药物分析 第二章鉴别

1、第二章药物的鉴别试验第二章药物的鉴别试验 基基 本要求本要求 一一、掌握鉴别试验的原理、掌握鉴别试验的原理、基本方法基本方法 二、熟悉鉴别试验的影响因素与注意事项二、熟悉鉴别试验的影响因素与注意事项 三、了解鉴别试验方法的验证。三、了解鉴别试验方法的验证。 它是药检工作的首药检工作中的它是药检工作的首药检工作中的首先项任务首先项任务，只有在只有在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物的杂质检查、含量药物鉴别无误的情况下，才能进行药物的杂质检查、含量测定。测定。 药物鉴别试验是用来证实贮藏在有标签容器中的药物药物鉴别试验是用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所表示的药物，而不是对未知物进行定性分

2、析，是否为其所表示的药物，而不是对未知物进行定性分析，因为这些鉴别试验虽有一定的因为这些鉴别试验虽有一定的专属性专属性，但不具备进行未知但不具备进行未知无确证的条件，故无确证的条件，故不能不能鉴别未知物。鉴别未知物。举列举列: :天麻天麻 鉴别要点鉴别要点: :莺哥嘴莺哥嘴 横点纹横点纹( (市场有人有土豆市场有人有土豆做假做假) ) 第一节药物鉴别试验的定义与目的第一节药物鉴别试验的定义与目的 2010版凡例中对药物鉴别的定义为：鉴别项下规定的试验方法，仅反映该药品某些物理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。 化学药物的结构确证是确认所制备原料药的结构是否正确，适用

3、于未知化合物的鉴别或目标对象的结构确认。第二节第二节 药物鉴别的项目药物鉴别的项目药物的鉴别试验包括：性状和鉴别药物的鉴别试验包括：性状和鉴别一、性状（一、性状（definition)聚集状态、晶形聚集状态、晶形 外观外观色泽色泽臭、味臭、味: 、 极易溶：极易溶：1份溶质在不到份溶质在不到1份溶剂中溶解份溶剂中溶解 易溶：易溶： 1份溶质在份溶质在1份份不到不到10份溶剂中溶解份溶剂中溶解 溶解溶解: 1份溶质在份溶质在10份份不到不到30份溶剂中溶解份溶剂中溶解 溶解度溶解度 略溶略溶: 1份溶质在份溶质在30份份不到不到100份溶剂中溶解份溶剂中溶解 微溶微溶: .在在100份份不到不到

4、1000份溶剂中溶解份溶剂中溶解 极微溶解极微溶解:在在1000份份不到不到10000份溶剂中溶解份溶剂中溶解 几乎不溶或不溶：几乎不溶或不溶：10000份溶剂中不完全溶份溶剂中不完全溶 物理常数物理常数: 相对密度、馏程、熔点、比旋度、吸收系数相对密度、馏程、熔点、比旋度、吸收系数 、 折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羟值折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羟值 第一法：测定易碎的固体药品第一法：测定易碎的固体药品 熔点熔点 第二法：测定不易碎的固体药品（脂肪酸、石蜡等）第二法：测定不易碎的固体药品（脂肪酸、石蜡等） 第三法：测定凡士林或其他类似的物质第三法：测定凡士林或其他类似的物质 熔点

5、系指一种物质按规定方法测定，由固体熔化成液体的温度或融熔同时分解的温度或在熔化时初熔至全熔经历的温度范围。 测定熔点的药品，应是遇热晶型不转化，其初熔点和终熔点容易分辨； 融熔同时分解是指某一药品在一定温度产生气泡、上升、变色或浑浊等现象。 药品的熔点与分子结构有关，当构成晶格的单位（对有机化合物来说一般是分子，无机化合物的是离子或原子组成）受热，动能增加到足以克服各单位间相互作用力即格子力，晶格崩溃涣散，这时的 温度就是固体的熔点。每种纯的固体有机化合物都有自己的独特的晶型结构和分子间力，因此要熔化固体，就需要一定的热能，所以每种固体物质都有独特的熔点。 熔点在一定程度上反映了物质固态时的格

6、子力大小。凡这种力越大，其熔点越高。格子力大小受分子间作用力的 本性、分子结构与性状以及晶格类型三种因素的支配，因此有些结晶性固体物质，其化学结构相同，但晶型不同，熔点也就不同。 熔点是多数有机药物的重要物理常数 一般未注明者均指“第一法” 测定时根据供试品熔融同时分解与否，调节传温液的升温为2.5-3.0min或1.01.5 min。要求报告: 初熔-供试品在毛细管内开始局部液 化出现明显液滴时的温度。 全熔-供试品全部液化时的温度 注意：（1）化合物分子中引入能形成氢键的官能 团后，其熔点升高；（2）同系物中，熔点随分子量的增大而升 高；（3）分子结构越对称，越有利于排成整齐 形式，造成更

7、大的格子力，则熔点越 高。 比旋度：比旋度：指在一定波长下，偏振光透过指在一定波长下，偏振光透过1dm且每且每1ml中含有中含有 旋光性物质旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。可用于鉴的溶液时测得的旋光度。可用于鉴 别药物、检查药物的纯度和含量测定。别药物、检查药物的纯度和含量测定。 nTD = 100/dL 摩尔吸收系数摩尔吸收系数=A/CL 吸收系数吸收系数 百分吸收系数（百分吸收系数（Ch.P收载的方法）收载的方法）E1%1cm=A/CL 是指依据一类药物的化学结构或理化特性，是指依据一类药物的化学结构或理化特性，通过化学反应鉴别药物的真伪。通过化学反应鉴别药物的真伪。注意注意:只能证实

8、是某一类药只能证实是某一类药,而不能证实是哪一种药而不能证实是哪一种药?ChP附录中有：附录中有：丙二酰脲类丙二酰脲类、托烷生物碱类托烷生物碱类、 芳香芳香 第一胺类第一胺类、有机氟类等有机氟类等、二、一般鉴别试验二、一般鉴别试验 （general identification test）1.1.有机氟化物有机氟化物有机氟有机氟氧瓶燃烧氧瓶燃烧无机氟离子无机氟离子pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈蓝紫色蓝紫色络合物络合物2. 有机酸盐有机酸盐(1) 水杨酸水杨酸水杨酸水杨酸 + FeCl3中性条件中性条件弱酸性条件弱酸性条件红色配位化合物红色配位化合物紫色配位化合物紫色配位化合物(2

9、) 酒石酸盐酒石酸盐供试品溶液（中性）供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银氨制硝酸银水浴中水浴中 银镜银镜3.3.芳香第一胺类芳香第一胺类供试品供试品+ 稀盐酸稀盐酸 亚硝酸钠亚硝酸钠碱性碱性 - -萘酚试液萘酚试液红色到猩红色红色到猩红色 4.4.托烷生物碱类托烷生物碱类 此类生物碱中具有莨菪酸结构，有此类生物碱中具有莨菪酸结构，有VitaliVitali反应反应, ,显紫色。显紫色。 5.5.无机金属盐（无机金属盐（Na, K, Ca)Na, K, Ca) 焰色反应：焰色反应：NaNa显鲜黄色；显鲜黄色；K K显紫色；显紫色；CaCa显砖红色显砖红色 铵盐：铵盐： 供试品供试品 + NaOH

10、氨臭氨臭使湿润的使湿润的红色石蕊红色石蕊试纸变蓝试纸变蓝使硝酸亚汞试液湿使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色润的滤纸显黑色6. 无机酸根无机酸根 氯化物：氯化物： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色乳白色 硫酸盐：硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色三、专属鉴别试验三、专属鉴别试验 (specific identification test) 证实某一种药物的依据，是根据每一种药物的化证实某一种药物的依据，是根据每一种药物的化 学结构的差异或理化性质的不同，选用某些特有的灵敏学结构的差异或理化性质的不同，选用某些特有的灵敏 的定性反应，来鉴别药物的真伪。的定性反应，来鉴别药物的

11、真伪。 综上所述，一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真为的鉴别，以区别不同类别的药物。专属鉴别试验是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。第三节第三节 鉴别方法鉴别方法一、化学鉴别法一、化学鉴别法 三氯化铁呈色反应三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 异羟戊酸铁反应异羟戊酸铁反应(Ar-COOH;-COOR) 1. 显色反应鉴别法显色反应鉴别法 茚三酮呈色反应茚三酮呈色反应(脂肪氨基，脂肪氨基，氨基酸）氨基酸） 重氮化重氮化-

12、偶合呈色反应偶合呈色反应(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化还原显色反应及其它颜色反应氧化还原显色反应及其它颜色反应 与金属离子的沉淀反应与金属离子的沉淀反应 2. 沉淀生成鉴别法沉淀生成鉴别法 与硫氰化铬铵的沉淀反应与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应其它沉淀反应(如生物碱沉淀剂）如生物碱沉淀剂） 药物本身在可见光下发射荧光药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光 3. 荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 药物与溴反应后，在可见光下发出荧光药物与溴反应后，在可见光下发出荧光 药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光

13、 药物其它反应后，发射出荧光药物其它反应后，发射出荧光 制备衍生物：制备衍生物： 药物试剂药物试剂 具有荧光的衍生物具有荧光的衍生物 胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理 生成氨气生成氨气 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 含硫药物经强酸处理后，加热，生成硫含硫药物经强酸处理后，加热，生成硫 4. 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 化氢气体化氢气体(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有机药物，加热。生成紫色碘蒸汽含碘有机药物，加热。生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后，加含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后，加 乙醇可产生乙酸乙酯乙醇可产生乙酸

14、乙酯5、制备衍生物测定熔点法、制备衍生物测定熔点法 药物试剂药物试剂 新化合物有一定新化合物有一定mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时 间，应用较少。间，应用较少。二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度1.紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收系数法 规定吸收波长和吸收度比值法规定吸收波长和吸收度比值法 经化学处理后经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱

15、特性测定其反应产物吸收光谱特性例例P77 压片法压片法2. 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 糊法糊法 膜法膜法 溶液法溶液法在用在用IR光谱进行鉴别试验时，光谱进行鉴别试验时，ChP2010采用标准图谱对照法采用标准图谱对照法 TLC 法法 （Rf样样Rf对对） 三、三、 色谱鉴别法色谱鉴别法 PC法法 HPLC法法 （tR样样tR对对） GC法法 在ChP2010中，对TLC鉴别法在斑点的颜色、位置、与斑点大小方面做出了明确要求：1、供试品与同浓度对照品颜色（或荧光）与位置（Rf）应一致，斑点大小应大致相同；2、供试品与对照品等体积混合，应显示单一，斑点紧密；或供试品溶液的主斑点与上述混合液的

16、主斑点的颜色与位置一致，大小相似；3、选用与供试品化学结构相似药物对照品或杂质对照品，两者的比移值应不同；4、上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。注意事项：1、由于受薄层板质量、边缘效应等因素的影响，实际操作中有时会遇到同一物质在同一薄层板上的Rf值不一的情况，操作中可增加将供试品溶液与对照品溶液等量混合，点样后出现单一斑点作为鉴别依据。2、单独使用TLC鉴别时，需要进行色谱系统适应性试验内容，对斑点的比移值和分离效能进行考察。必要时进行灵敏度考察。3、TLC法除色谱行为外，还可将斑点颜色作为鉴别依据，由以上两个因素把握供试品与对照品的同一性，简单易行，是一个鉴别的好方法。四、原

17、子吸收法（AAS法）五、核磁共振法（NMR法）六、质谱法（MS法）七、X射线粉末衍射法八、指纹图谱与特征图谱鉴别法八、指纹图谱与特征图谱鉴别法P91 通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。 具体是采用指纹图谱模式，将中药内在物质特性转具体是采用指纹图谱模式，将中药内在物质特性转化为常规数据信息，用于中药鉴别和质量评价。化为常规数据信息，用于中药鉴别和质量评价。注意：注

18、意：1、中药尤其是复方制剂，成分复杂，如果要求中药成分分、中药尤其是复方制剂，成分复杂，如果要求中药成分分 析图谱始终不变是不合逻辑的；析图谱始终不变是不合逻辑的； 2、不同制药企业对同种药材工艺不能保证一致，要求同一、不同制药企业对同种药材工艺不能保证一致，要求同一 个品种用同一个指纹图谱来进行质量控制几乎是做不到。个品种用同一个指纹图谱来进行质量控制几乎是做不到。 3、特征图谱通常是指主要有效成分的特征峰谱图，而指纹、特征图谱通常是指主要有效成分的特征峰谱图，而指纹 图谱除了有效成分的特征峰外，还包括更多内容、更专图谱除了有效成分的特征峰外，还包括更多内容、更专 一性。一性。 九、生物学法

19、九、生物学法P89 是利用药效学和分子生物学等有效是利用药效学和分子生物学等有效 技术来鉴技术来鉴定药物品质的方法。定药物品质的方法。十、显微鉴别法十、显微鉴别法P88 主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的切片（饮片）、粉末、解离组织或微镜对药材的切片（饮片）、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片组织、表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片组织、细胞或含物等特征进行鉴别的方法。细胞或含物等特征进行鉴别的方法。第四节第四节 鉴别试验条件及方法验证鉴别试验条件及方法验证（一）溶液的浓度一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；（如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的温度（二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。 （三）溶液的酸碱度三）溶液的酸碱度 试反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和