T细胞斑点试验

1、.1T-SPOT.TB杨中平.2结核感染结核感染T细胞斑点检测细胞斑点检测vT细胞斑点试验（T-SPOT），又叫作结核感染干扰素释放试验（Interferon Gamma Release Assays，IGRAs .3结核的现状结核的现状 结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计，全球约有统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约亿人感染结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核。万人死于结核。 我国是世界上我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的感染导致的死亡人数是

2、其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。倍以上。.4基于基于T淋巴细胞检测淋巴细胞检测结核感染的原理结核感染的原理vT-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天，的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参可以给临床诊断提供参考。考。v基于结核抗原特异性基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的细胞向病变部位集中的特点，特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等

3、也可用于对肺内及肺外结核的诊断。也可用于对肺内及肺外结核的诊断。.5T-SPOT的意义v1:菌阴，结核病患者的辅助诊断v2：肺外结合的鉴别诊断v3：免疫力低下/受抑制患者的结核诊断/感染筛查v4：儿童结核病的辅助诊断.6T-SPOT注意事项v1:肝素抗凝全血，常温保存,不得冷冻或冷藏。v2:采血量：三岁以下2ML，3-9岁4ML，9岁以上6ML，免疫力低下或白细胞低下采6ML（本公司一律两管）v3:样本必须4小时内送达。v4：输血受试者或PET-CT受试者，两周后检测。v5：受试者需阅读知情同意书并填写申请单。.7基于基于T淋巴细胞检测淋巴细胞检测结核感染的原理结核感染的原理.8结核的传统诊断

4、手段结核的传统诊断手段结核菌素皮试：结核菌素皮试：低敏感性：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特异性：低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。细菌学检查：细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周； 阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。病理学检查：病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。.9基于基于T淋巴细胞检测淋巴细胞检测结核感染的原理结核感染的原理v结核感染的免疫应答反应以结核感染的免疫应答反应以细胞免疫细胞免疫为主，结为主，结核感染后体内长期存在核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性抗原特异性的

5、记忆性T细胞细胞v当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放放r r干扰素干扰素vr r干扰素干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子中最重要的细胞因子.10基于基于T淋巴细胞检淋巴细胞检测结核感染的原理测结核感染的原理T-SPOT.TB技术：技术：v利用结核杆菌感染者利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（外周血单个核细胞（PBMC）中中存在存在结核特异性结核特异性T T细胞细胞，这些淋巴细胞在受到，这些淋巴细胞在受到结核特异结核特异 抗原刺激抗原刺激后后分泌分泌r r干扰素干扰素而设计的而设计的T T细胞免

6、疫斑点试验。细胞免疫斑点试验。v检测外周血中受检测外周血中受结核特异抗原刺激结核特异抗原刺激释放释放r r干扰素干扰素的的T T淋淋巴细胞巴细胞，经酶联免疫显色后，通过，经酶联免疫显色后，通过ELISPOTELISPOT分析系统分析系统 对斑点进行计数，对斑点进行计数，1 1个斑点代表一个细胞，计算出抗原个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。特异性细胞的频率。.11基于基于T淋巴细胞检测淋巴细胞检测结核感染的原理结核感染的原理v空白对照孔内斑点数小于空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑且阳性对照孔内斑点数大于点数大于20时视为试验有效时视为试验有效vT-SPOT.TB试验结果用每试验结果用每106 PBMCs中斑点形中斑点形成细胞（成细胞（SFCs）的数目来描述，即）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs.12基于基于T淋巴细胞检淋巴细胞检测结核感染的原理测结核感染的原理包包.13基于基于T淋巴细胞检淋巴细胞检测结核感染的原理测结核感染的原理.14T-SPOT.TB的临床意义的临床意义vT-SPOT.TB