离子色谱抑制电导法测定氨基糖苷类药物中的

1、离子色谱抑制电导法测定氨基糖苷类药物中的硫酸根和阴离子杂质郑婷 (戴安中国有限公司,北京，100029，zhengting)摘要：本文建立了一种采用离子色谱法，抑制型电导检测器测定氨基糖苷类药物中的硫酸根和阴离子杂质 的方法。选择的色谱条件为： IonPac AS18和IonPac AS11-HC阴离子交换柱，氢氧化钾梯度淋洗，抑制型电导检测。使用不同柱子两种方法检测限分别是（S/N=3）为 3.09.3和50150g/L，线形相关系数r2 0.99940.9998和0.99960.9999，RSD均小于3。这两种方法都可以用于具体样品的定量分析。 关键词：离子色谱；硫酸根溴；阴离子杂质；AS

2、18色谱柱；AS11-HC 氨基糖苷类药物在控制需氧菌、革兰氏阴性菌和一些革兰氏阳性菌时是一种大量和广泛使用的抗生素。这类抗生素通常用来治疗腹部和尿道的严重感染，也用来治疗细菌感染和心内膜炎。常见的氨基糖苷类药物有庆大霉素、托普霉素、阿米卡星、链霉素。约20-30%（w/w）的氨基糖苷类化合物都成硫酸盐。 本研究使用Ionpac AS18或 Ionpac AS11-HC阴离子交换柱来测定氨基糖苷类药物中的对离子硫酸根和阴离子杂质。AS18色谱柱是由高度交联的聚附阴离子交换基团的乳胶微粒组成的，这种乳胶表面键合了高亲水性的季铵活性基团。对于分离各种样品中常见的无机阴离子和小分子有机酸AS18的选

3、择性得到了最大优化。AS18对于测定药品中的主要对阴离子是理想的选择。AS 11-HC是9微米多孔树脂微球构成的，这种微球表面附聚了键合季铵功能基的阴离子交换薄膜。在分析复杂样品中的多种有机酸和无机阴离子时AS 11-HC的选择性得到了最大优化。AS 11-HC对于测定痕量组分和测定非特征样品中的有机酸是理想的选择。这两种柱子都采用氢氧化物作为淋洗液，这样可以由淋洗液发生装置通过水的在线电解自动产生淋洗液。本应用详述了电解产生氢氧化钾淋洗液测定硫酸根对离子和氨基糖苷类药物中阴离子杂质，并考察了该阴离子交换色谱法的线性关系、检测限、灵敏度和回收率。含自动淋洗液发生装置的离子色谱系统（RFIC）和

4、高选择性色谱柱满足了制药工业中对离子检测的需求。该方法准确，精密，实用，并可在各个实验室便捷传递。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Dionex ICS-3000离子色谱仪，Chromeleon 6.8色谱工作站。乙酸钠 (Sigma-Aldrich)，氯化钠（J.T.Baker），硫酸钠 (Aldrich 29，931-3)，无水磷酸氢二钠（J.T.Baker;VWR），十水合焦磷酸钠 (Sigma-Aldrich)，二硫酸阿米卡星 (Sigma-Aldrich A 1774)，3/2硫酸二水合链霉素(Sigma-Aldrich D7253)，硫酸卡那霉素和卡那霉素A (Sigma-Ald

5、rich K 4000)， 硫酸卡那霉素B(Sigma-Aldrich B 5264)。水合三硫酸新霉素(Sigma-Aldrich N 5285)，硫酸巴龙霉素(Sigma-Aldrich P 9297)，硫酸巴龙霉素(USPCatalog#1500003 )，五硫酸西索米星(Sigma-Aldrich S7796)，巴龙霉素(硫酸巴龙霉素胶USP,Monarch Pharmaceuticals,Bristol,TN)。 所有用水均为电阻率18 M cm的去离子水。1.2 色谱条件 方法1 色谱柱: Dionex Ionpac As18分离柱和IonPac AG18保护柱 淋洗液; 22mM

6、, KOH,0-7min 22-40mM, 7-8min 40mM, 8-20min 流速为0.25mL/min，温度30，进样体积5L，抑制电导ASRS (2mm),循环模式，电流25mA 方法2：色谱柱: Dionex Ionpac As11HC分离柱和IonPac AG11HC保护柱 淋洗液; 1mM, KOH, 0-5min 1-5 mM, KOH, 5-9min 5-38 mM, KOH,9-20min 38-60 mM, KOH,20-25min 60mM, KOH,25-30min 流速0.38mL/min，温度30，进样体积5L，抑制电导ASRS,循环模式，电流62mA 1.3

7、 样品前处理 本方法中，约120mg的每种硫酸氨基糖苷化合物固体样品分别放在的已知重量的1.5mL具盖聚丙烯小瓶中，未干燥样品的准确重量已测知。除去盖子的聚丙烯小瓶被放在SpeedVac真空干燥箱（7mmHg）中加热至50保持24小时。小瓶、盖子和干燥后的固体均被准确称重（测知水分含量约为0.7-11.4%）干燥后的样品被溶解至适量的水中配成100mg/L的浓度。一级样品稀释液浓度为1.0mg/L。最终将样品稀释至0.05mg/L的浓度，用来进样到Ionpac AS 18色谱柱上测定硫酸根对离子的含量和阴离子杂质的含量。 硫酸巴龙霉素胶囊被小心打开并露出其中的固体，胶囊和固体整个放入含有100

8、.00.1g水的120mL高密度聚乙烯（HPDE）瓶中，充分溶解。8份1.0mL的该样品分别置于1.5mL的离心管中16000转/分钟离心10分钟，溶液被收集到20mL闪烁瓶中，根据标签所示浓度，最终样品的浓度为2.50mg/mL巴龙霉素游离碱。这个样品可直接进样到Ionpac AS 11 HC色谱柱上测定样品中杂质的浓度，或稀释10倍来测定硫酸根的浓度。 2 结论: 本应用研究表明使用Ionpac AS 18或Ionpac AS 11-HC色谱柱均能测定氨基糖苷硫酸盐中的硫酸根对离子和杂质阴离子的含量。Ionpac AS18色谱柱能够在16分钟内测定常见的无机阴离子，适合于分析具典型特征药物的高通量分析。Ionpac AS 11-HC色谱柱能够分析无典型特征药物配方中的广泛种类的无机和有机阴离子，使得从分析物中获得更多的药品组分信息。RFIC系统简化了配制淋洗液所需的人工，提升了自动化程度和离子色谱系统的实用性，提高了分析物和实验室数据的重现性。RFIC系统优秀的灵敏度使得杂质阴离子的测试降