病原学诊断与防治

1、第八章第八章 病原学诊断与防治病原学诊断与防治 第一节第一节 细菌学诊断细菌学诊断包括；包括；细菌学诊断细菌学诊断检测病原菌及其抗原，产物或核酸检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断血清学诊断检测患者血清中特异性抗体检测患者血清中特异性抗体一、病原菌检测一、病原菌检测v 标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。v 根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。不同标本。v 应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。拮抗剂。v 尽可能

2、采集病变明显部位的材料。尽可能采集病变明显部位的材料。v 标本必须新鲜，采集后尽快送检。标本必须新鲜，采集后尽快送检。v 送检过程中要采取适当的保存方式。送检过程中要采取适当的保存方式。v 标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确无误。无误。标本采集与送检原则标本采集与送检原则致病菌的检验程序致病菌的检验程序标本标本直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检分离培养与鉴定分离培养与鉴定病原菌抗原检测病原菌抗原检测 其它检测其它检测形态、结构、形态、结构、染色性染色性涂片涂片镜检镜检菌落菌落特征特征生化生化反应反应药敏药敏试验试验血清学血清学反应反应沉淀

3、反应沉淀反应协同凝集协同凝集免疫荧光免疫荧光对流免疫电泳对流免疫电泳酶免疫测定酶免疫测定免疫印迹免疫印迹细菌代谢产物细菌代谢产物（气相色谱）（气相色谱）细菌核酸细菌核酸（PCR）噬菌体分离噬菌体分离细菌素测定细菌素测定分子生物学技术分子生物学技术动物动物试验试验人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价特

4、异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为病人的血清进行试验，故称为血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于升高大于等于4倍倍时方有时方有意义。意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶常用方法：直接凝集试验、乳胶 凝集试验、沉淀试验、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、补体结合试验、

5、中和试验、ELISA。第二节第二节 血清学诊断血清学诊断第二节第二节 病毒学诊断病毒学诊断 一一 标本的采集与送检（标本的采集与送检（principle of collection specimen）1 早期（前驱期、急性期、发病前早期（前驱期、急性期、发病前12天）天）2 根据不同病毒感染，采集不同部位标本根据不同病毒感染，采集不同部位标本3 病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保存，快速送检存，快速送检4 标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）5 血清学实验检查抗体（双分血清）血清学

6、实验检查抗体（双分血清）二二 病毒的分离培养与鉴定（病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination）n（一）病毒的分离（一）病毒的分离n方法方法n动物接种动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况选择易感动物及接种部位，观察发病情况n鸡胚培养鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。n细胞培养：分离病毒最常用的方法细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，来源于动物、鸡胚

7、、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传对多种病毒敏感，但只能传2-3代。代。（2）二倍体细胞）二倍体细胞在体外分裂在体外分裂50-100代后仍保持代后仍保持2倍倍体染色体数目的单层细胞。体染色体数目的单层细胞。（3）传代细胞传代细胞能在体外无限传代的细胞多由癌细胞能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。或二倍体细胞突变而来。病毒在培养细胞中增殖的指标病毒在培养细胞中增殖的指标n细胞的变化细胞的变化n（1）出现）出现细胞病变效应（细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等

8、）集、坏死、脱落等）n（2）形成细胞融合（多巨核细胞）形成细胞融合（多巨核细胞）n（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所）场所）n红细胞吸附红细胞吸附n干扰现象干扰现象n细胞代谢改变（细胞代谢改变（pH）正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞（二）病毒的数量与感染性测定（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定（三）新分离病毒的鉴定n核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。基因测序和生物对比。三、病毒

9、感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断 用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等） 四、四、 病毒感染的快速诊断病毒感染的快速诊断 (一一) 形态学形态学 电镜和免疫电镜电镜和免疫电镜直接观察病毒直接观察病毒 光镜光镜 大病毒大病毒 和包涵体和包涵体（二）检测病毒蛋白抗原（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）敏感、特异）常用方法：常用方法

10、：免疫荧光技术（免疫荧光技术（IF） 固相放射免疫测定（固相放射免疫测定（SPRIT） 酶免疫技术（酶免疫技术（EIA）等。等。（三）（三） 检测病毒特异性检测病毒特异性IgM抗体抗体 检测病毒特异性检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。或证明病毒复制。（四）（四） 检测病毒核酸检测病毒核酸 1 核酸杂交核酸杂交n 斑点杂交（斑点杂交（dot hybridization）n 原位杂交（原位杂交（in site hybridization）n DNA印迹杂交（印迹杂交（Southern blot）n RNA印迹杂交印迹杂交 （northern blot） 2 核

11、酸扩增核酸扩增n聚合酶链反应聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR DNA）n连接酶链反应（连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR）n反转录反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RTPCR (RNA) 3 基因芯片技术（基因芯片技术（gene chip） 第三节第三节 真菌学诊断真菌学诊断标本标本直接镜检直接镜检深部标深部标本本染色标染色标本本G染色染色G+圆形圆形大小不大小不均均有芽生有芽生孢子孢子分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基菌落观察菌落观察角质标角质标本本不染色不染色标本标本10%KOH观察菌观

12、察菌丝、孢丝、孢子子类型类型 大小大小 颜色颜色 皱摺皱摺 鉴定鉴定动物实验动物实验（致病性真菌）（致病性真菌）接种接种观察发病情况观察发病情况死亡后取标本死亡后取标本进一步鉴定进一步鉴定皮肤超敏反应皮肤超敏反应快速诊断快速诊断血清学实验血清学实验核酸检测核酸检测真菌毒素检真菌毒素检测测死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗类毒素类毒素新型活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗第四节第四节 特异性预防与治疗特异性预防与治疗一、人工主动免疫一、人工主动免疫(artificial active immunity)：将将疫苗疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生或类毒素接种

13、于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。要用于预防。合成疫苗合成疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗DNA疫苗疫苗转基因植物疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗治疗性疫苗抗毒素抗毒素抗菌血清抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂细胞免疫制剂二、二、 人工被动免疫人工被动免疫人工被动免疫人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性或细胞因子等免疫制剂，使机

14、体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。急预防。两种人工免疫的比较两种人工免疫的比较区别要点区别要点人工主动免疫人工主动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质抗原抗原抗体或细胞因子等抗体或细胞因子等接种次数接种次数1-3次次1次次免疫出现时间免疫出现时间慢（注射后慢（注射后2-4W） 快（注射后立刻出快（注射后立刻出现）现）免疫维持时间免疫维持时间长（数月长（数月数年）数年）短（短（2-3W）用途用途多用于预防多用于预防多用于治疗或应急多用于治疗或应急预防预防三、细菌感染的治疗三、细菌感染的治疗抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）主要作用机制主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞壁合成影响细胞膜功能影响细胞膜功能影响细菌蛋白合成影响细菌蛋白合成影响细菌核酸合成影响细菌核酸合成四、病毒感染的治疗四、病毒感染的治疗n药物治疗药物治疗n核苷类药物核苷类药物抑制病毒基因复制抑制病毒基因复制 抑制病毒基因转录抑制病毒基因转录n蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂n天然药物（中草药）天然药物（中草药）n