实验七微生物板直接计数法和测微技术

1、1 1明确显微镜计数的原理并学习使用血球计明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。数板进行微生物计数的方法。2 2学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法，增强对微生物细胞大小的感性认识。法，增强对微生物细胞大小的感性认识。 一一. .实验目的实验目的实验七实验七 微生物直接计数法微生物直接计数法 和测微技术和测微技术 二、基本原理二、基本原理 1 1血球计数板计数原理血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的血球计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的又被一短的横台，中间较宽的又被一短的横槽隔

2、成两半，每边平台上刻有槽隔成两半，每边平台上刻有一个一个方格网方格网，每个方格网共分，每个方格网共分九个大方格，九个大方格，中间的大方格即中间的大方格即为计数室为计数室。 每个大方格边长为每个大方格边长为1 1mmmm，盖上盖玻片后，盖玻盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为片与载玻片之间的高度为0 0.1mm.1mm，所以计数室的容所以计数室的容积为积为0.10.1mmmm3 3（1 11010-4-4mlml）。）。 每个大方格由每个大方格由2525个中方格或个中方格或1616个中方格组个中方格组成。计数时通常统计成。计数时通常统计5 5个（个（或或4 4个个）中方格的细）中方格的细菌数

3、，再换算成菌数，再换算成1 1mlml样品中的细菌数。样品中的细菌数。1ml1ml样品中的总菌数样品中的总菌数= =A/5A/5(4)(4)2525(16)(16)10104 4B B A A：5 5个（个（或或4 4个个）中方格中的总菌数）中方格中的总菌数 B B：菌液稀释倍数（：菌液稀释倍数（本实验为本实验为100100倍倍）2 2测微尺的使用原理测微尺的使用原理 目镜测微尺是一块可放目镜测微尺是一块可放入入接目镜接目镜内的圆形小玻片，内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，其中央有精确的等分刻度，分分5050和和100100两种，通过镜台两种，通过镜台测微尺校正后，可测微尺校正后，可用于

4、测量用于测量细菌的大小细菌的大小。测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将玻片，一般是将1 1mmmm分为分为100100格，每格格，每格0.010.01mmmm（即即1010mm），），用于校正目镜测微尺每格的相对长度用于校正目镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺每格长度目镜测微尺每格长度(m)=（镜台测微尺格数镜台测微尺格数10 m ）/目镜测微尺格数，如：目镜测微尺格数，如：(1010 m /60)三、实验材料三、实验材料1 1菌种菌种 啤酒酵母、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆

5、菌。啤酒酵母、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。2 2仪器或其它用具仪器或其它用具 血球计数板、显微镜、盖玻片、载玻片、目镜血球计数板、显微镜、盖玻片、载玻片、目镜 测微尺、镜台测微尺、无菌毛细滴管等。测微尺、镜台测微尺、无菌毛细滴管等。1. 1. 啤酒酵母菌显微计数啤酒酵母菌显微计数 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖血盖片。（血球计数板不可刷洗也不可擦水）片。（血球计数板不可刷洗也不可擦水）。 取酵母菌液，摇匀。用滴管取酵母菌液，摇匀。用滴管在盖玻片边缘在盖玻片边缘滴一小滴，滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。使菌液自行渗入，计数室内

6、不得有气泡。 用用1010镜观察并将计数室移至视野中央。镜观察并将计数室移至视野中央。 在在1010或或4040镜下计数镜下计数5 5 个（或个（或4 4个）中格的菌数。个）中格的菌数。 然后求得然后求得5 5 个（或个（或4 4个）中格的总菌数，再按公式个）中格的总菌数，再按公式计算求得每计算求得每mlml菌液中的含菌数。菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计半计半。四、操作步骤四、操作步骤 目镜测微尺的校正目镜测微尺的校正 校正并计算校正并计算1010、4040、100100镜目镜测微尺每镜目镜测微尺每小格的实际长度。小格的实际长度

7、。 酵母菌体大小的测定酵母菌体大小的测定 用于计数的啤酒酵母菌的制片用于计数的啤酒酵母菌的制片（可用计数的血球（可用计数的血球计数板）计数板）置于载物台上，在置于载物台上，在4040镜镜下用目镜测微下用目镜测微尺测量并计算菌体的长和宽。尺测量并计算菌体的长和宽。 金黄色葡萄球菌和枯草杆菌大小的测定金黄色葡萄球菌和枯草杆菌大小的测定 将金黄色葡萄球菌和枯草杆菌分别进行简单染色将金黄色葡萄球菌和枯草杆菌分别进行简单染色后，选取后，选取5 5个菌体在个菌体在100100镜镜下分别测定下分别测定单个细胞单个细胞直径和长度、宽度，分别计算其平均大小。直径和长度、宽度，分别计算其平均大小。2. 2. 微生

8、物大小的测定微生物大小的测定五、预期结果五、预期结果1. 1. 目镜测微尺标定结果目镜测微尺标定结果 10 10镜下目镜测微尺每格长度是镜下目镜测微尺每格长度是 1010 mm。 40 40镜下目镜测微尺每格长度是镜下目镜测微尺每格长度是 2.52.5mm。 100 100镜下目镜测微尺每格长度是镜下目镜测微尺每格长度是 1 1 mm。 注意：保留小数点后二位。注意：保留小数点后二位。2. 2. 微生物大小测定结果微生物大小测定结果序序号号酵母菌酵母菌金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌枯草杆菌枯草杆菌目镜尺格目镜尺格数数实际大小实际大小目镜目镜尺格尺格数数实际实际直径直径/m m目镜尺格数目镜尺格数

9、实际大小实际大小短轴短轴长轴长轴短轴短轴/m/m长轴长轴/m/m宽宽长长 宽宽/m m长长/m m1 12 23 34 45 5均值均值467100.8-10.8-11-.1.524计数室计数室5 5个中格的菌数个中格的菌数A A二室平均值二室平均值 每毫升酵母菌液的总菌每毫升酵母菌液的总菌数（个数（个/mL)第一室第一室第二室第二室3. 显微计数结果显微计数结果 记录于下表中。记录于下表中。A A表示五个中方格中的总表示五个中方格中的总菌数。菌数。 每毫升酵母菌液中的总菌数（个）每毫升酵母菌液中的总菌数（个） =(/5) =(/5)252510104 4100100下次实验内容下次实验内容

10、微生物的接种技术及分离纯化微生物的接种技术及分离纯化问题与讨论问题与讨论 1 1、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行效正？进行效正？P48,(1)P48,(1) 2 2、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计存活率，请设计1-21-2中可行的检测方法。中可行的检测方法。P92,(2)P92,(2)上次试验习题解答上次试验习题解答 1 1、你主要根据哪些形态特征来区分上述、你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？四种霉菌？P46,P46,

11、（1 1） 四种霉菌的异同如下：曲霉，外生孢子（分四种霉菌的异同如下：曲霉，外生孢子（分生孢子），有足细胞，菌丝有隔；青霉：外生孢生孢子），有足细胞，菌丝有隔；青霉：外生孢子（分生孢子），为扫帚状，菌丝有隔，相对较子（分生孢子），为扫帚状，菌丝有隔，相对较细；根霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔，细；根霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔，有匍匐枝和假根；毛霉：内生孢子（孢囊孢子），有匍匐枝和假根；毛霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔。菌丝无隔。 2 2、你认为在显微镜下，细菌，放线菌，酵、你认为在显微镜下，细菌，放线菌，酵母菌和霉菌的主要区别是什么？母菌和霉菌的主要区别是什么？P46,P46,（2 2） 细菌较小，一般球状、杆状等，需要使用油细菌较小，一般球状、杆状等，需要使用油镜进行观