DxI800培训DxI原理及定标ppt课件

1、DxI800原理概述概述DxI800是目前世界上最先进，效率最高的全自动化学发光分析仪用于多种体液微量物质的定量、半定量以及定性实验采用顺磁性颗粒，碱性磷酸酶激发的AMPPD，RV穿越系统，试剂盒覆膜技术等分析方式分析方式检测技术检测技术分别技术分别技术免疫标志物开展放射性同位素(Radioisotopes) - RIA优秀的灵敏度，抗干扰才干好效期短，重现性差，手工操作，分析时间长，污染物的处置等荧光素(Fluorophores) - FIA稳定，较好的灵敏度和重现性其它荧光物的干扰，线性范围窄酶(Enzymes) - EIA非常容易运用对定量分析所要求的灵敏度和宽线性难以实现化学发光物质

2、- CLEIA优秀的灵敏度和宽线性，抗干扰才干好类型 闪烁型(flash)，辉光型(glow) 稳定性根据分子构造会有不同表现试剂效期开瓶效期定标周期目前常见的免疫分析发光物质鲁米那：1928年，早期开发的发光标志物吖啶酯：直接化学发光，闪烁型吖啶甲酰胺：直接化学发光，闪烁型三联吡啶钌：电化学发光，闪烁型AMPPD：酶促化学发光，辉光型为什么Beckman采用AMPPD3-2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-3-磷酸氧基-苯基-1，2-二氧乙烷AMPPD 为什么Beckman采用AMPPDP.A. Bonini et al. “Immunoassay systems标志物类型标志物类型标

3、志物称号标志物称号 可到达的检测限可到达的检测限/L放射性同位素放射性同位素3H5x10-15 mole 125I5x10-17 mole酶酶 Beta-galactosidase1.5x10-16 mole Horseradish peroxidase3x10-16 mole Alkaline phosphatase5x10-17 mole生物发光生物发光Firefly luciferin/luciferase5.6 x 10-16 photons/min/mg Enzyme enhanced10-19mole Firefly luciferin/luciferase10-19mole荧光荧

4、光Europium(III) ion2x10-17 mole Fluorescein10-13 mole 酶酶/chemiluminescencePeroxidase/luminol/enhancer10-15 mole Glucose-6-phosphate dehydrogenase peoxidase/10-18 mole isoluminol * AMPPD10-21 mole为什么Beckman采用AMPPDAMMPPD良好的辉光特性，发光稳定时间可达1小时，检测方便稳定。磁微粒子直径0.08 +/- 0.02 mm ，接触面积大快速的反响动力学较少的样品量提高检测的灵敏度极好的批内

5、重现性可以探针取放，实现自动化有磁性磁颗粒均匀的悬浮于整个反响体系分析物在磁颗粒外表捕获磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒重新悬浮非常容易清洗QS Disp #1MagAsp#1MixDisp #2MagAsp#2MixDisp #3MagAsp#3MixAddSubIncu-bateRead4 minutes10 x 1 sec.6 minutes分析方式分析方式- 有很多种方式可定义为分析的 “处方设定一个最优化的方式(可变量)去最优化工程的临床运用 分析方式的变化可变量夹心法(Sandwich) vs.竞争法(competitive)标志物的放置同步(Simultaneous) vs. 分步(s

6、equential)试剂/样品参与的顺序孵育的次数(步骤)清洗分别的次数(步骤)试剂/样品的体积/浓度孵育的时间孵育的温度DxI800的分析方式根本分析方式夹心法(Sandwich)竞争结合(Competitive binding)试剂的参与 同步(Simultaneous) (1步, 1次清洗)分步(Sequential) (2步, 2次清洗)“Piggyback (2步, 1次清洗)夹心法分析方式捕捉抗体(Capture antibody)和标志抗体(labeled antibody)每个抗体的存在可以与更多的分析物发生反响分析更可靠,准确,准确和可重现性分析更灵敏由于一切分析物都参与反响

7、每个抗体的不同可以针对不同的抗原决议簇，或二个在同一个抗原决议簇分析更特异由于二个抗体同时反响适宜与检测大分子物质，分子量大有更多的特异性抗原决议簇可选择bhCGbhCG hTSH hTSHIgEIgEProlactinProlactinhFSHhFSH hLH hLHFerritinFerritinTnITnI一步三明治法两步三明治法夹心法定标夹心法定标RLU 随浓度添加而添加SIGNALCONCENTRATIONLog linear scale竞争法分析方式只需捕捉抗体主要针对小分子物质检测 没有足够外表积的分析物去符合 “夹心法 要求一定量的捕捉抗体使得反响复合物为只是“抽样性反响时间较

8、短T3 FT3 B12 Digoxin ProgesteroneT4 FT4 Folate Cortisol Estradiol一步竞争法两步竞争法两步竞争法标志抗体两步竞争法标志抗体竞争法定标RLU随浓度添加而降低规范品 参比物USP (United States Pharmacopia)小分子物质，如，类固醇激素，药物等质谱分析(mass spectrometry)并规范化WHO 世界卫生组织大分子物质，如，蛋白质/多肽等规范品(Pool)制备，送近 20 参比实验用免疫学技术进展符值规范品不断分派到全部用完，后重新制备1st IRP，2nd IRP，3d IRP内部(In-house)参

9、比物厂家产生的主定标曲线觉得节省的校正型 2 点定标会添加定标的频率对非线性的规范曲线能够会有问题(大多数的免疫分析产生的是非线性的规范曲线)多点定标曲线定量 典型的是6个程度, 定性 典型的是2个程度可以到达最大的灵敏度,准确性和精细度可以有更长的定标周期间隔DxI800 拟合定标曲线数学模型加权4参数逻辑曲线4PLC加权拐点平滑样条加权非拐点平滑样条直线速率定标接受过程每个定标点反复做2次或更多，获取RLU值DxI800用前述数学模型拟合数据点系统尝试经过调整曲线参数，最小化数据点到曲线的间隔 。假设尝试次数超越预设仍无法确定曲线，定标失败假设一切定标测试中有2个或2个以上点有致命旗标，定

10、标也失败有些测试还要调查S0的CV系统利用数据点到获得的曲线间隔 以及曲线的外形，在曲线两侧计算出浓度接受范围假设任何一个数据点计算浓度超出浓度范围，定标失败1、X轴：分析物浓度；2、Y轴：RLUs3、误差区 4、呼应精度5、浓度精度曲线类型一条有效定标曲线总是向上或向下DxI 800定标分类定量多点定标，曲线，上行/下行，经过生成曲线可将相对光单位RLU转化为浓度。测试结果为数值型。半定量多点定标，曲线，RLU转化为数值型报告，可以将数值结果以定性方式报告定性定标提供cutoff值，每个测试RLU与cutoff值比较，分层报告。定标报告定标数据评价根据APF协议系统决议定标能否经过定标失败处

11、置假设定标数据不满足APF协议要求，将报失败。寻觅定标失败缘由是处理问题的关键。常见定标失败缘由定标液次序放反。运用错误批号的定标液。定标液或试剂处置不当，或失效。仪器未执行日常保养发生系统错误。定标液试剂仪器定标失败代码RLUDose0No Value“No Value Results for S0 or S5 Typically one replicate of the SO calibrator for sandwich assays will give “no value as a result (May happen at S5 also)This does not mean the

12、 replicate was badThe software simply does not assign values S5案例 1定标失败代码：Insuff Data 缘由分析 Insuff Data 意味着定标短少至少两个定标数据点数据点缺乏常见缘由为定标液缺乏，或由于系统错误导致某些定标测试被取消。察看本案例定标数据，发现没有S5的数据。经查，S5定标液脱漏案例 2定标错误代码：No Fit 分析1、NO FIT 意味系统无法拟合出曲线，缘由常见于违反运算法那么。对于no fit 案例，首先察看曲线的外形能否符合估计的外形，比如此案例铁蛋白应为平滑上升曲线，但实践一切的点都近乎在一个平

13、面。2、检查定标点的RLU。发现一切的点都在6000左右。阐明根本没有发生反响。3、检查试剂，发现试剂缺乏。案例 3定标失败代码：Bad fit；没有旗标、报警 分析1、bad fit的缘由是曲线无法满足接受限2、察看曲线外形，正常。各程度RLU值，根本符合。但是定标点CV值明显太大，应为导致bad fit缘由3、运转system check。发现mean偏低，CV增大4、检查发现底物管道破裂，导致气泡。Washed Mean 4920 ()%CV 15.19 ()SubstrateMean 4579 ()%CV 8.21 ()Ratio 0.99UnwashedMean 3713543 ()

14、%CV 6.57 ()试剂、定标液严厉按照阐明书要求进展储存。有些定标液需求复溶。混匀试剂要留意：悄然倒转混匀，勿产生气泡，不要适用涡旋混匀器。不要用除霜冰箱进展保管。底物易污染S0不含该物质的小牛血清非常容易受底物和缓冲液质量的影响何时需求定标定标曲线过期定标曲线过期新批号试剂新批号试剂QCQC失控失控重要部件维修重要部件维修/ /改换改换结果标注致命性错误Fatal Error不会报告结果非致命性错误Non-fatal Error仅标明测试进展的情况，结果依然报告常见致命性结果标注AEX：汲取的样本曾经过期，通常由于耗材缺乏引起。处置：重新加载样本，假设测试恳求仍为requested，直接编号标本装载即可；假设测试恳求曾经被cancelled，重新编程。CLT：样本堵塞。处置：清洁样品针，和四根试剂针；重新加载样本，假设测试恳求仍为requested，直接编号标本装载即可；假设测试恳求曾经被cancelled，重新编程。IDN：RLU结果太低夹心法或太低/太高竞争法，无法和系统误差区别。处置：检查日志，看能否同时有报警。检查试剂盒，重新运转标本。QNS：样本量缺乏。处置：检查日志，能否有报警。重新运转标本QSB：底物分配错误。处置：重新底物四次。