王星没食子酸论文

1、HPLC法测定不同产地盘龙七中没食子酸含量（陕西理工学院 生物科学与工程学院 陕西汉中 723000）摘 要 目的: 建立高效液相色谱法测定盘龙七中没食子酸含量的方法，并且测定14个不同产地盘龙七中没食子酸的含量。方法：色谱条件为：色谱柱为Inertsil ODS-3C18（4.6×150mm，5m）柱，以甲醇-0.4%磷酸溶液（7:93）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长271nm，柱温30。结果：没食子酸在5.3- 53µg/mL范围内呈良好的线性关系，Y=31446X-15550 (R2=0.9999），平均加样回收率99.995%，RSD为1.704%。不同

2、产地盘龙七中没食子酸的含量不同，其含量随产地的不同而显示出一定的差异，其变化范围在1.6897 -5.0723mg/g。结论：本研究建立的没食子酸含量测定方法简便、高效、准确、重复性好，可用于不同产地盘龙七药材的质量控制。文县产盘龙七中没食子酸含量丰富，具有潜在的开发利用价值。关键词 HPLC；盘龙七；没食子酸；含量中图分类号 R284.1 文献标识码 A盘龙七，又名石白菜、地白菜，为虎耳草科岩白菜属植物秦岭岩白菜（Bergenia scopulosa TPWang）的根茎；多年生草本，分布于陕西、四川及甘肃东南部1，为我国特有种。盘龙七是陕西民间常用药，味涩、微苦，性平；补益脾胃，收涩固肠，

3、利水活血，主治急慢性肠胃炎、痢疾、浮肿、淋症、白带、崩漏、黄水疮、秃疮、疥癣等2。没食子酸又名五倍子酸、 棓酸， 化学名 3，4，5 -三羟基苯甲酸 ( C 7 H 6 O 5 )， 为白色或淡黄色针状结晶或粉末， 通常是以一水合物的形式存在，具有抗肿瘤、抗炎、 抗突变、 抗氧化、 抗自由基、抗菌、抗肝损伤、抗病毒等作用，是一种重要的有机原料， 广泛应用于化工、 医药、 食品 、 染料、 轻工等领域3-4。迄今为止，关于盘龙七中的有效成分没食子酸含量测定的研究尚未见报道。为更好地进行药材质量控制并进一步开发利用该药材资源，笔者采用高效液相色谱法对不同产地盘龙七药材中没食子酸的含量进行了分析研究

4、，以期为盘龙七资源的开发利用以及药材质量控制提供依据，现将相关内容报道如下。收稿日期基金项目 第一作者 通讯作者* 1材料与仪器1.1主要仪器 Waters e2695高效液相色谱仪（包括四元泵，真空脱气机，自动进样器，柱温箱，2489紫外检测器），Empower色谱工作站；UV-2550紫外分光光度计 日本岛津；AB204-S电子分析天平 瑞士 Mettler Toledo公司；KQ-300DE型数控超声波清洗机 昆山市超声仪器有限公司，UPH-II-20T优普超纯水机 成都优普净化科技有限公司。1.2主要试药 药材来源见表2，经陕西理工学院植物学教授赵桦鉴定为盘龙七。1.3主要试剂 没食子

5、酸对照品购自上海金穗生物科技有限公司，批号（20140620）。甲醇(色谱纯)购于天津市光复精细化工研究所；甲醇（分析纯）购于天津市富宇精细化工有限公司，乙酸（分析纯） 购于天津市富宇精细化工有限公司，水为自制超纯水。2方法与结果2.1色谱条件为 色谱柱为Inertsil ODS-3C18（4.6×150mm，5m）柱，以甲醇-0.4%磷酸溶液（7:93）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长271nm，柱温30。2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品5.3mg，用60%甲醇溶液定容至50mL棕色容量瓶中，配制成106µg/mL（母液）的对照品溶液。放于4冰箱中，

6、备用。2.3供试品溶液的制备取盘龙七药材，在60条件下烘干，粉碎过60目筛。称取约0.5g，精密称定，置于具塞100mL锥形瓶中，加40mL 60%甲醇溶液和10mL 25%的盐酸，在超声功率为240W超声频率为40KHz，温度为60条件下，超声提取90min（超声前浸泡30min），取出，放冷，抽滤，将滤液用60%甲醇溶液定容至50mL 容量瓶中，进样前用0.45m的滤膜过滤。2.4方法学考察2.4.1线性关系的考察 准确量取没食子酸标准品母液0.5，1、2、3、4mL，分别用60%甲醇溶液定容至10mL的棕色容量瓶中，配制成浓度分别为5.3、10.6、21.2、31.8、42.4µ

7、;g/mL的没食子酸标准品溶液，再加上没食子酸标准品母液共六种不同浓度的溶液分别进样，每个浓度分别进样三次，每次进样10L，进样前用0.45m的滤膜过滤，测定峰面积。以没食子酸标准品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得没食子酸的回归方程为Y=31446X-15550（R2=0.9999），表明在5.353µg/mL范围内呈良好的线性关系，见图1，标准品色谱图见图2。图1. 没食子酸标准曲线2.4.2精密度试验 用没食子酸对照品溶液重复进样6次，每次进样10L，其峰面积RSD为0.35%。2.4.3重复性试验 称取盘龙七样品5份，每份约0.5g，均精密称定。按照2.3项下方

8、法制备供试液，按照2.1项下方法测定，每份进样3次，每次进样10L。5份样品中没食子酸的含量分别为：1.6644、1.6946、1.7078、1.6602、1.7295mg/g，平均含量为1.6913mg/g，RSD为1.73%。说明本文方法有较好的重现性。2.4.4稳定性试验 用盘龙七供试液分别于提取后0、1、2、4、8、12h进样。得没食子酸峰面积的RSD为0.78%。说明盘龙七中没食子酸供试液在12h内稳定。2.5.5加样回收试验 精密称取盘龙七样品9份，各约0.25g，精密称定。按80%，100%，120%加入没食子酸对照品，按本文方法制备供试液和测定没食子酸含量，并计算回收率。结果见

9、表1。表1. 没食子酸加样回收率实验（n9）编号取样量（g）样品含量(mg)添加标品量（mg）测得量(mg)回收率回收率平均值RSD10.25030.42330.33920.761699.71%99.995%1.704%20.24980.42250.33920.7628100.33%30.25060.42380.33920.762199.73%40.25110.42470.42400.841398.20%50.25090.42430.42400.842698.65%60.25050.42370.42400.839798.12%70.25030.42330.50880.9418101.91%80

10、.25070.42400.50880.9495103.28%90.25120.42490.50880.9338100.04%2.5不同产地盘龙七样品中没食子酸含量测定称取14个不同产地盘龙七样品，每个产地样品各5份，每份约0.5g，均精密称定。按照2.3项下方法制备供试液，按照2.1项下方法测定，每份进样3次，每次进样10L。测得14个不同产地盘龙七中没食子酸含量在1.6897 -5.0723mg/g之间。样品含量测定色谱图见图3，其没食子酸含量和RSD见表2。表2. 不同产地盘龙七中没食子酸含量测定（n=5）药材来源平均含量（mg/g）RSD（%）洛南县草链岭2.00482.01镇安县鹰嘴石

11、1.68972.32留坝县紫柏山2.64031.69洋县昏人坪梁2.92541.77勉县长沟河乡1.81211.58凤县透马驹山3.67761.93太白县鹦鸽镇4.17211.66眉县首善镇3.96741.71户县九华山2.73011.83礼县上坪乡4.28811.72文县堡子坝乡5.07231.95宕昌县阿坞乡4.89431.89九寨沟县九寨沟2.83482.03青川县前进乡3.01031.813讨论3.1检测波长的选择应用紫外可见分光光度计在200400nm范围内对没食子酸进行紫外扫描，结果没食子酸在271nm处有最大吸收峰，故选271nm为其检测波长。3.2流动相比例的选择本实验曾比较过

12、流动相不同比例对分析结果的影响：当甲醇-0.4%磷酸溶液的比例为15:85、13:87、10:90、9:91时，没食子酸和其相邻峰交织在一起无法分开；当流动相的比例为8:92时与后一个稍小峰分不开，6:94时与前一个稍大峰分不开；当流动相比例为7:93时，没食子酸和其前后两个峰正好达到基线分离。所以选择7:93（甲醇-0.4% 磷酸溶液）为该实验的流动相比例。3.3提取溶剂的选择试验中对不同的溶剂提取做了对比研究。选用40%、60%、80%的甲醇溶液和40%、60%、80%的乙醇溶液，数据结果显示60%的甲醇溶液的提效果最好。3.4提取次数的选择以料液比0.5:50提取一次和0.5:50提取两

13、次，数据结果未显示出明显差异。表明料液比为0.5:50，提取一次时盘龙七中的没食子酸基本已被提尽。3.5提取时间的选择试验曾试过超声提取30min、60min、90min、120min，数据结果表明提取时间为90min和120min时，所测含量相差很小。而提取时间为30min和60min时所测含量皆小于90min和120min，所以选择提取时间为90min。3.5提取温度的选择由于甲醇的沸点为64.7，所以以60为起始温度进行温度选择试验，然后依次试了50，40，30。实验结果表明60提取效果最好。所以选60为超声提取温度。3.6经查阅文献，关于盘龙七中没食子酸含量的测定尚未见报道。本研究以陕

14、、甘、川三省14个不同产地的盘龙七为材料，研究了其中没食子酸的含量。结果显示，所测14个产地的盘龙七中没食子酸的含量在1.6897-5.0723mg/g（0.169% -0.507%）之间，其中甘肃省陇南市文县产盘龙七中没食子酸含量为5.0723mg/g，为所测材料中没食子酸含量最高值。且没食子酸含量高于头花蓼5地锦草6虎耳草7草龙8菱角9叶下珠10等 ，具有潜在的开发利用价值。本实验建立了高效液相色谱法测定盘龙七药材中没食子酸的含量，该方法简便、高效、准确、重复性好，可用于不同产地盘龙七药材的质量控制。本研究可为盘龙七药材的开发利用、药材来源的选择以及合理用药提供科学依据，具有一定的意义。文

15、县产盘龙七中没食子酸含量丰富，具有潜在的开发利用价值。参考文献1 中国科学院中国植物志编委会. 中国植物志, 第三十四卷， 第二册M. 北京: 科学出版社, 1992， 27.2 南京中医药大学主编. 中药大辞典, 第二版M. 上海: 上海科学技术出版社, 2006, 3048.3 常连举, 张宗和, 黄嘉玲等. 没食子酸的制备与应用综述J. 生物质化学工程, 2010, 44（4）: 48-52 4 张德全, 马阿丽, 杨永寿等. HPLC测定不同产地滇牡丹中没食子酸和丹皮酚含量J. 中国实验方剂学杂志, 2014, 20(5): 57-605 王祥培, 万德光, 王强等. HPLC测定不同产地的头花蓼中没食子酸的含量J. 华西药学杂志, 2007, 22(2): 204-2056 李慧, 许亮, 徐保利等. HPLC测定地锦草中没食子酸、槲皮素及山柰素含量J. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18(7): 100-1027 丁家欣, 张秋海, 李淑莉等. H