[理化生]222动物细胞融合与单克隆抗体第二课时ppt课件

1、复习题问复习题问1 1、动物细胞交融的原理？、动物细胞交融的原理？2 2、诱导动物细胞交融的方法？、诱导动物细胞交融的方法？3 3、动物细胞交融成功的标志？、动物细胞交融成功的标志？4 4、动物细胞交融最重要的应用是？、动物细胞交融最重要的应用是？2.2.2 2.2.2 动物细胞交融与动物细胞交融与 单克隆抗体单克隆抗体第二课时第二课时 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中别离出所需抗体的方法。用这种方法获得的中别离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅抗体，不仅产量低产

2、量低，而且抗体的，而且抗体的特异性差特异性差，纯纯度低度低，反响不够灵敏反响不够灵敏。人们发现，在动物发生。人们发现，在动物发生免疫反响的过程中，体内的免疫反响的过程中，体内的B B细胞可以产生多达细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个必须用单个B B细胞进展无性繁殖，即细胞进展无性繁殖，即克隆克隆。问题：问题： 体外培养的条件下，一个体外培养的条件下，一个B B淋巴细胞是淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个不可能无限增值的，如何使单个

3、B B淋巴细胞淋巴细胞增殖呢？有什么方法能使一个细胞同时具备增殖呢？有什么方法能使一个细胞同时具备产生抗体产生抗体和和无限增殖无限增殖才能呢？才能呢？19751975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验杂交瘤技术杂交瘤技术两人因此在两人因此在19841984年获诺贝尔奖年获诺贝尔奖 将可以产生特定抗体的将可以产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞和具有无限增殖才能的和具有无限增殖才能的骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞交融交融在一起，形成在一起，形成杂交瘤细胞杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能既能在体外快速增殖，在体外快速增殖，又能又能持续分泌特持续分泌特异性抗体。异性抗体。

4、二、单克隆抗体二、单克隆抗体 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖克隆淋巴细胞经过无性繁殖克隆形成基因型一样的细胞群，这一细胞群所产生形成基因型一样的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。抗体。1 1、概念、概念特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高, ,并且可以大量制备并且可以大量制备2 2、优点、优点3 3、制备过程、制备过程体内培养体内培养注射抗原注射抗原已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞筛筛 选选杂交瘤细胞杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂能产生特定抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞筛筛 选选体外培养体外培

5、养单克隆抗体单克隆抗体第一次挑选选择培养基：第一次挑选选择培养基：杂交瘤细胞杂交瘤细胞第二次挑选专一抗体阳性检验：第二次挑选专一抗体阳性检验：能产生特异性抗体的杂交瘤细胞能产生特异性抗体的杂交瘤细胞4 4、两次挑选的目的、两次挑选的目的 交融后的细胞经选择培养基培养后，能交融后的细胞经选择培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用用“有限稀释法来选择。将杂交瘤细胞稀有限稀释法来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细

6、胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体常用酶联免疫孔上清液中细胞分泌的抗体常用酶联免疫吸附试验法，那些上清液可与特定抗原结吸附试验法，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。合的培养孔为阳性孔。 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进展有限个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进展有限稀释，一般需进展稀释，一般需进展3 34 4次，直至确信每个次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。为杂交瘤细胞的克隆化培养

7、。 能准确识别各种抗原物质的细微差异，并能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、准确、高效、简易、快速简易、快速的优点。的优点。5 5、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用1 1、作为诊断试剂、作为诊断试剂2 2、用于治疗疾病和运载药物、用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗，可制成主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹生物导弹，也有少量用于治疗其它疾病。也有少量用于治疗其它疾病。生物导弹：单克隆抗体生物导弹：单克隆抗体 + + 药物药物导向导向弹头弹头动物细胞工程动物细胞工程植物细胞工程植物细胞工程植物组织培养植物组织培养植物体

8、细胞杂交植物体细胞杂交应用应用动物细胞培养动物细胞培养核移植技术核移植技术动物细胞交融动物细胞交融单克隆抗体单克隆抗体细胞工程细胞工程2 2、B B淋巴细胞具有产生单一抗体的才能，但不淋巴细胞具有产生单一抗体的才能，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种体。因此，把一种B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进淋巴细胞与骨髓瘤细胞进展细胞交融，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个展细胞交融，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断在体外培

9、养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 1 1、单克隆抗体是指单克隆抗体是指 A. A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B. B.单个单个B B淋巴细胞增殖产生的抗体淋巴细胞增殖产生的抗体 C. C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体抗体 D. D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体单个抗体通过克隆化，产生大量抗体C 2 2、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞交科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞交融，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆融，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨

10、髓瘤细胞交融的是抗体，与骨髓瘤细胞交融的是 A. A.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 B. B.未经过免疫的未经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 C. C.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 D. D.未经过免疫的未经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C3 3、单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞是、单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞是A.A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B B淋巴细胞与肝细胞交融淋巴细胞与肝细胞交融 B.B.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞诱导交融而成淋巴细胞诱导交融而成 C.C.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导交融而淋巴细胞与肌瘤细胞诱导交融

11、而成成 D.D.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导交融淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导交融而成而成 D4 4、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴淋巴细胞诱导交融后，要用特定培养基挑选出杂交瘤细胞诱导交融后，要用特定培养基挑选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身交融细胞淋巴细胞自身交融细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身交融细胞小鼠骨髓瘤细胞自身交融细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A A、 B B、 C C、 D D、 C5 5、用动物细胞工

12、程技术获取单克隆抗体，以下、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，以下实验步骤中错误的选项是实验步骤中错误的选项是A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞交融淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞交融D D挑选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗挑选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B6.6.关于单

13、克隆抗体，以下表达不正确的选项是关于单克隆抗体，以下表达不正确的选项是A.A.可以制成诊断盒，用于疾病的诊断可以制成诊断盒，用于疾病的诊断B.B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C.C.可以利用基因工程技术消费可以利用基因工程技术消费 D.D.可以在生物体内消费，不能体外消费可以在生物体内消费，不能体外消费D7 7、“生物导弹是指生物导弹是指 A. A.单克隆抗体单克隆抗体 B. B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C. C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D. D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D8 8、单克隆抗体

14、的优点是、单克隆抗体的优点是_9 9、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是因是_1010、产生抗体的细胞是、产生抗体的细胞是_ 产生单克隆抗体的细胞是产生单克隆抗体的细胞是_特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备每一种每一种B B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体效应效应B B细胞浆细胞细胞浆细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞1111、杂交瘤细胞的特点、杂交瘤细胞的特点: :_1212、首次挑选是为了获得、首次挑选是为了获得_ 第二次挑选时为了获得第二次挑选时为了获得既能无限增殖，又能分泌特异性抗体既能无限增殖，又

15、能分泌特异性抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞1313、看书上、看书上5353页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 1414、以下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设、以下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的消费破伤风杆菌抗体的实验方案：计的消费破伤风杆菌抗体的实验方案：B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂

16、交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔AC1 1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_2 2、该方案能到达预期效果吗？为什么？、该方案能到达预期效果吗？为什么？3 3、A A是从小鼠的脾脏中获得是从小鼠的脾脏中获得_,_,该细胞该细胞可以产生可以产生_制备单克隆抗体制备单克隆抗体 不能。没有将抗原注入小鼠体内，无法不能。没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的获得产生单一抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞B B细胞细胞抗体抗体4 4、图中、图中B B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承_的遗传的遗传特性，既能特性，既能_,_

17、,又能又能_。5 5、C C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培培养和养和_培养两个阶段，其中培养两个阶段，其中_代以内的代以内的的细胞属于细胞株。的细胞属于细胞株。细胞交融细胞交融灭活的病毒灭活的病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50501515、以下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图：、以下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图：1 1_ _ 技术是单克隆抗体技术的根底。技术是单克隆抗体技术的根底。2 2根据培养基的用处分类，图中根据培养基的用处分类，图中HATHAT培养基属于培养基属于_培养基。培养基。3 3单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最

18、大的优越单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是性是_ _ _。动物细胞培养动物细胞培养选择选择特异性强特异性强, ,灵敏度高灵敏度高4 4动物细胞交融除了采用植物细胞原生质体交融常动物细胞交融除了采用植物细胞原生质体交融常用的诱导剂外，还可以采用用的诱导剂外，还可以采用_ _ _。5 5选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋巴细胞的特点，又具备淋巴细胞的_ _ _特点。特点。6 6淋巴细胞是由动物体淋巴细胞是由动物体_中的中的_ _ _ _ _细胞分化、发育而来。细胞分化、发育而来。灭活的病毒灭活的病毒无限增殖无限增殖分泌特异性抗体分泌特异性抗体骨髓骨髓造血干细