实验一培养基的配制与灭菌 (2)ppt课件

1、福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院一 实验目的了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其运用方法。熟习分别、培育微生物前的有关预备任务及操作方法。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院二 实验原理v人工制备培育基的目的，在于给微生物发明一个人工制备培育基的目的，在于给微生物发明一个良好的营养条件。良好的营养条件。v培育基是按照微生物生长发育的需求，用不同组培育基是按照微生物生长发育的需求，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。分的营养物质调制而成的营养基质。

2、 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院营养六要素碳源：提供微生物繁衍所需碳元素的营养物质。用途：糖、碳源：提供微生物繁衍所需碳元素的营养物质。用途：糖、蛋白质、核酸合成。蛋白质、核酸合成。氮源：提供微生物繁衍所需氮元素的营养物质。用途：蛋氮源：提供微生物繁衍所需氮元素的营养物质。用途：蛋白质、核酸合成。白质、核酸合成。能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能。能。生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。无机盐：提供微生物繁衍所需各种重要元素。无机盐：提供微生物繁

3、衍所需各种重要元素。水分：水是保证生命活动重要的介质。水分：水是保证生命活动重要的介质。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院培育基的种类培育基的种类据组成成分可分为据组成成分可分为: : 1. 1. 合成培育基：由各种纯化学物质按一定比例合成培育基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。如葡萄糖铵盐培育基、淀粉硝酸盐配制而成。如葡萄糖铵盐培育基、淀粉硝酸盐培育基等。培育基等。 2. 2. 半合成培育基：有一部分纯化学物质和另半合成培育基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。如马铃薯蔗糖培育一部分天然物质配制而成。如马铃薯蔗糖培育基。基。 3. 3. 天然培育基：利用天然来

4、源的有机物配制而天然培育基：利用天然来源的有机物配制而成。成。 如牛肉膏蛋白胨培育基、麦芽汁培育基如牛肉膏蛋白胨培育基、麦芽汁培育基等。等。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院从培育基的物理形状可分为从培育基的物理形状可分为 1. 1. 液体培育基：不加凝固剂常用凝固剂液体培育基：不加凝固剂常用凝固剂为琼脂的液体形状培育基。为琼脂的液体形状培育基。 2. 2. 固体培育基：在液体培育基中参与固体培育基：在液体培育基中参与2%2%左右的凝固剂的固体形状的培育基或农副左右的凝固剂的固体形状的培育基或农副产品培育基。产品培育基。 3. 3. 半固体培育基：在液体培育基中参与半固体培育基

5、：在液体培育基中参与0.2-0.5%0.2-0.5%凝固剂而成的半固体状培育基。凝固剂而成的半固体状培育基。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院按照培育基的用途，可将其分为：按照培育基的用途，可将其分为：l加富培育基：加富培育基是指在普通培育基里加过血、血加富培育基：加富培育基是指在普通培育基里加过血、血清、动物或植物组织液或其他营养物质或生长因子清、动物或植物组织液或其他营养物质或生长因子的一类营养丰富的培育基，用以培育某种或某类营养要求的一类营养丰富的培育基，用以培育某种或某类营养要求苛刻的异养微生物苛刻的异养微生物l选择培育基：选择培育基是根据某种或某一类群微生物的选择培育

6、基：选择培育基是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需求或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的特殊营养需求或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的一类培育基。利用这种培育基可以将某种或某类微生物从一类培育基。利用这种培育基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分别出来。混杂的微生物群体中分别出来。l鉴别培育基：普通培育基中参与能与某种代谢产物发生反鉴别培育基：普通培育基中参与能与某种代谢产物发生反响的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化，响的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化，以区别不同的微生物以区别不同的微生物 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院v 配制培

7、育的各类营养物质和容器等含有各种配制培育的各类营养物质和容器等含有各种微生物微生物v 杂菌生长繁衍：杂菌生长繁衍：v 耗费营养耗费营养v 改动培育的酸碱度改动培育的酸碱度v 产生毒素或者抑制物产生毒素或者抑制物培育基灭菌 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院灭菌方法灭菌方法 加热灭菌加热灭菌干热灭菌干热灭菌湿热灭菌湿热灭菌 过滤除菌过滤除菌 辐射灭菌辐射灭菌放射线辐照灭菌放射线辐照灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌 化学药品灭菌化学药品灭菌 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院加热灭菌加热灭菌干热灭菌干热灭菌v干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。v细

8、胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，那么蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。v因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高160170，时间要长12h，但干热灭菌温度不能超越180，否那么，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起熄灭。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 高压蒸气灭菌是将待灭菌的高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔套间内，经过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀急剧地将锅内的冷空气从排

9、气阀中驱尽，然后封锁排气阀，继续中驱尽，然后封锁排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，加热，此时由于蒸气不能溢出，而添加了灭菌锅内的压力，从而而添加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于使沸点增高，得到高于100100的温的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而度。导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。到达灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效在同一温度下，湿热的杀菌效能比干热大。其缘由有三：一能比干热大。其缘由有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量添加，所需凝固温度降低，水量添加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透

10、力比干热大，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而添加灭菌效物体的温度，从而添加灭菌效能。能。1g水在水在100时，由气态变时，由气态变为液态时可放出为液态时可放出2.26kJ(千千焦焦)的热量。的热量。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院由于空气的膨胀压大于水蒸气的膨由于空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。温度低于饱和蒸气的温度。 福建农林

11、大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 普通培育基用0.1Mpa，121.5,1530min可到达彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等详细情况而有所改动。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院过滤除菌过滤除菌 不能用加热灭菌的液体物质如维生素、血不能用加热灭菌的液体物质如维生素、血清，普通可用细菌过滤器进展除菌。清，普通可用细菌过滤器进展除菌。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院紫外线灭菌法紫外线灭菌法 紫外线灭菌是用紫外线灯进展的。波长为紫外线灭菌是用紫外线灯进展的。波长为200-300nm200-300nm的紫外线都有杀菌才干，其中以的

12、紫外线都有杀菌才干，其中以260nm260nm的杀菌力最强。在的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是由于它诱导了胸腺嘧啶积成正比。紫外线杀菌机理主要是由于它诱导了胸腺嘧啶二聚体的构成和二聚体的构成和DNADNA链的交联，从而抑制了链的交联，从而抑制了DNADNA的复制。另的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成OO，再使，再使O2O2氧氧化生成臭氧化生成臭氧O3O3或使水或使水H2OH2O氧化生成过氧化氢氧化生成过氧化氢H2O2H2O2。O3O3

13、和和H2O2H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体外表的灭菌。紫外线灯距照射物以不超越外表的灭菌。紫外线灯距照射物以不超越1.2m1.2m为宜。为宜。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 为了加强紫外线灭菌效果，在翻开紫外灯以为了加强紫外线灭菌效果，在翻开紫外灯以前；可在无菌室内前；可在无菌室内( (或接种箱内或接种箱内) )喷洒喷洒3%3%5%5%石炭石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一

14、方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用的桌面、凳子可用2%2%3%3%的来苏尔擦洗，然后再的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可加强杀菌效果，到达灭菌目开紫外灯照射，即可加强杀菌效果，到达灭菌目的。的。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院化学药品灭菌化学药品灭菌 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀漂白粉、新洁

15、尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。菌剂，有的是抑菌剂。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院三 实验资料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、可溶性淀粉、K2HPO4K2HPO4、KNO3KNO3、MgSO4MgSO47H2O7H2O、FeSO4FeSO47H2O7H2O等。等。高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱、超净任务台。高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱、超净任务台。其它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、2MHCl2MHCl、2MNaOH2MNaOH、pHpH试纸、试纸、刻度搪瓷杯

16、、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、玻璃珠、三角刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、玻璃珠、三角瓶、带塞子的无菌试管、无棉塞的空试管、培育皿、吸管、瓶、带塞子的无菌试管、无棉塞的空试管、培育皿、吸管、各种包装纸、防水纸、标签等。各种包装纸、防水纸、标签等。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院四 实验步骤6. 加塞7. 包扎8. 灭菌9. 搁置斜面10. 无菌检查称量溶化调pH过滤分装 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中参与所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。溶化：在搪瓷杯中参

17、与所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。调调pH值：用值：用1MNaOH或或1MHCl调调pH，用，用pH试纸对照。试纸对照。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。分装：留意不要污染棉塞。分装：留意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签必需用铅笔写，注明何种培育基。包扎成捆，挂上标签必需用铅笔写，注明何种培育基。灭菌备用：培育基灭菌后必需在灭菌备用：培育基灭菌后必需在370C下恒温培育下恒温培育24h，确，确定无菌生长，方可运用。定无菌生长，方可运用。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院几种常用培育基配方牛肉膏蛋白胨培育基的配方如下：牛肉膏

18、蛋白胨培育基的配方如下： 牛肉膏牛肉膏 3.0g 蛋白胨蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水水 1000ml pH 7.47.6。 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院高氏高氏号培育基配方如下：号培育基配方如下： 可溶性淀粉可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1gK2HPO43H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5gFeSO47H2O 0.01g 琼脂琼脂 1525g 水水 1000mL pH 7.47.6 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院马铃薯培育基配方：马铃薯培育基配方： 马铃薯马铃薯 200g葡萄糖葡萄糖 20g琼脂琼脂 l520 g蒸馏水蒸馏水 l000mL pH 自然自然 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院阿斯毕无氮培育基：阿斯毕无氮培育基：甘露醇或蔗糖、葡萄糖甘露醇或蔗糖、葡萄糖 10gKH2PO4 0.2gMgSO4.7H2O 0.2gNaCl 0.2gCaSO4.2H2O 0.1gCaCO3 5g琼脂琼脂 20g 水水 1000ml PH 7.07.2 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院五 本卷须知n在运用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气要尽能够排除完；n易燃易爆物品如：硝化甘