高滴度中和异源CSFV株,意味着联合表达的CCL20扩大了由E2诱导的抗体的抗原图谱。第16页/共29页第十七页,编辑于星期三:十七点 三十四分。CCL20
18、to enhance the T helper cell response associated with the induction of neutralizing antibodiesagainst CSFV in pigs is suggested. 最近的研究表明CCL20趋化因子可以增强经过DNA疫苗免疫的小鼠体液应答。我们的结果证实了这样的一个小鼠模型实验。与此同时,揭示了CCL20趋化因子增强T细胞应答和诱导猪中抗CSFV中和抗体的产生相关的能力。第17页/共29页第十八页,编辑于星期三:十七点 三十四分。detected in the sera. 这里的实验报告了致死性病毒感染
19、后与这里的实验报告了致死性病毒感染后与OIE ManualOIE Manual(国(国际兽医手册)指示的相似,在经过际兽医手册)指示的相似,在经过pE2+pE2+pCCLpCCL2020免疫的动物免疫的动物产生的中和抗体与经得起的完全保护相关。这些动物产生的中和抗体与经得起的完全保护相关。这些动物既既没有疾病症状没有疾病症状,在血清中,在血清中也检测不到也检测不到RNARNA病毒病毒。第18页/共29页第十九页,编辑于星期三:十七点 三十四分。相反,只有经过相反,只有经过pE2pE2免疫的猪在感染后第免疫的猪在感染后第7 7天有较低水平的中天有较低水平的中和抗体。这个滴度的减少可以与感染后第和
20、抗体。这个滴度的减少可以与感染后第3 3和第和第7 7天的动物天的动物发热,轻微症状,病理发现和血清中病毒的测定相联系。发热,轻微症状,病理发现和血清中病毒的测定相联系。第19页/共29页第二十页,编辑于星期三:十七点 三十四分。detected by RT-PCR real timeclinical signs and the virus load(病毒载量)detected in these animals were similar to previously described for pigs inoculated(接种)with empty plasmid(pCDNA3.1+) in
21、 similar experiments.第20页/共29页第二十一页,编辑于星期三:十七点 三十四分。and pCCL20 speeds up the induction of the specific humoral response. Likely,the effect of CCL20 on vaccination was related to theinduction of recruitment of APC(抗原提呈细胞) that further enhance cooperation and activation of T and B cells, generating a
22、more potent humoral response after vaccination.只接种只接种pE2pE2的动物产生特定的动物产生特定-IFN-IFN产生细胞,但是在注射后第产生细胞,但是在注射后第3636天几天几乎没有可测定的特定抗乎没有可测定的特定抗E2E2抗体的产生。这些结果表明联合控制的抗体的产生。这些结果表明联合控制的pE2pE2和和pCCL20pCCL20加快诱导特殊体液应答。同样,加快诱导特殊体液应答。同样,CCL20CCL20在疫苗的效果与在疫苗的效果与APCAPC聚集诱导相关,进一步加强联合操纵和聚集诱导相关,进一步加强联合操纵和T T、B B细胞的活性,免疫后产
23、细胞的活性,免疫后产生更强潜在的体液应答生更强潜在的体液应答。第21页/共29页第二十二页,编辑于星期三:十七点 三十四分。早期报道表明经过早期报道表明经过E2-DNAE2-DNA疫苗免疫之后,疫苗免疫之后,-IFN-IFN表达表达T T细胞的细胞的特定诱导。同样,特定诱导。同样,CSFVCSFV特特定定-IFN-IFN产生细胞在产生细胞在病毒病毒感染前感染前与注射质粒组与注射质粒组频数频数相似。感染后包括相似。感染后包括-IFN-IFN诱导诱导控制控制病毒复制可病毒复制可以解释质粒注射组以解释质粒注射组(pE2pE2组)组)在感染后第在感染后第3 3天观察到的天观察到的CSFVCSFV特定特
24、定-IFN-IFN产生细胞产生细胞的应答的减少的应答的减少。第22页/共29页第二十三页,编辑于星期三:十七点 三十四分。in blood to tissues to halt viral replication there. On the otherhand, these results could be related to the levels of neutralizing antibodies found at 7 days p.c. in animals immunized with pE2 and pCCL20, compared to those of animals immu
25、nized with pE2 alone.第23页/共29页第二十四页,编辑于星期三:十七点 三十四分。found by Elispot(酶联免疫斑点技术).Probably the number of IFN-gamma producing cells may not be high enough to produce detectable levels in blood.These results corroborate previous reports where no correlation was found between the number of IFN-gamma-producing cells and the cytokine levels in serum measured by ELISA .第24页/共29页第二十五页,编辑于星期三:十七点 三十四分。at
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