高效毛细管电泳仪的原理、应用

1、CompanyLOGO毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)Contents展望展望毛细管电泳的应用毛细管电泳的应用毛细管电泳的类型毛细管电泳的类型毛细管电泳仪的基本结构毛细管电泳仪的基本结构毛细管电泳的基本概念和原理毛细管电泳的基本概念和原理一、毛细管电泳的基本概念和原理一、毛细管电泳的基本概念和原理v 电泳：在外加电场的作用下，带电的胶体粒子或离子在分散介质中作电泳：在外加电场的作用下，带电的胶体粒子或离子在分散介质中作定向移动的现象。定向移动的现象。v 毛细管电泳：以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品毛细管电泳：以高压电场为驱动力，以毛细管为分

2、离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离分析物质的一类液中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离分析物质的一类液相技术，是经典电泳技术与现在微柱分离的结合。相技术，是经典电泳技术与现在微柱分离的结合。v 淌度：无限稀释溶液中带电离子在单位电场强度下的平均迁移速度淌度：无限稀释溶液中带电离子在单位电场强度下的平均迁移速度v/E经典电泳分离法与高效毛细管电泳对比1、所用分离柱的柱径大、所用分离柱的柱径大 柱较短柱较短2、分离效率不高、分离效率不高 远低于远低于HPLC3、温度影响大、温度影响大经典电泳分离法经典电泳分离法1、采用了几十、采用了几十m内径内径 的毛细管的毛细管

3、2、采用了高达数千伏、采用了高达数千伏 的电压的电压3、电流很小、电流很小高效毛细管电泳高效毛细管电泳电泳过程电泳过程v 在芯片电泳过程中，电泳与电渗流并存。因此，在不考虑溶液中离在芯片电泳过程中，电泳与电渗流并存。因此，在不考虑溶液中离子相互作用的前提下，实际所测得的离子淌度是电泳有效淌度与电渗流子相互作用的前提下，实际所测得的离子淌度是电泳有效淌度与电渗流淌度的矢量和，即表观淌度（淌度的矢量和，即表观淌度（apparent mobility, ap） 。ap=ef +eo 电场作用下，柱中出现：电泳现象和电渗流现象。电场作用下，柱中出现：电泳现象和电渗流现象。电泳过程电泳过程ap=ef +

4、eov 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；v 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离后流出；中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离后流出；v 阴离子：两种效应的运动方向相反，阴离子：两种效应的运动方向相反，eo ef时时, 阴离子在负极最后阴离子在负极最后流出流出,在这种情况下在这种情况下,不不 但可以按类分离但可以按类分离,除中性粒子外除中性粒子外,同种类离子由同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。电渗流电渗流( (electroosmotic flow ，EOF)

5、 v 在熔融毛细管内壁的在熔融毛细管内壁的Si-OH，解离为硅氧基，解离为硅氧基（Si-O-）-与与H+。H+与与H2O形成形成H3O+，而，而毛细管内壁的硅氧基阴离子吸引了溶液中毛细管内壁的硅氧基阴离子吸引了溶液中的阳离子，在其表面带形成双电层。双电的阳离子，在其表面带形成双电层。双电层外缘扩散层中的阳离子被电场阴极吸引层外缘扩散层中的阳离子被电场阴极吸引导致溶液向阴极移动，这种效应就是电渗导致溶液向阴极移动，这种效应就是电渗效应。效应。v 电渗效应产生电渗流（电渗效应产生电渗流（EOF）。）。电渗流电渗流( (electroosmotic flow ，EOF) v 电渗流的大小用电渗流速度

6、电渗流的大小用电渗流速度veo表示，其大小取决于表示，其大小取决于电渗淌度电渗淌度eo，和电场强度，和电场强度E，即：，即： Veo=eo . Ev 影响影响EOF速度的主要因素有电场强度、管壁的速度的主要因素有电场强度、管壁的zeta电电势和溶液的特性。而势和溶液的特性。而zeta电势受管壁材料及其表面特性和电势受管壁材料及其表面特性和溶液性质的影响。溶液性质的影响。v 电渗流在电泳分离中扮演着重要角色。通过控制电渗流在电泳分离中扮演着重要角色。通过控制EOF的大小和方向，可以影响到芯片电泳分离的效率、选择性的大小和方向，可以影响到芯片电泳分离的效率、选择性和分离度，因此控制和分离度，因此控

7、制EOF成为优化分离条件的重要参数。成为优化分离条件的重要参数。电渗流的大小电渗流的大小v 电渗流的大小用电渗流速度电渗流的大小用电渗流速度eo表示，取决于电渗淌度表示，取决于电渗淌度eo和电和电场强度场强度E。即即eo= eo E电渗淌度电渗淌度eo取决于电泳介质及双电层的取决于电泳介质及双电层的Zeta电势，即电势，即 eo = 0 0真空介电常数真空介电常数 介电常数介电常数 毛细管壁的毛细管壁的Zeta电势。电势。v 实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 eo = Lef/teo Lef 毛细管有效长度毛细管有效长度 teo电

8、渗流标记物（中性物质）的迁移时间电渗流标记物（中性物质）的迁移时间电渗流的流形电渗流的流形v 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）宽很小）v 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。倍（引起谱带展宽较大）。影响电渗流的因素影响电渗流的因素v1、电场强度的影响、电场强度的影响 v2、毛细管材料的影响、毛细管材料的影响 v3、电解质溶液性质的影响、电解质溶液性

9、质的影响v4、温度的影响、温度的影响v5、添加剂的影响、添加剂的影响影响电渗流的因素影响电渗流的因素v 1.电场强度的影响电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。eo = eo Ev 2.毛细管材料的影响毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小和方向不同；产生的电渗流大小和方向不同；影响电渗流的因素影响电渗流的因素v 3. 电解质溶液性质的影响电解质溶液性质的影响v （1）溶液）溶液pH的影响的影响 对于石英毛

10、细管，溶液对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大；达到最大； pH 电泳电泳 ，则带负电的胶束以较慢的速度向，则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。可用来分离中性物疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。 在缓冲溶液中加入

11、离子型表面活性剂，当它浓度达到足够大时在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，当它浓度达到足够大时,形形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力作用下，胶束在毛细管成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力作用下，胶束在毛细管中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且电渗流电渗流 电泳电泳 ，则带，则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。可用来分离中性物质

12、，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。时间长。可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。(1)原理原理毛细管胶束电动色谱（MECC）Company L 在毛细管胶束电泳的系统中存在两相，即被分离物质在流动在毛细管胶束电泳的系统中存在两相，即被分离物质在流动的水相和起固定作用的胶束相，在电场的作用下溶质在两相之间的水相和起固定作用的胶束相，在电场的作用下溶质在两相之间分配。溶质分子根据疏水性的大小，在胶束与溶液之间进行分离。分配。溶质分子根据疏水性的大小，在胶束与溶液之间进行分离。形成电泳和层析同时存在的胶束电动分离机制。它与普通层析分形成电泳和层析同时存在的胶束电动分离机制。它与普通层析

13、分离不同的，作为固定相的胶束是移动的，即在电场的作用下作定离不同的，作为固定相的胶束是移动的，即在电场的作用下作定向泳动。向泳动。 阴离子胶束在电场中向阳极迁移，如：十二烷基磺酸钠阴离子胶束在电场中向阳极迁移，如：十二烷基磺酸钠（SDS）。阳离子胶束在电场中向阴极迁移。如：十二烷基三）。阳离子胶束在电场中向阴极迁移。如：十二烷基三甲基季胺甲基季胺(DTAC)。 (2) 作用机理作用机理毛细管胶束电动色谱（MECC） 在胶束电泳中，组分是根据其疏水性的差异进行分离的，不同在胶束电泳中，组分是根据其疏水性的差异进行分离的，不同疏水性的粒子与胶束相互作用不同，疏水性强的作用力大，保留时疏水性的粒子与

14、胶束相互作用不同，疏水性强的作用力大，保留时间长，否则相反。分离过程如下：间长，否则相反。分离过程如下： a. 不与胶束结合的组分，比胶束泳动速度快而最先出来。不与胶束结合的组分，比胶束泳动速度快而最先出来。 b. 与胶束结合的组分，与胶束泳动速度一样，最后出来。与胶束结合的组分，与胶束泳动速度一样，最后出来。 c. 具有一定疏水基团的中性粒子，在胶束和溶液之间进行分配具有一定疏水基团的中性粒子，在胶束和溶液之间进行分配，因此它界于上述二者之间出来。，因此它界于上述二者之间出来。(3) 胶束分离过程胶束分离过程毛细管胶束电动色谱（MECC） 胶束电泳分离过程示意图 毛细管胶束电动色谱（MECC

15、） 胶束毛细管电泳常用的表面活性剂主要分两类：阳离子表面活胶束毛细管电泳常用的表面活性剂主要分两类：阳离子表面活性剂和阴离子表面活性剂。性剂和阴离子表面活性剂。 阴离子表面活性剂十烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠(SDS)十四烷基硫酸钠(STS) 种 类 名 称 阳离子表面活性剂十二烷基三甲基季胺氯(DTAC)十二烷基三甲基季胺溴(DTAB)十六烷基三甲基季胺氯(CTAC)(4) 胶束的种类胶束的种类毛细管胶束电动色谱（MECC）a 蛋白分离蛋白分离: 用非离子型表面活性分离神经肽，分离条件：用非离子型表面活性分离神经肽，分离条件：250mmol/L 磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，pH7.0,80mmol/

16、L的辛基葡萄糖苷，电场强度的辛基葡萄糖苷，电场强度E = 250V/cm, 电流电流I=33A，毛细管长度，毛细管长度 L=70cm ，内径，内径id=17m，检测波长检测波长 =210nm。(5) 胶束电泳的应用胶束电泳的应用毛细管胶束电动色谱（MECC） b 氨基酸的分离氨基酸的分离: 胶束电泳分离胶束电泳分离PTH氨基酸氨基酸毛细管胶束电动色谱（MECC）毛细管等电聚焦（毛细管等电聚焦（CIEFCIEF）v 在毛细管中充上两性电解质载体，在毛细管两端施加在毛细管中充上两性电解质载体，在毛细管两端施加电压，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的电压，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的PH梯

17、度，梯度，当注入样品时，样品会因为他们的等电点不同也在电场作当注入样品时，样品会因为他们的等电点不同也在电场作用下在管道中迁移到不同的位置形成聚焦区带，实现组分用下在管道中迁移到不同的位置形成聚焦区带，实现组分之间的分离分析。之间的分离分析。v 适用样品对象：蛋白质适用样品对象：蛋白质 毛细管等电聚焦电泳(CIEF) 在毛细管内填充含有两性电解质的凝胶溶液，聚胶后将毛细管在毛细管内填充含有两性电解质的凝胶溶液，聚胶后将毛细管的阴极放入碱性电极槽，阳极放入酸性电极槽，施加一定的电压的阴极放入碱性电极槽，阳极放入酸性电极槽，施加一定的电压自动形成自动形成pH梯度。被分离的蛋白质在电场的作用下，开始

18、迁移梯度。被分离的蛋白质在电场的作用下，开始迁移直至到达一个不带电荷的稳定区，停止运动。具有不同等电点的直至到达一个不带电荷的稳定区，停止运动。具有不同等电点的蛋白质组分在蛋白质组分在pH梯度胶中泳动时，各自按照自身所带电荷相反梯度胶中泳动时，各自按照自身所带电荷相反的方向（等电点方向）迁移，最后停留在等电点的位置，形成一的方向（等电点方向）迁移，最后停留在等电点的位置，形成一条电泳区带，各组分彼此被分开。条电泳区带，各组分彼此被分开。(1) 原理：原理： 毛细管等电聚焦电泳的分离是根据组分的毛细管等电聚焦电泳的分离是根据组分的pI进行的。当被分离进行的。当被分离组分达到其组分达到其pI位置时

19、就会停止迁移，如何将已分离好的样品逐个转位置时就会停止迁移，如何将已分离好的样品逐个转移出来是很重要的。具体步骤如下：移出来是很重要的。具体步骤如下：进样：将样品以进样：将样品以12的浓度与两性电解质混合，采用压差法将两的浓度与两性电解质混合，采用压差法将两性电解质和样品的混合物压入毛细管内。性电解质和样品的混合物压入毛细管内。(2)分离过程：分离过程： 毛细管等电聚焦电泳(CIEF)电泳：接通电源电泳：接通电源(6-8KV)，在恒压下电泳，由于两性离子不，在恒压下电泳，由于两性离子不 断递减，电流也随之不断下降，待电泳基本趋于零断递减，电流也随之不断下降，待电泳基本趋于零 时即可。时即可。电

20、迁移：被分离的物质各自停留在其等电点区域，这时将电迁移：被分离的物质各自停留在其等电点区域，这时将 阴极槽中的阴极槽中的NaOH 用用NaOH + HCl 取代，再施加电取代，再施加电 压使压使Cl-进入毛细管内，然后进行电迁移，这时毛细进入毛细管内，然后进行电迁移，这时毛细 管内的管内的pH梯度就会下降，使已分离的蛋白质重新带梯度就会下降，使已分离的蛋白质重新带 上电荷，按上电荷，按pI值大小顺序逐个迁移出来。值大小顺序逐个迁移出来。 毛细管等电聚焦电泳(CIEF)毛细管等速电泳（毛细管等速电泳（CITPCITP）v 毛细管中充满前导电解质，样品池中放置尾随电解毛细管中充满前导电解质，样品池

21、中放置尾随电解质，前导电解质的淌度大于样品中各组分的淌度，尾随电质，前导电解质的淌度大于样品中各组分的淌度，尾随电解质的淌度小于样品中各组分的淌度，当施加电压后，前解质的淌度小于样品中各组分的淌度，当施加电压后，前导电解质最先向阴极移动，然后是样品中淌度大的组分，导电解质最先向阴极移动，然后是样品中淌度大的组分，依此类推，最后移动的是尾随电解质，之后他们就以相同依此类推，最后移动的是尾随电解质，之后他们就以相同的移动速度向阴极移动，达到分离检测的目的。的移动速度向阴极移动，达到分离检测的目的。(1)原理：原理： 在被分离组分与电解质一起向前移动的同时进行聚焦分离的电泳方在被分离组分与电解质一起

22、向前移动的同时进行聚焦分离的电泳方法。法。 如同等电聚焦电泳一样，等速电泳的毛细管内电渗流为零，缓冲系如同等电聚焦电泳一样，等速电泳的毛细管内电渗流为零，缓冲系统由前后两种不同淌度的电解质组成。在电泳分离时，首先向毛细管内统由前后两种不同淌度的电解质组成。在电泳分离时，首先向毛细管内引入高于被分离物质各组分电泳淌度的电解质引入高于被分离物质各组分电泳淌度的电解质(称为前导电解质，称为前导电解质，Leading Electrolyte)，然后进样，随后再引入低于被分离物质各组分电，然后进样，随后再引入低于被分离物质各组分电泳淌度的电解质泳淌度的电解质(称为尾随电解质，称为尾随电解质，Termin

23、ating Electrolyte)。在电场作。在电场作用下各组分在前导电解质和尾随电解质之间进行聚焦分离。用下各组分在前导电解质和尾随电解质之间进行聚焦分离。 毛细管等速电泳(CITP) (2)毛细管等速电泳缓冲液的选择：毛细管等速电泳缓冲液的选择： 前导电解质：5nmol 磷酸 尾随电解质：100nmol 结 氨酸，用伯胺调节所需pH值。(3)等速电泳分离等速电泳分离PTH氨基酸氨基酸毛细管等速电泳(CITP)毛细管等速电泳分离原理示意图毛细管等速电泳分离原理示意图毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGECGE） 将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成

24、凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、定蛋白质、DNA等等。毛细管凝胶筛分电泳的基本原理与常规的凝胶电泳相同毛细管凝胶筛分电泳的基本原理与常规的凝胶电泳相同，是在毛细管内填充了凝胶类多聚物，其具有多孔性，是在毛细管内填充了凝胶类多聚物，其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子在电泳时按大小被分离。类似分子筛的作用，试样分子在电泳时按大小被分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。能够有效减小组分扩散

25、，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、可分离测定蛋白质、DNA等。等。毛细管凝胶电泳（CGE）(1)原理：原理：无机凝胶：如多孔硅胶，多孔玻璃等。无机凝胶：如多孔硅胶，多孔玻璃等。有机凝胶：如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。有机凝胶：如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。分离生物大分子使用的凝胶主要是有机凝胶。在毛细管凝胶电分离生物大分子使用的凝胶主要是有机凝胶。在毛细管凝胶电泳中主要用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺泳中主要用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺(SDSPAGE)，甲基，甲基纤维素，羟基丙基纤维素等。纤维素，羟基丙基纤维素等。(2) 凝胶分类凝胶分类毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管电泳分

26、离标准蛋白图谱(3) 应用应用毛细管凝胶电泳（CGE） 使用粘度低的线性聚合物，如甲基纤维素，羟基丙基纤维素使用粘度低的线性聚合物，如甲基纤维素，羟基丙基纤维素等。不加聚合剂处理一单体的形式填充到毛细管内，同样也有和等。不加聚合剂处理一单体的形式填充到毛细管内，同样也有和很好的分子筛的作用。因此，把这类填料制成的毛细管称之为无很好的分子筛的作用。因此，把这类填料制成的毛细管称之为无胶筛分。无胶筛分与凝胶筛分所起的作用是相似的。胶筛分。无胶筛分与凝胶筛分所起的作用是相似的。 优点：凝胶聚合过程中容易产生气泡的弊端、操作简便、优点：凝胶聚合过程中容易产生气泡的弊端、操作简便、毛细管使用寿命长、柱内

27、的填料可以更换。毛细管使用寿命长、柱内的填料可以更换。 缺点：是分离效果略比凝交差一点。缺点：是分离效果略比凝交差一点。无胶筛分毛细管电泳（无胶筛分毛细管电泳（NGCENGCE）毛细管电渗色谱（毛细管电渗色谱（CECCEC）v 在毛细管壁上键合涂渍或填充在毛细管壁上键合涂渍或填充HPLC固定相微粒，以固定相微粒，以试样与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流试样与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。动相驱动力的色谱过程。思考：各种电泳方式比较思考：各种电泳方式比较v 相同点？相同点？v 不同点：？不同点：？ 机理：机理： 适用的样品范围：适用的样品范围： 优

28、缺点：优缺点：四、毛细管电泳的应用四、毛细管电泳的应用毛细管毛细管电泳电泳食品安全食品安全生命科学生命科学药物研究药物研究资源环境资源环境生命科学生命科学v蛋白质分析蛋白质分析vDNA分析分析v基因分析基因分析v血液分析血液分析 毛细管电泳在蛋白质分析的应用毛细管电泳在蛋白质分析的应用v分子量的测定v等电点的测定v肽谱分析（指纹图）测定蛋白质的一级结构v迁移率的测定示例示例1516171819201.52.02.53.03.54.04.5t/minMW/104Mw=4989tR-57295R=0.9965先测出标准蛋白，如左图显示了由214nm紫外吸收检测得到的谱图。由此，可算出如下图分子量迁

29、移时间工作曲线图或计算出回归曲线方程再测未知样品的tR ，然后与工作曲线进行标准比较。标准曲线法示例示例 猪基因组猪基因组DNA及及PCR产物测试产物测试电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），），6X载载样缓冲液样缓冲液 ： 0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青二甲苯青 ，40%蔗糖水溶液蔗糖水溶液; 0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青二甲苯青 ，30%甘油水溶液甘油水溶液示例示例 1g 琼脂糖加入琼脂糖

30、加入100ml 1TAE电泳缓冲液中，摇匀。电泳缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。（冷却到在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。（冷却到60，加入，加入100l的的0.5mg/ml EB，并摇匀。），并摇匀。） 用胶带将制胶板两端封好，用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子插入适当梳子，将溶解的，将溶解的琼脂糖（约琼脂糖（约50）倒入，室温冷却凝固）倒入，室温冷却凝固 充分凝固后撕掉两端的胶布，将凝胶置入电泳槽中，充分凝固后撕掉两端的胶布，将凝胶置入电泳槽中，加加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm，小心，小心垂直向上拔出梳子。垂直向上拔出梳子。(4) 用移

31、液器吸取总用移液器吸取总DNA或质粒样品或质粒样品4l于封口膜上，再于封口膜上，再加入加入2l 的的6X载样缓冲液，混匀后，载样缓冲液，混匀后，小心加入点样小心加入点样孔孔。 打开电源开关，调节电压至打开电源开关，调节电压至3-5V/cm，可见到溴酚蓝，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，电泳约条带由负极向正极移动，电泳约30min-60min。 将凝胶放入将凝胶放入EB染液中染色染液中染色5-10min,用清水稍微漂洗用清水稍微漂洗。 将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的

32、DNA条带。条带。猪基因组猪基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图琼脂凝胶电泳图 PCR产物琼脂凝胶电泳图产物琼脂凝胶电泳图 (1、2、3、4为为PCR产物，产物，M为为DL2000Marker) 药物研究药物研究v天然药物或中药中的成分：天然药物或中药中的成分：v制剂中的有效成分分析：制剂中的有效成分分析：v药物中的杂质分析：药物中的杂质分析：v中药的指纹图谱的建立：中药的指纹图谱的建立：中药指纹图谱分析中药指纹图谱分析a 冬虫夏草b 天然蛹虫草C 亚香棒草测试条件：l 毛细管：毛细管：50cm75m i.dl 缓冲液缓冲液：36mmol硼酸钠和 15mmol硼酸氢（pH9.2）l 电压：电压： 1

33、4KVl 检测方式：检测方式： 紫外 药物的手性拆分药物的手性拆分测试样品：盐酸舍曲林异构体盐酸舍曲林异构体 （1 110-4g/ml）测试条件：l 缓冲液缓冲液：40mmol/L磷酸盐缓 冲液（pH3）l 检测方式：检测方式： 紫外 资源环境资源环境v水质检测，废水检测：水质检测，废水检测： 有机物（酚类、酯类）有机物（酚类、酯类） 无机离子无机离子废水中酚类的检测废水中酚类的检测测试条件：l 毛细管：毛细管：80cm25m i.dl 缓冲液缓冲液：20mmol硼砂 （pH9.6）l 分离电压：分离电压： 20KVl 检测方式：检测方式： 安培检测1.间甲酚间甲酚 2.苯酚苯酚 3.五氯酚五氯酚4.2，4，6三氯酚三氯酚 5.2，4二氯酚二氯酚 6.对