酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改1ppt课件

1、酵母核糖核酸的分别及组分鉴定酵母核糖核酸的分别及组分鉴定目的与要求目的与要求1. 了解稀碱法提取了解稀碱法提取RNA的原理、方法的原理、方法2. 掌握核酸中三大组分的鉴定方法掌握核酸中三大组分的鉴定方法原原 理理v核糖核酸RNA：从细胞核和细胞质中分别出来的化学物质。v 在蛋白质合成和其他生化反响中起着重要作用，RNA的构造和DNA的构造类似，都是由核苷酸按照一定顺序陈列成的长链。v RNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖体RNA以及其他类型的RNA。磷酸磷酸碱基碱基戊糖戊糖酵母菌酵母菌酵母中主要成分是酵母中主要成分是RNARNA2.672.6710.0%)10.0%)，DNADNA很少很

2、少 (0.03(0.030.516%)0.516%)。总总RNARNA的提取的提取: : 采用稀碱裂解法，乙醇沉淀采用稀碱裂解法，乙醇沉淀RNA, RNA, 洗涤除洗涤除杂质；杂质；RNARNA组分鉴定组分鉴定: :硫酸可使硫酸可使RNARNA水解，再分别鉴定水解，再分别鉴定1. 1. 核糖的鉴定核糖的鉴定苔黑酚苔黑酚(3,5(3,5二羟基甲苯二羟基甲苯) )法法CHOCHCHCHCH2OHOHOHOHOCHOOHOHCH3COCH3OCH3OH-H2O浓酸核糖3，5-二羟甲苯糠醛绿色化合物墨绿色墨绿色 2. 碱基的鉴定碱基的鉴定嘌呤碱嘌呤碱嘌呤碱嘌呤碱+过量浓氨水过量浓氨水+AgNO3 絮状

3、嘌呤银絮状嘌呤银化合物化合物 3. 磷酸的测定磷酸的测定定磷法定磷法(NH4)2MoO4+H2SO4 H2MoO4+(NH4)2SO4 H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2O H3P(Mo3O10)4 Mo2O3MoO3(钼蓝钼蓝试剂和器材试剂和器材v试剂：试剂：v 0.04M NaOH 0.04M NaOH；酸性乙醇；酸性乙醇溶液溶液, 95%, 95%乙醇乙醇v1.5M1.5M硫酸；硫酸；v浓氨水，浓氨水，0.1M0.1M硝酸银；硝酸银；v三氯化铁浓盐溶液三氯化铁浓盐溶液 , ,苔苔黑酚乙醇；黑酚乙醇；v定磷试剂定磷试剂v v v器材器材v 研钵，天

4、平；研钵，天平；v 沸水浴，低速台沸水浴，低速台式离心机。式离心机。 n 资料资料n 干酵母干酵母 一一.提取步骤改动：提取步骤改动：5g酵母中参与酵母中参与30 ml 0.04M NaOH，在研钵中研，在研钵中研磨均匀，转入大试管，沸水浴磨均匀，转入大试管，沸水浴20 min，3000转转离心离心10min，取上清，弃沉淀。，取上清，弃沉淀。上清液渐渐倾入上清液渐渐倾入10 ml 酸性乙醇中，边加边搅，沉酸性乙醇中，边加边搅，沉淀淀RNA静置静置5min， 3000转离心转离心10min，弃上，弃上清，取沉淀。清，取沉淀。3.3.将沉淀用将沉淀用95%95%乙醇洗两次，约乙醇洗两次，约6 6

5、毫升毫升/ /管，用于除管，用于除去外表杂质。第一次将沉淀捣散后再离心去外表杂质。第一次将沉淀捣散后再离心5min5min；第二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放第二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在滤纸上凉干，称量。差减法称量，滤纸应提在滤纸上凉干，称量。差减法称量，滤纸应提早称好早称好 4.4.将一切提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进展水将一切提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进展水解，再分别鉴定组份。解，再分别鉴定组份。二二. . 鉴定鉴定 1.1.鉴定磷组分可适当添加，效果更好。鉴定磷组分可适当添加，效果更好。2.2.氨水过量太多也会使沉淀消逝；先加硝酸氨水过量太多也会使沉淀消逝；先加硝酸银后加氨水效果明显。银后加氨水效果明显。苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反响。响。准微量准微量DNADNA无影响，较多无影响，较多DNADNA存在，亦有干扰。存在，亦有干扰。 离心本卷须知：离心本卷须知：1.样品倒入玻璃离心管不能太满；2.离心前玻璃离心管套上塑料管套放在天平上平衡好；3.离心机中对称放置；4.接通电源前