血细胞分析在临床中的应用

1、2021/3/261n血细胞分析在临床中 的应用 2021/3/262血细胞分析的发展n近年来,随着科学技术的飞速发展及计算机在血液分析仪中的广泛应用,各种先进的血液分析仪逐渐普及. 2021/3/2631913 - 19981913 - 1998Model AHigh speed automatic blood cell count and cell size analyzer2021/3/264原理n血液分析仪主要是利用阻抗原理进行细胞计数的. 不同体积的血细胞,因其电 阻大小不同,而产生相应大小的脉冲,分别进入到仪器设置的不同通道2021/3/2652021/3/266CBC(全血细胞计

2、数)+DIFF(WBC分类)模式下WBC计数分类nWBC/DIFF通道对WBC计数和分类时,使用的两个信号:n细胞经半导体激光激发产生侧向荧光强度n侧向散射光强度信号2021/3/267n使用的两种试剂:n溶血素(4DL):将RBC完全溶解,同时在WBC膜表面打孔n荧光染料(4DS,聚次甲基荧光染料)通过 小孔进入WBC内,对胞浆和胞核中的核酸物质进行染色2021/3/268测定n经过核酸荧光染色后的WBC在633nm激光的照射下,产生侧向荧光信号和侧向散射光信号。n侧向荧光强度与WBC的核酸(DNA/RNA)含量成正比,侧向散射光强度反映了细胞内容物的复杂程度(核的分叶,胞浆颗粒的大小,数量

3、,分布均匀程度)。2021/3/269123459鞘流技术激光计数原理示意图鞘流技术激光计数原理示意图1 1 流通池流通池2 2 梭头梭头3 3 样本头样本头4 4 鞘流头鞘流头5 5 透镜透镜6 6 吸收光吸收光7 7 低角度散射光检测低角度散射光检测8 8 高角度散射光检测高角度散射光检测9 9 光源光源8762021/3/26102021/3/26112021/3/2612Side Scatter (Internal structure) 淋巴淋巴细细胞胞 单单核核细细胞胞 嗜中性嗜中性细细胞胞 嗜酸嗜酸细细胞胞 Fluorescence (RNA ,DNA)RBC ghost 嗜碱细胞

4、嗜碱细胞2021/3/2613RBC和PLT检测原理n全血标本稀释后分配到RBC/PLT计数池,鞘流技术产生的层流使这个电阻信号转化为脉冲信号记录下来,脉冲的高度反映了细胞的大小,每个脉冲信号代表一个细胞,收集信号得到RBC和PLT的直方图。2021/3/26142021/3/26152021/3/2616SLS血红蛋白检测方法n检测使用的主要成份为十二烷基磺酸钠n表面活性剂先将RBC溶解,释放出Hb分子nHb分子中的Fe2+被氧化为Fe3+,与SLS结合形成SLS-Hb有色基团,在535nm有最大吸收峰。2021/3/2617SLS血红蛋白检测方法特点n不含氰化物,无毒具有环保性nSLS是一

5、种脂溶性试剂,可减少脂血和高WBC总数造成的浊度对血红蛋白检测的影响2021/3/2618数据异常信息2021/3/2619中性粒细胞增多n感染（急性细菌感染）n组织损伤（心肌梗塞 .手术）n恶性血液病n药物使用(肾上腺素.类固醇)n生理性增高2021/3/2620淋巴细胞增多n恶性血液病n感染(百日咳.传单.病毒性风疹)n应激状态(急性心衰.心脏梗塞.过敏反应)n自身免疫性疾病.肿瘤.吸烟2021/3/2621单核细胞增多n感染(细胞性.败血症)n胶原病n妊娠性WBC增多n霍奇金氏病n恶性肿瘤2021/3/2622嗜酸性细胞增多n过敏反应(药物.寻麻疹)n寄生虫病n皮肤病n纤维瘤n内分泌病感

6、染(结核病)2021/3/2623中性粒细胞减少n严重的细菌感染n白血病.肿瘤骨髓转移n药物n血液恶液质n过敏性休克.酒精中毒2021/3/2624淋巴细胞减少n流行性感冒.败血病n药物(抗肿瘤药物.肾上腺皮质激素)n肿瘤晚期.霍奇金氏病n胶原性疾病(系统性红斑狼疮.类风湿性关节炎)2021/3/2625n干扰因素造成假性增高(降低)2021/3/2626WBC假性增高nPLT聚集n冷凝集n有核红细胞n难溶红细胞n冷球蛋白2021/3/2627PLT假性增高n红细胞碎片n小红细胞n冷白蛋白2021/3/2628PLT假性降低n血小板聚集n巨大血小板2021/3/2629RBC假性增高n白细胞增

7、多n巨大血小板2021/3/2630RBC假性降低n红细胞碎片n冷凝集n小红细胞2021/3/2631急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病Auer小体小体2021/3/2632出现原始粒细胞nDIFF散点图显示:淋巴细胞.单核细胞和原始细胞区域出现大量散点且连成一片,大部分原始细胞由于异常增殖含有过多的DNA/RNA2021/3/2633出现异常淋巴细胞n散点图显示:有大量的异常淋巴细胞,荧光强度较弱而侧向 散射光强度稍强2021/3/2634RBC双峰分布n表示出现大小不同的两群红细胞2021/3/2635缺铁性贫血诊断与铁剂治疗后缺铁性贫血诊断与铁剂治疗后直方图动态变化直方图动态变化- -疗效

8、观察疗效观察 铁剂治疗铁剂治疗2 2周后周后铁剂治疗铁剂治疗4 4周后周后2021/3/2636特发性PLT减少性紫癫(ITP)nPLT直方图分布上,在40fl附近出现一个高峰,提示有大型PLT,因此反映细胞大小的直方图无法将PLT准确检测出来,许多大的PLT被计数成RBC2021/3/2637需要镜检的情况2021/3/2638n、国际血液学复检专家组推荐的41条自动CBC和DC复检规则: 1.新生儿:（1）复检条件:首次检测标本;（2）复检要求：涂片镜检。 2.WBC、RBC、Hb、PLT、网织红细胞（Ret）：（1）复检条件：超出线性范围;（2）复检要求：稀释标本后重新测定。 3.WBC

9、、PLT：（1）复检条件：低于实验室确认的仪器线性范围;（2）复检要求：按实验室标准操作规程（SOP）进行。 2021/3/2639n4.WBC、RBC、Hb、PLT:（1）复检条件:无结果;（2）复检要求:检查标本是否有凝块,重测标本,如果维持不变,用替代方法计数。 5.WBC：（1）复检条件：首次结果30.0 x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 6.WBC：（1）复检条件：3天内Delta值超限，并30.0 x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 2021/3/2640n7.PLT:（1）复检条件:首次结果1000.0 x10e9/L;（2）复检要求:涂片镜检。 8.PLT：（

10、1）复检条件：Delta值超限的任何结果;（2）复检要求：涂片镜检。 9.Hb：（1）复检条件：首次结果其年龄和性别参考范围上限20g/L;（2）复检要求：涂片镜检,确认标本是否符合要求。 10.平均红细胞体积（MCV）：（1）复检条件：24h内标本的首次结果105fl（成人）；（2）复检要求：涂片镜检。 2021/3/2641n11.MCV:（1）复检条件:24小时以上的成人标本105fl;（2）复检要求:涂片镜检观察大红细胞相关变化,如无大红细胞相关变化,要求重送新鲜血标本,如无新鲜血标本，报告中注明。 12.MCV：（1）复检条件：24h内标本的Delta值超限的任何结果;（2）复检要求

11、：确认标本是否符合要求。 13.平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）：（1）复检条件：参考范围上限20g/L;（2）复检要求：检查标本是否有脂血、溶血、RBC凝集及球形红细胞。 2021/3/2642n1622条为白细胞分类的复检规则: 16.无白细胞分类计数（DC）结果或DC结果不全:（1）复检条件:无条件复检;（2）复检要求：人工分类和涂片镜检。 17.中性粒细胞绝对计数（Neut）：（1）复检条件：首次结果20.0 x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 18.淋巴细胞绝对计数（Lym）：（1）复检条件：首次结果5.0 x10e9/L（成人）或7.0 x10e9/L（1.5x10e9/

12、L（成人）或3.0 x10e9/L（2.0 x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 21.嗜碱粒细胞绝对计数（Baso）：（1）复检条件：首次结果0.5x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 2021/3/2644n22.有核红细胞绝对计数（NRBC）:（1）复检条件:首次出现任何结果;（2）复检要求:涂片镜检。 23条为网织红细胞的复检规则： 23.网织红细胞绝对计数（Ret）：（1）复检条件：首次结果0.10 x10e9/L;（2）复检要求：涂片镜检。 2021/3/2645n2441条为可以提示的复检规则: 24.怀疑性报警不成熟粒细胞(IG)/杆状核中性粒细胞（Band）报警提

13、示除外:（1）复检条件:首次成人结果出现阳性报警;（2）复检要求：涂片镜检。 25.怀疑性报警：（1）复检条件：首次儿童结果出现阳性报警;（2）复检要求：涂片镜检。 26.WBC结果不可靠报警：（1）复检条件：阳性报警;（2）复检要求：确认标本是否符合要求并重测标本,如出现同样报警提示,检查仪器,如需要，进行人工分类。 27.RBC碎片：（1）复检条件：阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 28.双形RBC：（1）复检条件：首次结果出现阳性报警；（2）复检要求：涂片镜检。 2021/3/2646注意事项n仪器为筛选试验,不能从测定结果直接 诊断疾病n遇到异常提示时及时镜检n仪器定期保养,保证日

14、常工作正常进行2021/3/26472021/3/2648 （二）血细胞形态变化的一般规律二）血细胞形态变化的一般规律 1. 1.细胞大小及形态细胞大小及形态 大小大小: :由大到小。由大到小。2 2个例外个例外: :巨核细胞及早幼粒细巨核细胞及早幼粒细胞。胞。 形态形态: :红细胞始终圆形红细胞始终圆形, ,粒细胞圆形或椭圆形粒细胞圆形或椭圆形, ,单单核细胞由圆形、椭圆形变为不规则形核细胞由圆形、椭圆形变为不规则形, ,巨核细胞由巨核细胞由圆形变为不规则形。圆形变为不规则形。 2.2.细胞核细胞核 大小大小：由大到小。巨核细胞除外。：由大到小。巨核细胞除外。 核形核形：各系细胞有不同表现。

15、：各系细胞有不同表现。 核位置核位置：红系核居中，粒、单系核偏位，淋巴：红系核居中，粒、单系核偏位，淋巴细胞核一侧着边，仅一侧有胞浆。细胞核一侧着边，仅一侧有胞浆。2021/3/2649 核染色质核染色质: :颜色由浅到深颜色由浅到深, ,染色质由细致染色质由细致疏松到粗糙密集疏松到粗糙密集, ,最后紧缩成块。最后紧缩成块。 核膜核膜: :不明显到明显。不明显到明显。 核仁核仁: :清晰、模糊、消失。清晰、模糊、消失。 3.3.细胞浆细胞浆 量量：由少到多。：由少到多。 颜色颜色：粒、红、巨核由深蓝或浅蓝到：粒、红、巨核由深蓝或浅蓝到浅红浅红; ;淋巴、单核保持浅蓝或灰蓝色淋巴、单核保持浅蓝或

16、灰蓝色; ;浆浆细胞由灰蓝变为深蓝。细胞由灰蓝变为深蓝。 颗粒颗粒：从无到有：从无到有, ,由非特异性到特异性。由非特异性到特异性。2021/3/26502021/3/26512021/3/26522021/3/2653（中幼、晚幼、杆状核、分叶核2021/3/2654n嗜碱粒细胞（早幼、中幼、晚幼、杆状核、分叶核）2021/3/2655n原淋（Lymphoblast）n幼淋（prolymphocyte）n淋巴（lymphocyte）n大淋巴细胞n小淋巴细胞原淋巴细胞幼淋巴细胞:大淋巴细胞小淋巴细胞2021/3/2656n原浆（plasmablast）n幼浆（proplasmacyte）n浆细

17、胞（plasmacyte）原浆细胞幼浆细胞浆细胞2021/3/2657nA.原单（monoblast）nB.幼单（promonocyte）nC.单核（monocyte）nD.吞噬（maerophage）ABC原单核细胞幼单核细胞单核细胞2021/3/2658n原巨（megakaryoblast）n幼巨（promegakaryocyte）n颗粒巨（granular megakaryocyte）n产板巨（thrombacytogenous megakaryocyte）n裸核（naked nucleous）原巨核细胞幼巨核细胞颗粒型巨核细胞产血小板型巨核细胞2021/3/2659推片推片推片、染片的

18、推片、染片的质量质量 2021/3/2660正常骨髓象（油镜）2021/3/26612021/3/26622021/3/26632021/3/2664地中海贫血2021/3/2665慢性ITP骨髓象（高倍镜）2021/3/2666幼红细胞形态异常2021/3/2667核间桥（细胞内）核间桥（细胞内）2021/3/26682021/3/2669核间桥（细胞外）核间桥（细胞外）2021/3/26702021/3/2671核出芽2021/3/2672不对称双核2021/3/2673三核幼红三核幼红2021/3/2674多核幼红、点彩多核幼红、点彩2021/3/2675不对称核分裂象不对称核分裂象2021/3/2676核碎裂核碎裂2021/3/2677幼红细胞多伪足幼红细胞多伪足2021/3/2678核畸形2021/3/2679巨大成熟红细胞2