第5章20病原生物学性疾病的诊断和防治原则

1、第五章第五章 病原生物性疾病的诊断及防治原则病原生物性疾病的诊断及防治原则 教学目的教学目的n掌握掌握 消毒灭菌的概念消毒灭菌的概念n熟悉熟悉 病原学诊断程序病原学诊断程序 常用的消毒灭菌方法及应用常用的消毒灭菌方法及应用n了解了解 病原生物性疾病的预防和控制措施病原生物性疾病的预防和控制措施 第一节第一节 病原学诊断病原学诊断n一、标本采集与运送一、标本采集与运送（二）检验程序（二）检验程序n1.1.直接镜检直接镜检（1 1）细菌的直接镜检）细菌的直接镜检（2 2）病毒的直接镜检）病毒的直接镜检麻疹病毒感染细胞麻疹病毒感染细胞狂犬病病毒形成的内基小体狂犬病病毒形成的内基小体（3 3）寄生虫的

2、直接镜检）寄生虫的直接镜检2.2.分离培养分离培养 分离培养是微生物学诊断的分离培养是微生物学诊断的金标准金标准 是最可靠的传统诊断技术是最可靠的传统诊断技术 寄生虫标本分离培养应用较少寄生虫标本分离培养应用较少(1)(1)细菌的分离培养细菌的分离培养( (2)2)病毒的分离培养病毒的分离培养 3 3）细胞培养细胞培养 （3 3）寄生虫的分离培养）寄生虫的分离培养n不常用不常用n阴道毛滴虫阴道毛滴虫n阿米巴滋养体阿米巴滋养体n利什曼原虫利什曼原虫3.3.培养物的鉴定培养物的鉴定（1 1）生化鉴定）生化鉴定 糖发酵试验糖发酵试验 H2SH2S试验试验 枸橼盐利用试验枸橼盐利用试验n已知的特异性抗

3、体已知的特异性抗体 对细菌（志贺菌属、沙门菌属）对细菌（志贺菌属、沙门菌属）n 群和型的鉴别群和型的鉴别n常用方法常用方法: :玻片凝集试验玻片凝集试验病毒病毒在细胞内在细胞内增殖增殖的检测的检测 1)1)细胞病变效应细胞病变效应（CPE CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死或脱落等细胞变圆、聚集、坏死或脱落等 形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞 在培养细胞中形成包涵体在培养细胞中形成包涵体麻疹病毒感染麻疹病毒感染细胞细胞呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒感染细胞感染细胞2 2）形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞3 3）形成包涵体形成包涵体(inclusion bod

4、y)腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞病毒病毒囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素( (HAHA) )红细胞红细胞表面表面HAHA受体受体风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE( () )埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE( () )1 1. .血凝试验血凝试验：病毒总量（活病毒：病毒总量（活病毒死病毒）死病毒）2.2.蚀斑形成试验蚀斑形成试验（plaque formation test） 3 3. .5050组织细胞感染量组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病

5、毒量感染性病毒量n常用动物常用动物小鼠豚鼠家兔小鼠豚鼠家兔n接种途径接种途径皮内皮下腹腔静脉皮内皮下腹腔静脉脑内鼻腔灌胃脑内鼻腔灌胃n方法方法n纸碟法、试管法、小杯法和凹孔法纸碟法、试管法、小杯法和凹孔法n最低抑菌浓度最低抑菌浓度nminimum inhibitory concentration，MICn能够抑制培养基内细菌生长的最低药物浓度能够抑制培养基内细菌生长的最低药物浓度n最低杀菌浓度最低杀菌浓度nminimum bactericidal concentration，MBCn能够杀灭培养基内细菌的最低药物浓度能够杀灭培养基内细菌的最低药物浓度4.4.其他病原生物诊断方法其他病原生物诊断

6、方法 （1 1）聚合酶链反应聚合酶链反应 用于细菌用于细菌 病毒病毒 寄生虫的病原学诊断寄生虫的病原学诊断 缺点缺点：不易区别病原生物的死活：不易区别病原生物的死活 易出现假阳性易出现假阳性（2 2）核酸分子杂交技术）核酸分子杂交技术（3 3）免疫标记技术）免疫标记技术 用标记的抗体检测相应抗原用标记的抗体检测相应抗原（4 4）免疫印记技术）免疫印记技术 分析病原生物的蛋白质抗原分析病原生物的蛋白质抗原（5 5）DNADNA芯片和蛋白质芯片技术芯片和蛋白质芯片技术（6 6）气液相色谱法）气液相色谱法 厌氧菌检测厌氧菌检测（7 7）噬菌体和细菌素分型诊断技术）噬菌体和细菌素分型诊断技术 检测细菌

7、及分型检测细菌及分型 第二节第二节 免疫学诊断免疫学诊断（一）血清学诊断（一）血清学诊断1.抗体的检测抗体的检测 评价免疫效果评价免疫效果 判断疗效判断疗效 监测疫情监测疫情2.2.抗原的检测抗原的检测 循环抗原检测用于寄生虫病的早期循环抗原检测用于寄生虫病的早期 诊断诊断 活动感染活动感染 判断疗效判断疗效 （二）皮内反应（二）皮内反应 在流行区对可疑患者初筛在流行区对可疑患者初筛 第三节第三节 病原性疾病的预防和控制措施病原性疾病的预防和控制措施 1 1、发现与消灭传染源、发现与消灭传染源 2 2、切断传播途径切断传播途径 3 3、保护易感人群、保护易感人群 1.1.人工主动免疫人工主动免

8、疫 artificial active immunizationn人工的方法给机体人工的方法给机体输入抗原性物质输入抗原性物质（疫苗、类毒素等）使机体（疫苗、类毒素等）使机体主动获得主动获得 特异性免疫力特异性免疫力的方法的方法 获得免疫力较慢获得免疫力较慢 维持时间长维持时间长(1)(1)死疫苗死疫苗（killed vaccine):n 物理、化学方法物理、化学方法杀死病原微生物杀死病原微生物 保持其抗原性保持其抗原性的一种生物制剂的一种生物制剂n常用常用: :伤寒、霍乱、流脑、钩端螺旋体伤寒、霍乱、流脑、钩端螺旋体等。等。n特点特点: : 生产简单、安全、易保存生产简单、安全、易保存 剂量

9、较大剂量较大 免疫维持时间短、需多次接种免疫维持时间短、需多次接种 局部和全身反应较明显局部和全身反应较明显 只激发体液免疫只激发体液免疫 （2 2）活疫苗活疫苗 (living vaccine) :n用用无毒或减毒无毒或减毒的活病原微生物制成的活病原微生物制成n常用常用: :nBCGBCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎、麻疹鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎、麻疹n特点特点 接种一次，用量小，副作用轻接种一次，用量小，副作用轻 免疫效果良好，免疫力持久免疫效果良好，免疫力持久 不易保存，回复突变不易保存，回复突变 免疫缺陷免疫缺陷 孕妇不易接种孕妇不易接种（3 3）类毒素）类毒素n外毒素外毒素-0.3%-0.

10、4%0.3%-0.4%甲醛甲醛-失去毒性失去毒性 保持抗原性保持抗原性-吸附剂（佐剂）氢氧化铝或吸附剂（佐剂）氢氧化铝或 磷铝磷铝-类毒素类毒素 吸附剂可延缓类毒素在体内的吸收时间吸附剂可延缓类毒素在体内的吸收时间 刺激机体产生足量的抗毒素刺激机体产生足量的抗毒素 DPTDPT（白百破）（白百破）3 3联疫苗联疫苗(4)(4)亚单位疫苗亚单位疫苗: :n利用微生物的保护性抗原制成的利用微生物的保护性抗原制成的不含核酸不含核酸、 能诱发机体产生能诱发机体产生中和抗体中和抗体的疫苗的疫苗n 常用常用 肺炎链球菌肺炎链球菌 脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖疫苗脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖疫苗n 特点特点 去除副反应物质

11、去除副反应物质, ,无毒性无毒性 无回复突变危险无回复突变危险 （5 5）DNADNA重组疫苗重组疫苗: :n利用利用DNADNA重组技术制备。将编码某一蛋白抗原重组技术制备。将编码某一蛋白抗原的基因转入的基因转入减毒的病毒或细菌减毒的病毒或细菌而制成的疫苗而制成的疫苗n转入的基因或转入的基因或整合整合到病毒或细菌的基因组上到病毒或细菌的基因组上或以或以质粒质粒的形式存在的形式存在n痘苗病毒是常用的载体痘苗病毒是常用的载体n甲型、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、单纯疱疹甲型、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、单纯疱疹病等重组载体疫苗的研制病等重组载体疫苗的研制（6 6）核酸疫苗核酸疫苗: : DNADNA疫苗疫

12、苗n 编码保护性抗原的基因编码保护性抗原的基因重组重组质粒真核质粒真核 表达载体表达载体注射注射宿主宿主免疫应答免疫应答n优点：优点： 免疫效果好；激发机体全面的免疫应答免疫效果好；激发机体全面的免疫应答 免疫应答持久；制备简便，成本低廉免疫应答持久；制备简便，成本低廉 联合免疫；核酸疫苗便于贮藏和运输联合免疫；核酸疫苗便于贮藏和运输 具备预防和免疫治疗的双重功能具备预防和免疫治疗的双重功能 缺点：缺点： 安全性问题；可能诱导自身免疫性疾病安全性问题；可能诱导自身免疫性疾病核酸疫苗与常规疫苗核酸疫苗与常规疫苗常规疫苗常规疫苗：抗原是灭活或减毒活病原体或：抗原是灭活或减毒活病原体或 病原体亚单位

13、蛋白病原体亚单位蛋白核酸疫苗核酸疫苗：病原体某种抗原的基因片段：病原体某种抗原的基因片段 兼具亚单位疫苗的安全性和减毒兼具亚单位疫苗的安全性和减毒 活疫苗诱导全方位免疫应答的活疫苗诱导全方位免疫应答的 高效性高效性(7)(7)治疗性疫苗治疗性疫苗n用于治疗慢性细菌性疾病、肿瘤、过敏性用于治疗慢性细菌性疾病、肿瘤、过敏性 疾病的治疗。疾病的治疗。n预防性疫苗预防性疫苗：接种对象为健康人群，微生物：接种对象为健康人群，微生物 保护性抗原，成分单纯，用于保护性抗原，成分单纯，用于 免疫预防，对机体无明显的病理免疫预防，对机体无明显的病理 损伤，安全可靠。损伤，安全可靠。 n治疗性疫苗治疗性疫苗：接种

14、对象为持续性感染患者：接种对象为持续性感染患者 或带菌者，成分可根据需要或带菌者，成分可根据需要 进行组合和调整，可伴有进行组合和调整，可伴有 免疫损伤等不良反应免疫损伤等不良反应2.2.人工被动免疫人工被动免疫 artificial passive immunizationn输入含有输入含有特异性抗体特异性抗体的的 免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或或 细胞因子细胞因子等免疫制剂，等免疫制剂， 使机体使机体立即获得特异性免疫力立即获得特异性免疫力的过程的过程n（1 1）抗毒素抗毒素: :n类毒素类毒素( (外毒素外毒素)-)-马马-多次免疫多次免疫 高效价抗毒素高效价

15、抗毒素-分离血清分离血清-免疫球蛋白免疫球蛋白 -抗毒素制剂抗毒素制剂 用途用途: :外毒素所致疾病的治疗和应急预防外毒素所致疾病的治疗和应急预防 常用常用: :破伤风、白喉精制抗毒素、破伤风、白喉精制抗毒素、 肉毒抗毒素肉毒抗毒素 气性坏疽多价抗毒素等气性坏疽多价抗毒素等 注意注意 I I型超敏反应问题型超敏反应问题（2 2）丙种球蛋白丙种球蛋白: :正常人血浆中提取的丙种球蛋白制剂正常人血浆中提取的丙种球蛋白制剂胎盘丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白: :健康产妇的胎盘血液中提制而成，主要含健康产妇的胎盘血液中提制而成，主要含有丙种球蛋白。有丙种球蛋白。用途用途: :某些疾病的应急预防及烧伤患者某些

16、疾病的应急预防及烧伤患者 预防细菌感染预防细菌感染 丙种球蛋白缺乏症患者丙种球蛋白缺乏症患者 长期化疗或放疗的肿瘤患者长期化疗或放疗的肿瘤患者（3 3）抗菌免疫血清）抗菌免疫血清: : 多重耐药菌株所致疾病的治疗多重耐药菌株所致疾病的治疗 铜绿假单胞菌等铜绿假单胞菌等（4 4）细胞免疫制剂：）细胞免疫制剂： 干扰素、白细胞介素、淋巴因子激活的干扰素、白细胞介素、淋巴因子激活的 杀伤细胞（杀伤细胞（LAK)LAK)细胞细胞 第四节第四节 消毒灭菌消毒灭菌( (一一) )热力灭菌法热力灭菌法 高温高温: : 致死作用致死作用-蛋白质及酶变性、凝固蛋白质及酶变性、凝固 核酸断裂核酸断裂热力灭菌法热力

17、灭菌法: :n干热灭菌干热灭菌n湿热灭菌湿热灭菌1.1.干热灭菌：干热灭菌： 干热的杀菌作用是通过干热的杀菌作用是通过 脱水干燥脱水干燥和和大分子变性大分子变性 (1)(1)焚烧法：焚烧法： 是一种彻底的灭菌方法是一种彻底的灭菌方法 适用于适用于废弃物品或动物尸体废弃物品或动物尸体（2 2）烧灼法：）烧灼法：直接用火焰灭菌直接用火焰灭菌 适用于适用于接种环接种环 试管口等的灭菌试管口等的灭菌（3 3）干烤法：）干烤法：干烤箱内加热至干烤箱内加热至160-1702h160-1702h 适用于适用于 玻璃器皿、瓷器、注射器玻璃器皿、瓷器、注射器 （4 4）红外线：）红外线：电磁波电磁波(0.7-1

18、000(0.7-1000 m)m) 1-101-10 m m波长的热效应最强波长的热效应最强 只在照射表面产生只在照射表面产生 适用于适用于 不耐高温不耐高温医疗器械的灭菌医疗器械的灭菌 （剪刀（剪刀 镊子镊子 玻璃注射器玻璃注射器）2.2.湿热灭菌：湿热灭菌：利用热蒸汽的高温使微生物的利用热蒸汽的高温使微生物的 蛋白质变性蛋白质变性（1 1）煮沸法）煮沸法: : 100100水浴，水浴，5min5min 食具、刀尖等食具、刀尖等消毒消毒（2 2）巴氏消毒法：）巴氏消毒法：用用较低温度较低温度杀灭液体中杀灭液体中 的病原菌或特定微生物，而保持物品中的病原菌或特定微生物，而保持物品中 不耐热成分

19、不被破坏不耐热成分不被破坏n61.161.1 -62.8 -62.8 30min; 71.7 30min; 71.7 15-30s 15-30sn适用于适用于 牛乳制品、酒类等牛乳制品、酒类等的消毒的消毒（3 3）间歇蒸汽灭菌法：）间歇蒸汽灭菌法：反复多次流动蒸气消毒法反复多次流动蒸气消毒法 不耐热不耐热含糖、牛奶含糖、牛奶等培养基等培养基 （75-80 30-60min75-80 30-60min）（4 4）高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法：121.3 121.3 汽浴汽浴 （103.4kPa103.4kPa）151530min30min 培养基、生理盐水、手术敷料等培养基、生理盐水、手术敷料等

20、 耐高温、耐湿物品耐高温、耐湿物品的灭菌的灭菌 n干热灭菌干热灭菌和和湿热灭菌湿热灭菌，在同一温度下，在同一温度下n后者比前者的效力大后者比前者的效力大 这是这是因为因为：n* *湿热中菌体蛋白易凝固湿热中菌体蛋白易凝固n* *湿热的穿透力比干热强湿热的穿透力比干热强n* *湿热的蒸汽具有潜热湿热的蒸汽具有潜热（二）辐射杀菌法（二）辐射杀菌法n1.1.紫外线杀菌紫外线杀菌n波长波长240-300nm240-300nm的紫外线有杀菌作用的紫外线有杀菌作用n其中以其中以265-266nm265-266nm最强最强* *杀菌机制杀菌机制：形成形成TT,TT,干扰干扰DNADNA的复制与转录的复制与转录* *杀菌作用特点：杀菌作用特点：穿透力弱，表面消毒穿透力弱，表面消毒* *适用范围：适用范围：手术室、传染病房、细菌实验室手术室、传染病房、细菌实验室 的的空气空气消毒消毒, ,不耐热物品的不耐热物品的表面表面 消毒消毒2.2.电