动物细胞融合与单克隆抗体上课用

1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体温故而知新温故而知新植物细胞杂交植物细胞杂交（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物组织培养植物组织培养原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B三、动物细胞融合三、动物细胞融合1.1.概念：概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或两个或多个多个动物细胞结合形成动物细胞结合形成一个一

2、个细胞的过程。细胞的过程。 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的信息的单核细胞单核细胞，称为杂交细胞。，称为杂交细胞。2 2、动物细胞融合基本原理：、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，与植物原生质体融合的基本原理相同，即细即细胞膜的流动性胞膜的流动性3、诱导方式、诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒 例如：仙台病毒例如：仙台病毒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜

3、具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）（丧失感染性、保留抗原结构）. .过程：过程：、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途制备单克隆抗体制备单克隆抗体 获得获得杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱导使细胞分散后诱导细胞融

4、合细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒、动物细胞融合技术的发展简史告诉、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：我们：科学技术是不断发展的科学技术是不断发展的。那么，。那么，实现动物细胞融合有什么实现动物细胞融合有什么意义意义呢？呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；广泛应用多个学科领域；重要用途：重要用途：四、单克隆抗体四、单克隆抗体自主阅读自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？传统的抗体的生产方法及缺陷是什么

5、？B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。免疫作用。但但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。、在体外，、在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。产量低、纯度低；产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。而且制备抗体特异性差。分析：分析： B B淋巴细胞与抗体的关系淋巴细胞与抗体的关系、单克隆抗体、

6、单克隆抗体McAb（概念）（概念） 由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆），形（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学化学性质单一、特异性强的抗体性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。称为单克隆抗体。 那么，如何那么，如何大量获得化学性质单一、特异大量获得化学性质单一、特异性强的抗体性强的抗体？（即？（即单克隆抗体单克隆抗体）一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术、设计方

7、案：、设计方案：动物细胞融合动物细胞融合单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖二、单克隆抗体抗体由什么细胞产生？效应B淋巴细胞每个效应每个效应B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体强的抗体要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群1975，米尔斯坦和柯勒 杂交瘤技术1、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。2、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增

8、殖单克隆抗体3. 3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高、产量大的灵敏度高

9、、产量大的优势优势主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、物理（离心、振动、电刺激）振动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较

10、较1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培

11、育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 AD4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D动物细胞动物细胞融合技术融合技术B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有杂种细只有杂种细胞才能活胞才能活动物细胞培养动物细胞培养3.3.单克隆抗体制单克隆抗体制备过程备过程获得产生相应抗获得产生相应抗体的体的B淋巴细胞淋巴细胞4 4、单克隆抗体的、单克隆抗体的特点和应用特点和应用与常规抗体相比，单克隆抗体与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，特异