实验二酶的底物专一性

1、1实验二实验二 酶的底物专一性2实验目的l了解酶的专一性了解酶的专一性l掌握检查酶专一性的原理和方法掌握检查酶专一性的原理和方法l学会排除干扰因素，设计酶学实验学会排除干扰因素，设计酶学实验3实验内容实验内容4 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性程度分为：程度分为：l键专一性：键专一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求。如酯酶、核酶团无严格要求。如酯酶、核酶l基团专一性：基团专一性：对键两端或一端的基团

2、要求严格，如对键两端或一端的基团要求严格，如-、-葡萄糖苷酶，转移酶葡萄糖苷酶，转移酶l绝对专一性：绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶只作用于一种底物，如某些核酸工具酶l立体异构专一性：立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性旋光异构专一性和几何异构专一性实验原理实验原理-5淀淀 粉粉直链淀粉直链淀粉: 由由200-300个个-葡萄糖以葡萄糖以-1，4糖苷糖苷键相连成一直链键相连成一直链支链淀粉支链淀粉:有有-1，4糖苷键和糖苷键和-1，6糖苷键，糖苷键，在直链淀粉的基础上形成分支在直链淀粉的基础上形成分支6 直链淀粉直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，直链淀粉的的相对分子质

3、量比支链淀粉小，直链淀粉的分子是由许多分子是由许多-D-D-葡萄糖经过葡萄糖经过-1-1，4-4-苷键反复连接而成苷键反复连接而成的线状聚合物。的线状聚合物。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHO-1,4-苷 键7 直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有 6 6个葡萄糖结构单位。个葡萄糖结构单位。 直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉

4、或却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。碘的存在。8 支链淀粉支链淀粉比直链淀粉由更多的比直链淀粉由更多的D-D-葡萄糖组成，其连接方式也有葡萄糖组成，其连接方式也有所不同。支链淀粉中所不同。支链淀粉中D-D-葡萄糖之间以葡萄糖之间以-1-1，4 4苷键连接成主链，每苷键连接成主链，每隔隔20202525个葡萄糖单位便分枝出个葡萄糖单位便分枝出1 1个支链，支链上还有分枝，而支个支链，支链上还有分枝，而支链的连接点即分枝处为链的连接点即分枝处为-l-l，6 6糖苷键。糖苷键。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OOOHOHCH2OHOOOOHOHC

5、H2OHOOOHOHCH2OHO -1,6-苷键 -1,4-苷键9支链淀粉，平均每支链淀粉，平均每2530个单位产生个单位产生1个分支。个分支。糖原，平均每糖原，平均每812个单位产生个单位产生1个分支。个分支。10 由-葡萄糖和-果糖以-1，2糖苷键相连而成的双糖蔗蔗 糖糖11Benedict反应反应 lBenedictBenedict试剂试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。l淀粉淀粉和蔗糖蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉

6、及蔗糖的水解作用。12半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧-D-葡萄糖；半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧-D-葡萄糖。 RCOHHO R+R CHOHOR半缩醛HCOHHHOOHHOHHCH2OHCOHHHHOOHHOHHCH2OHOHOHHCOHHHOOHHHCH2OHHOHOHCOHHHOOHHHCH2OHHOHO-D-葡萄糖-D-葡萄糖13试试 剂剂注：注：Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。其它的阴离子，如是唾液淀粉酶的激活剂。其它的阴离子，如Br-、NO3-和和I-对该酶也有激活作用，但较微弱。而对该酶也有激活作用，但较微弱。而Cu2+对唾液对唾液淀粉酶具有抑制作用。淀粉酶具有抑制作用。14试试 剂剂15Benedict试剂l 在在600mL600mL蒸馏水中溶解蒸馏水中溶解173g173g柠檬酸钠柠檬酸钠和和100g100g无水无水碳酸钠碳酸钠，冷却后稀释到，冷却后稀释到850mL850mL。l在在100mL热蒸馏水中溶解热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜无水硫酸铜。冷却。冷却后稀释到后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上