Agilent气质联用仪软件定量方法图示解析

1、AgilentTechnologiesInnovatingHPWay实验室练习6：数据定量分析在这个实验中，您将建立具有三个浓度级别的校正数据库,并将其保存为方法的一部分。该方法用于未知物的定量计算。在这个实验中：获取所需信息以设置校正方法建立一个5个浓度级别的含内标的校正数据库定量一个未知化合物对以下化合物进行定量：73内标目标化合物TributylphosphateAcetamide,N-phenylphenacetincaffein积分精确定量的重要因素之一是正确积分。1) 通过选择File/LoadDataFile调用C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV020.D文件，选

2、择Method/LoadMethod.调用DEFAULT.M方法。2) 选择Chromatogram/SelectIntegrator及RTEIntegrator单击OK。OK对积分来说只是临时选择。现在让我们对caffein设定积分参数。3) 选择Chromatogram/ExtractIonChromatograms.完成图1所示的需要输入的项目(注意时间范围)单击OK。图14)现在编辑RTE的缺省积分参数。选择Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters.完成图2所示的要输入的项目。须知当欲在最小峰面积(minimumpeakarea)中添入大于1

3、00的数之前必须选中AreaCounts选项框。图25) 单击OK接受所做的改变。现在通过选择Chromatogram/Integrate用这些参数做积分。注意离子194被积分，而离子67没有被积分。让我们降低最小面积来解决这一问题。6) 选择Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters.完成图3中所示的各项内容。图37)单击Save.和OK输入积分文件名字VOLATILE.P，单击OK。图48) 在积分参数框中单击OK返回离子质量色谱。在Chromatogram/Integrate用降低后的最小峰面积参数做积分。注意此时离子67和194都被积分了。现在

4、我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。9) 选择Chromatogram/DrawChromatogram查看当前数据文件的TIC图。实验室练习6：数据定量分析建立校正曲线：建立校正曲线：无论SCAN和SIM方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。用提取离子定量比用TIC精度更高。TIC则用于开始设置校正参数时确定保留时间。1) 选择Calibrate/SetUpQuantitation.。2) QuantitationDatabaseGlobals对话框会显示出来。完成图5中所需填入的内容。图5注意标有NOTICE处用了RTE积分参数文件。3)

5、完成后单击OK。EditCompounds框(图6)会显示出来:77EditCompoundsKbeforeCompoundNarnedenotesISTD打沾H百Ei匸洋1ExitIH已Ip图64)单击InsertAbove,图7会显示出来：图7注意:必须首先输入内标。所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。5）将7-13分钟范围内的色谱图放大在窗口中。对准窗口2中10.7分钟处双击鼠标右键。在屏幕上会出现什么信息？注意保留时间（箭头在X轴的位置）被填写在QuantSetup窗口。同时所指定保留时间的质谱显示在窗口1。6）输入化合物名称。填入化合物名称。第二个化合物是Tri

6、butylphosphate大约在10.7分钟。注意如果使用氘代内标时区分定量，化合物是靠信号而不是保留时间，因为内标和要定量的化合物共流出，因此峰会重叠。ISTD选项被选中。7）将箭头移到窗口将箭头放在M/Z93上同时击鼠标左右键。会发生什么？8）用同样方法输入一个或几个特征离子。对于Tributylphosphate,特征离子是135。9）全部输入之后，在QuantSetup窗口底部击Save键。这就完成了需要在定量数据库中添加单个化合物的任务。10）重复以上步骤，把表1中每个化合物输入定量数据库。（注意Tributylphosphate已经输入了。）化合物名称内标近似的保留时间目标离子特

7、征离子TributylphosphateYes10.799155、211Acetamide,N-phenyl8.593135phenacetin11.1108109、179、137caffein12.2194109、67表111）最后一个化合物输入并保存之后，在定量设置栏目击Exit。EditCompounds画面（图9）再次显现。注意此时化合物的列出顺序。定量化合物永远在内标之后（不管保留时间！）有4个化合物列于表中。如有遗漏，点击遗漏的化合物，然后单击InsertAbove.。当定量设置栏再次出现时输入化合物名字，保留时间，目标/特征离子。然后单击Save并单击Exit。一旦4个化合物全部

8、输入，单击Exit退出编辑化合物对话框（图9）。12）系统提示目前的文件尚未定量。单击Yes对文件定量。我们已经添加了化合物信息，现在要添加校正信息。13）UpdateCalibration对话框（图8）如下：图814）在UpdateCalibration选项框中，为该校正级别输入一个标识。缺省值是数字（如“1”）但也可以输字母（如“Low”）。为该级别输入化合物浓度（20）注意已经填入了ISTD浓度。我们在哪里输入过这个量？15）单击DoUpdate键。定量更新程序会提取指定离子并对其进行RTE积分。该信息存放在定量数据库中。EditCompounds画面（图9）显示出来。EditCompo

9、uinidsInriRYRftl.TimfiCnmnnnnfiNamp7.910*Brcmochloromethane23-56匕LHUVinylLhloride10.130Chlcroform13.200*l-Difluorbenzene13.10CBromadichlcromethane15.980LLS-TrlchloroethanebefaireCurmpQuriiitJNdmicdenotesISTDInsertAboveDelete16）单击View键查看三页定量信息。在第3页对错误的值进行编辑。17）Next键用来查看第二个化合物的条目。单击OK离开该画面，而单击Exit退出Ed

10、itCompounds面板回到数据分析。现在我们拥有了含一个级别的校正数据库。下一步是为校正数据库添加第二个浓度级别。实验室练习6：数据定量分析建立多浓度级别校正数据库实验室练习6：数据定量分析建立多一浓度级别校正数据库建立多一浓度级别校正数据库1) 调用数据文件C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV050D。2) 选择Calibrate/Update./UpdateOneLevel/OK系统将提示该数据文件未定量，单击Yes进行定量。3) 下一步进入UpdateCalibration对话框。将浓度改为50,将校正级别改为2,单击DoUpdate.自动为数据库插入新浓度级别。4)

11、Exit退出editcompounds界面。从这一标准校正曲线更换保留时间和离子比例，会改写原来用光标输入的和这一标准的微小差别。5) 选择Calibrate/Update./UpdateOneLevel/OK填写图10所示各项内容，单击DoUpdate。图106)按照1)至5)步骤输入下列浓度级别。不必再次输入保留时间和离子比例。数据文件和化合物浓度列于表2中：数据文件浓度浓度级别号CLWV100.D100ppm3CLWV150.D150ppm4CLWV200.D200ppm5表2内标浓度与前两个标样相同(50ppm)。7) 5个浓度级别输入之后，单击View以便检查浓度是否正确。8) 选择

12、第一个化合物，单击Plot看它的标准曲线，包括其校正因子和相关系数。出现什么信息？由于画内标化合物的曲线是无意义的，您不可能画出内标化合物的校正曲线，为什么内标化合物曲线是无意义的？9) 在Compound窗口单击Next(如必要击OK保存更改)画面，化合物#2以校验该化合物的第二个浓度级别的数据。在Plot窗口单击Print打印(这是获得方法文件的较好途径)。10) 打印之后击OK,改变线性拟合方式取得最佳平均响应因子(AvgofResponseFactors)，再做曲线。反复用LinearRegr，Force(0,0)拟合包括原点在内的各点，加以比较。重新设置拟合方式AvgofRespon

13、seFactors。对本次分析何种拟合方式更可靠，为什么？11) 查看过三页化合物信息之后，选OK然后Exit退出该窗口。该校正数据库当前存储在计算机RAM中，所以下一步是使其永久保存于硬盘中。校正数据库作为方法的一部分保存。12) 选择Method/SaveMethod.。13) 为新方法命名为CLASSVOA.M。建立了新方法，原来的方法(DEFAULT.M)未改变。我们常用现有的方法作为模板建立新方法。方法自动存储在缺省地址C:MSDCHEMnMETHODS这里n是仪器编号。#使用自动定量设置建立多浓度级别校正数据库使用自动定量设置AutoQuantSetup（自动定量设置）提供了一种给

14、定量数据库创建化合物列表的半自动方法。下列指南可引导您使用AutoQuantSetup（自动定量设置）的全部步骤。该指南使用化学工作站随附的演示文件。在该指南中使用default.m和evaldemo.d之前，请先复制一份。1. 在DataAnalysis（数据分析）中，加载示范方法C:MSDCHEM1METHODSDEFAULT.M和示范数据文件C:MSDCHEM1DATAEVALDEMO.D。2. 在Spectrum/SelectLibrary（谱图/选择谱库）下选择DEM0.L。3. 选择Calibrate/AutoQuantSetu（校准/自动定量设置）。4. 出现Quantitati

15、onDatabaseGlobals（全局定量数据库）对话框时，进行如下更改：校准标题键入AutoQuantTutorial使用RTEINT选中该对话框来使用RTE积分器（不选则使用化学工作站积分器）。单击OK（确定）。5. 出现Dodecane（十二烷）的ChooseCompoundName（选择化合物名称）对话框时，单击Skip（跳过）。为了示范，您可以先跳过这个化合物，以后再把它添加到数据库中。6. 接下来出现Biphenyl（联苯）。保持缺省名称，单击Add（添加）。7. 接着出现4-Chlorobiphenyl（4-氯联苯）。保持缺省名称，单击Add（添加）。8. 接着出现Methyl

16、palmitate（十六酸甲酯）。要将它指定为内标，单击ISTD（内标）。单击ISTD同时把化合物添加到数据库中。9. 当软件提示Quantitatenow?（现在定量？）时，单击Yes（是）。文件量化后，出现UpdateCalibration（更新校准）对话框。10. 选择AddNewLevel（添加新校准级），输入如下内容：CalibLevelID=50CmpdConc=50ISTDConc=50然后单击DoUpdate（执行更新）。11. 显示EditCompounds（编辑化合物）对话框时，注意十六酸甲酯处于列表顶端的正确位置，在其名称旁边有一个星号说明它是内标。12. 单击Exit（

17、退出）关闭对话框，或单击View（査看）检查第1页、第2页和第3页中的各化合物参数。13. 要了解怎样向定量数据库中插入化合物，请选择AutoQuantSetup（自动定量设置）。14. 选择InsertCompoundsinDatabase（在数据库中插入化合物），单击OK（确定）。15. 出现QuantitationDatabaseGlobals（全局定量数据库）对话框时，不要更改参数。单击OK（确定）。软件会再次开始鉴定峰。出现ChooseCompoundName（选择化合物名称）对话框。16对话框中出现Dodecan（十二烷）时，保持缺省名称并单击Add（添加）。出现EditCompo

18、und（编辑化合物）对话框。17. 选中Biphenyl（联苯），选择一个插入点并单击InsertAbove（插入上文）。18. ChooseCompoundNames（选择化合物名称）对话框中留存的3个化合物已经存在定量数据库中，因此单击Skip（跳过）。跳过这3个化合物后，软件将问您是否StopNow?（现在停止?）单击Yes（是）。这一特点在对大量化合物进行数据库操作时非常有用。19. 系统问您是否希望定量数据库时，单击Yes（是）。20. 出现UpdateCalibration（更新校准）对话框时，选择Recalibrate（重新校准）并对Responses（响应）和RetentionTimes（保留时间）字段选择替换。单击DoUpdate（进行更新）。21. 出现EditCompounds（编辑化合物）对话框时，单击View（査看）并检