α淀粉酶的制备

1、项目三:淀粉酶的制备戴金陵生药11212011423231第3组淀粉酶淀粉酶属于水解酶类，是催化淀粉、糖原、糊精中糖苷键水解的一类酶的统称。此类酶广泛存在于动植物和微生物中。根据对淀粉的作用方式不同，可将淀粉酶分为-淀粉酶、-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、脱支酶。 -淀粉酶是一种内切酶，其相对分子量约50000左右，作用于淀粉时，可从淀粉分子内部随机切开-1，4糖苷键，不能切开-1，6糖苷键以及与-1，6糖苷键相连的-1，4糖苷键，但能越过支点切开内部的-1，4糖苷键。其水解产物中除含葡萄糖、麦芽糖外还含有具有-1，6糖苷键的极限糊精和含-1，6糖苷键的具葡萄糖残基的低聚糖。-淀粉酶分布 -淀粉酶广泛

2、分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子，既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地切断1，4-链。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及少量葡萄糖。另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖外，还生成分支部分具有-1，6-键的-极限糊精。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70分解限度的（最终游离出葡萄糖）；1.PH值对酶活性的影响 -淀粉酶通常在PH5.58.0时稳定，在PH4.0以下易失活其作用

3、的最适PH为5.06.0，但不同来源的酶其最适PH值差别很大。动物的-淀粉酶在氮离子存在时其最适作用PH为7.0，高等植物在PH 3.6以下时失活，耐酸性的-淀粉酶最适作用PH为4.0左右，在PH2.56.5稳定；非耐酸的-淀粉酶最适PH为6.5左右，在PH5.59.5稳定。2.温度对酶活性的影响 温度对酶活性有很大影响，温度升高，酶的反应速度就增加，一般每升高十摄氏度，反应速度可增加23倍,但是大多数酶都是蛋白质，温度过高则可导致蛋白质变质，从而使酶失活。在一定条件下，在某一温度时酶的反应速度最大。这使得反应速度是最适反应温度。3.金属离子对酶活性的影响 -淀粉酶是一种金属酶，每分子酶含有一

4、个Ca，Ca可使酶分子保持相当稳定的构象，从而可以维持酶的最大活性及热稳定性。 Ca对酶的结合度，按产生菌而言依次是 霉菌细菌动物植物。除了Ca其他金属离子也可以提高酶的热稳定性。原理:-淀粉酶的生产 -淀粉酶可有微生物发酵产生，也可从植物和动物中提取。目前，工业生产上都以微生物大量生产。主要的-淀粉酶生产菌种由细菌和曲霉，尤其是枯草杆菌为大多数工厂所采用。生产上有使用价值的产生菌有：枯草杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、凝聚芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉、拟内孢霉。 对于最适温度在60以上命名为中温型-淀粉酶；最适反应温度在90以上的命名为高温-淀粉酶；最适PH的为酸性-淀粉酶；

5、最适反应PH的为碱性-淀粉酶 1.菌种：枯草芽孢杆菌菌种：枯草芽孢杆菌JD-32生产法生产法 2.仪器：培养皿、试管、发酵罐、灭仪器：培养皿、试管、发酵罐、灭菌锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机菌锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机保藏菌种保藏菌种斜面活化斜面活化摇瓶种子摇瓶种子培养培养厚层通风厚层通风发酵发酵麸曲麸曲烘干烘干抽提抽提粗制品粗制品过滤过滤收集滤液收集滤液沉淀沉淀离心离心洗涤沉淀洗涤沉淀风干风干粉碎粉碎精制品精制品种子罐扩种子罐扩大培养大培养1.培养基培养基的制备的制备与灭菌与灭菌发酵培养基：蛋白胨发酵培养基：蛋白胨5g，酵母膏，酵母膏2.5g，葡萄糖，葡萄糖0.5g,可溶性淀粉可溶性淀粉

6、2 . 5g，KH2PO4 1g，MgSO4.7H2O 0.25g，CaCl2.2H2O 0.1g，H2O 500mL，pH7.0。分装于。分装于100mL锥形瓶中，每锥形瓶中，每瓶瓶50mL，121灭菌灭菌20min。2.接种与产酶培养接种与产酶培养将菌种接种于培养基斜面，将菌种接种于培养基斜面，35培培养三天，然后转接到摇瓶种子培养基，养三天，然后转接到摇瓶种子培养基，摇瓶培养一定时间，当菌体进入对数生摇瓶培养一定时间，当菌体进入对数生长期时，以长期时，以0. 5%接种量接入固体培养基接种量接入固体培养基（麸皮、米糠、豆饼粉、火碱、水；（麸皮、米糠、豆饼粉、火碱、水；ph=7左右，常压汽蒸一小时，冷却到左右，常压汽蒸一小时，冷却到3840）在厚层通风制曲箱内，通风）在厚层通风制曲箱内，通风保持保持3742，培养，培养48小时出曲风干。小时出曲风干。3.提取提取 麸曲用麸曲用1食盐水食盐水34倍浸泡