菌种的生产与保藏培训课程

1、第三章第三章 菌种的生产与保藏菌种的生产与保藏 菌种，好比农作物的种子，是食用菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌生产的根本，其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌的产量和质量。因此，从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。的培育和保藏工作。 一、菌种培育技术一、菌种培育技术 人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。离等培育的菌丝体称为母种。2）原种（二级菌种

2、）：）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽培种（三级菌种）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。为生产上使用的菌种称为栽培种。4）菌种：）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。繁殖的食用菌的纯菌丝体。 食用菌的制种程序食用菌的制种程序组织分离组织分离接种接种母种（一级）母种（一级） 接种接种 原种（二级）原种（二级） 接种接种栽培种（三级）栽培种（三级）种菇种菇孢子分离孢子分离 经过这样三级培养，食

3、用菌菌丝数量大大增经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。加。 一般一般1支试管菌种可繁殖支试管菌种可繁殖46瓶原种，每瓶原瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖种又可扩大繁殖60100瓶栽培种。瓶栽培种。培养培养培养培养母母 种种原种、原种、栽培种栽培种栽培种栽培种食用菌的食用菌的制种程序制种程序 菌种生产必须在严格的无菌条件下进行。菌种生产必须在严格的无菌条件下进行。为了保证制种的成功，除必须掌握制种技术外，为了保证制种的成功，除必须掌握制种技术外，还需要一些基本的设备和用品。还需要一些基本的设备和用品。1、接种设备、接种设备 接种室接种室要求要求: 关闭严密，便于熏蒸、消毒；关闭严密，便于熏蒸、

4、消毒；空间不宜过大，一般长、宽、高均为空间不宜过大，一般长、宽、高均为2m即可即可;接种室外面最好有一个缓冲室；接种室外面最好有一个缓冲室；墙壁、天花板和地面都要平整、光洁；墙壁、天花板和地面都要平整、光洁；内装有紫外灯和日光灯。内装有紫外灯和日光灯。 (一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 1 1、接种设备、接种设备 接种箱接种箱 当菌种生产量不大时，可在接种箱内进行。当菌种生产量不大时，可在接种箱内进行。它是用木条作成框架，以它是用木条作成框架，以3mm厚的玻璃作箱壁。厚的玻璃作箱壁。要求：要求：关闭严密，便于熏蒸；关闭严密，便于熏蒸；装有日光灯和紫外灯。装有日光灯和紫

5、外灯。优点：优点：搬动方便，操作人员不会受有毒气体搬动方便，操作人员不会受有毒气体危害。危害。缺点：缺点：容量小。容量小。 1 1、接种设备、接种设备 超净工作台超净工作台原理：原理：超净工作台是利用过滤除菌的原理，先超净工作台是利用过滤除菌的原理，先将空气过滤，得到无菌空气，然后将无菌空气将空气过滤，得到无菌空气，然后将无菌空气从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。从风洞打出，使工作台范围内成为无菌状态。要求：要求：放置工作台的房间要清洁，空气流动小，放置工作台的房间要清洁，空气流动小，最好安装灭菌灯。最好安装灭菌灯。优点：优点：有效可靠，操作使用方便，在夏季接种有效可靠，操作使用方便，在

6、夏季接种时，使操作人员感到舒适。时，使操作人员感到舒适。 每台每台3000元左右，有条件的食用菌专业户，元左右，有条件的食用菌专业户，可选用这种先进的接种设备。可选用这种先进的接种设备。 超净工作台超净工作台(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备、灭菌设备1）手提式：）手提式：容量小，适于斜面试容量小，适于斜面试管及玻璃器皿等；管及玻璃器皿等；2）立式）立式： 容量大，投资大；容量大，投资大；3）卧式）卧式：容量大，投资大；：容量大，投资大；4）家用）家用24或或26 cm压力锅：压力锅：母种、母种、原种培养基原种培养基 。高高压压蒸蒸气气灭灭菌菌锅锅优点：省

7、时、省燃料、优点：省时、省燃料、 效果好效果好 2）、）、3）一般在菌种场或研究所应用。）一般在菌种场或研究所应用。灭菌设备灭菌设备高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备、灭菌设备常压灭菌锅常压灭菌锅 目前农村生产栽培种的必备设备，实际上目前农村生产栽培种的必备设备，实际上是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅，是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅，上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由于锅内温度最高是于锅内温度最高是10

8、0，所以灭菌时间需维，所以灭菌时间需维持持1012h，才能达到灭菌效果。，才能达到灭菌效果。(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 3、培养设备、培养设备 培养室培养室大小：大小：不宜过大，一般以不宜过大，一般以2025，培养，培养50006000瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。瓶菌种为宜，太大不易保温和管理。要求：要求：干净、通风、保温，应设有调温设备，干净、通风、保温，应设有调温设备，使室温保持在使室温保持在2025。门窗应设铁纱，以防。门窗应设铁纱，以防鼠、虫为害。鼠、虫为害。 生化培养箱生化培养箱 是专业工厂生产的恒温电器设备，用于培养是专业工厂生产的恒温电器设备，

9、用于培养母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。母种或少量原种，可以根据需要任意温度调节。 (一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 4、培养菌种的容器、培养菌种的容器母种母种：试管，常用规格：试管，常用规格20180200mm，18180mm等。等。 原种、栽培种原种、栽培种菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶菌种袋菌种袋聚丙稀袋聚丙稀袋聚乙稀袋聚乙稀袋规格有：规格有：12153035 cm，173545 cm 母种母种- -试管试管原种、栽培种原种、栽培种菌种瓶或塑料袋菌种瓶或塑料袋菌种瓶菌种瓶(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具 5、接种

10、工具、接种工具 移植菌种于培养基上的工具称接种移植菌种于培养基上的工具称接种工具，主要有以下几种：工具，主要有以下几种：接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等； (一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具6、常用的消毒药品、常用的消毒药品 70%酒精：酒精：一般用于手、种菇表面消毒；一般用于手、种菇表面消毒； 0.1%升汞：升汞：常用于玻璃器皿、非金属常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒；器械及种菇表面消毒； 0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消一般用于用具、器皿消毒；毒；(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具6、常用的消

11、毒药品、常用的消毒药品 5%石炭酸：石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也可用来苏尔代替；也可用来苏尔代替； 2%来苏尔、新洁尔灭：来苏尔、新洁尔灭：用法同上；用法同上；甲醛（福尔马林）：甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空用于菇房和接种箱等空气消毒；气消毒；方法：关闭门窗消毒，自行气化；方法：关闭门窗消毒，自行气化；用量：用量：10ml甲醛甲醛5g KMnO4立方米。立方米。 (一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具(二二) 母种生产技术母种生产技术1、母种培养基、母种培养基 食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同食用菌母种培养基的种类繁多，由于

12、不同营养类型的食用菌对营养物质的要求不同，所营养类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在培养不同食用菌母种时，应选择适宜该以，在培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培养基。菌种的培养基。 母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生素的比例应高。维生素的比例应高。 现将食用菌常用的母种培养基列举如下现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：(一一) 菌种生产常用的设备和用具菌种生产常用的设备和用具(二二) 母种生产技术母种生产技术 配方配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA） 马铃薯马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）、葡萄糖（或蔗糖）20g、

13、琼脂琼脂20g、H2O 1000mL、pH 6.5。 适用于一般食用菌母种分离与培养，适用于一般食用菌母种分离与培养，但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。良。 (二二) 母种生产技术母种生产技术综合马铃薯培养基综合马铃薯培养基 马铃薯马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）、葡萄糖（或蔗糖）20g、KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素、维生素B1 10mg、琼脂琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然。自然。 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种分离、保藏。菌种分离、保藏。(二二) 母种生产技术母种生产技术胡

14、萝卜葡萄糖琼脂培养基胡萝卜葡萄糖琼脂培养基 胡萝卜胡萝卜200g、葡萄糖（或蔗糖）、葡萄糖（或蔗糖）1820g、琼脂琼脂20g、H2O 1000mL、pH自然。自然。(二二) 母种生产技术母种生产技术玉米粉培养基玉米粉培养基 玉米粉玉米粉40g、葡萄糖（或蔗糖）、葡萄糖（或蔗糖）10g、琼脂、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然；自然；适用于大多数食用菌菌丝的生长。适用于大多数食用菌菌丝的生长。马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基 马铃薯马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）、葡萄糖（或蔗糖）20g、蛋白、蛋白胨胨10g、琼脂、琼脂20g、H2O 1000ml、

15、pH自然；自然；适用于培养和保藏多种食用菌。适用于培养和保藏多种食用菌。(二二) 母种生产技术母种生产技术黄豆芽、松针培养基黄豆芽、松针培养基 黄豆芽黄豆芽250g、松针、松针50g、葡萄糖（或蔗、葡萄糖（或蔗糖）糖）20g、琼脂、琼脂20g、H2O 1000ml、pH 55.5。 将松针、黄豆芽按量称好，加水煮将松针、黄豆芽按量称好，加水煮30min，取滤液，加入葡萄糖、琼脂，充，取滤液，加入葡萄糖、琼脂，充分搅拌，使琼脂熔化，补水至分搅拌，使琼脂熔化，补水至1000ml，即分装试管。即分装试管。主要用于培养竹荪母种。主要用于培养竹荪母种。(二二) 母种生产技术母种生产技术苹果汁培养基苹果汁

16、培养基 苹果苹果100g、蛋白胨、蛋白胨2g、蔗糖、蔗糖20g、琼脂琼脂20g、H2O 1000ml；主要用于草菇培养主要用于草菇培养（配制方法同（配制方法同PDA） 配方配方 配制方法（以配制方法（以PDA为例）为例） 马铃薯（去皮、去芽眼）马铃薯（去皮、去芽眼）切成片切成片称取称取200g1000mL H2O煮沸煮沸双层纱布过滤双层纱布过滤取滤液并补足取滤液并补足1000mL琼脂琼脂熔化其它营熔化其它营养物质养物质调节调节pH（用（用HCl或或NaOH）分装试分装试管管灭菌（高压蒸气灭菌灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）制成斜制成斜面面检查灭菌效果（即检查灭菌效果（即2830培养培养23

17、d） 其它天然培养基或综合培养基，如：玉米粉、其它天然培养基或综合培养基，如：玉米粉、黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料，加适量水煮汁黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料，加适量水煮汁过滤，取滤液与其它成分混合。过滤，取滤液与其它成分混合。 (二二) 母种生产技术母种生产技术2、母种分离、母种分离母种分母种分离方法离方法孢子分离孢子分离 组织分离组织分离基质分离基质分离有性有性无性无性 孢子分离法孢子分离法 利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。纯菌种的方法。 孢子孢子分离分离法法1）单孢子分离法：）单孢子分离法：培养基上只接种培养基上只接种1个担个担孢子，使它萌

18、发成菌丝体而获得纯菌种的孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。方法。 如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。离得到菌丝便能结实。（一个孢子（一个孢子萌发萌发菌丝体菌丝体纯种）纯种） 2）多孢子分离法：）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。等。 （多个孢子（多个孢子萌发萌发菌丝体菌丝体纯种）纯种） (二二) 母种生产技术母种生产技术下面先解释二个基本概念下面先解释二个基本概念 1 1

19、）同宗配合：）同宗配合：同一担子孢子萌发产生的两条同一担子孢子萌发产生的两条菌丝之间进行结合便能生育（自交亲合、可孕，菌丝之间进行结合便能生育（自交亲合、可孕，类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。如：双孢蘑菇、草菇如：双孢蘑菇、草菇 2 2）异宗配合：）异宗配合：同一性别菌丝之间不亲合，只同一性别菌丝之间不亲合，只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。 (二二) 母种生产技术母种生产技术 担子菌亚门中，约担子菌亚门中，约10%

20、菌类属同宗结菌类属同宗结合，合，90%以上是异宗配合，所以单孢子以上是异宗配合，所以单孢子分离对大多数食用菌不适用，只有育种分离对大多数食用菌不适用，只有育种时才采用。时才采用。 此法技术复杂，生产上很少采用，在此此法技术复杂，生产上很少采用，在此不作详述。不作详述。(二二) 母种生产技术母种生产技术 多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多孢子分离的具体操作方法有以下几种：孢子分离的具体操作方法有以下几种：整菇插种法整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。：伞菌常用此法采得孢子。 即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作下，插

21、入无菌孢子采集器内，置适温下让其自下，插入无菌孢子采集器内，置适温下让其自然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管斜面上培养。斜面上培养。种菇选择：种菇选择：菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八九成熟。九成熟。 参见参见P48(二二) 母种生产技术母种生产技术 孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。 孢子孢子采集采集器器搪瓷盘（大号培养皿）搪瓷盘（大号培养皿）培养皿培养皿种菇支架种菇支架玻璃钟罩（大漏斗）玻

22、璃钟罩（大漏斗）参见参见P48悬钓法悬钓法 此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、银耳等）孢子的采集。银耳等）孢子的采集。 耳片（表面消毒）耳片（表面消毒） 悬挂于培养基上悬挂于培养基上方方培养培养 取出挂钩与耳片取出挂钩与耳片培养培养挑取先端菌丝挑取先端菌丝转管纯化转管纯化母种母种 1224h培养基培养基耳片耳片参见参见P48组织分离：组织分离：指通过菇体组织分离纯种。指通过菇体组织分离纯种。优点：优点：操作简便、取材广泛、不易变异，操作简便、取材广泛、不易变异，保持原菌种优良种性。保持原菌种优良种性。方法：方法：选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、选择种菇（出菇

23、早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、肉厚、大小适中、56分成熟）分成熟）组织分离组织分离 组织分离法组织分离法参见参见P45 选择种菇选择种菇表面消毒（表面消毒（75%酒精或酒精或0.1%升汞）升汞）撕成两半撕成两半取菌柄菌盖交取菌柄菌盖交界处界处小块菌肉小块菌肉移入移入PDA培养培养观观察察转管转管纯种纯种 上述分离物在上述分离物在25下，经下，经3d5d可看到分离可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d2d检查检查1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养养10d15d，再作，再作1次转管即得到纯种。次转管即得到纯种。 组

24、织分离法组织分离法参见参见P45-46注：注： 取组织块不要贪大，因组织块小易定植取组织块不要贪大，因组织块小易定植; 有些食用菌不易用组织分离法获纯种；有些食用菌不易用组织分离法获纯种； 不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。如：如：1）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡囊化，再生能力极弱；囊化，再生能力极弱；又如：又如：2）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。能取其生长的基质即菇木、耳木

25、分离。 组织分离法组织分离法 概念：概念： 由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。（常用于银耳及木耳菌种分离）（常用于银耳及木耳菌种分离）基内菌丝分离法（基质分离法）基内菌丝分离法（基质分离法）参见参见P46-47段木内菌丝分离法：段木内菌丝分离法： 取取12cm菇木、耳木（子实体着生部位）菇木、耳木（子实体着生部位）去皮去皮消毒（消毒（75%酒精或酒精或0.1%升汞浸泡升汞浸泡1min）切去四周木块切去四周木块切成火柴杆

26、粗细，切成火柴杆粗细，0.5 cm长长的小木梗的小木梗取取1根放入试管斜面上根放入试管斜面上培养培养取取菌丝菌丝转管纯化转管纯化基内菌丝分离法（基质分离法）基内菌丝分离法（基质分离法）参见参见P46-47(二二) 母种生产技术母种生产技术3、菌种提纯与扩大繁殖、菌种提纯与扩大繁殖 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。提纯：提纯：选稀疏单菌落选稀疏单菌落边缘取菌边缘取菌接种试管斜接种试管斜面（面（35支）支）培养培养纯菌种。纯菌种。扩大繁殖扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引

27、进的母：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。 一支斜面母种可移接一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。支左右斜面试管。4、质量检验、质量检验 对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量鉴定，选优去劣，方可使用。鉴定，选优去劣，方可使用。1）检验方法）检验方法外观鉴定外观鉴定优良菌种：优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命菌丝浓白、粗壮、富有

28、弹性，则生命力强。如有子实体或茶褐色被膜，只要除去仍可力强。如有子实体或茶褐色被膜，只要除去仍可使用。使用。老化菌种：老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。 (二二) 母种生产技术母种生产技术显微镜检验显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，滴，盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。盖上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。菌丝生长速度菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培养。凡

29、菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就是优良母种。是优良母种。参见参见52(二二) 母种生产技术母种生产技术显微镜检验显微镜检验菌丝生长速度菌丝生长速度出菇试验出菇试验 进行子实体产量和品质评比。进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速度较快，子实体生长健壮、品质好、产长速度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的母种，即可供生产上使用。量高的母种，即可供生产上使用。参见参见52(二二) 母种生产技术母种生产技术(二二) 母种生产技术母种生产技术2）检验标准）检验标准首先要辨认分离或引进的是不首先

30、要辨认分离或引进的是不是所需要的菌种；是所需要的菌种；有无杂菌污染，是否老化。有无杂菌污染，是否老化。 (二二) 母种生产技术母种生产技术(三三) 原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术 原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。用于生产。（母种（母种原种）原种）2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于）栽培种：由原

31、种作种源扩大而成，只能用于生产。生产。（原种（原种栽培种栽培种)(三三) 原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法 培培养养料料 木屑木屑米糠培养料：米糠培养料：木生菇类，如：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇；木耳、银耳、香菇；草茎或草粪草茎或草粪厩肥培养料：厩肥培养料：草生菇类，草生菇类，如：蘑菇、草菇；如：蘑菇、草菇；棉籽壳棉籽壳米糠培养料米糠培养料：多种菇类。：多种菇类。 粪草培养基（适用于蘑菇）粪草培养基（适用于蘑菇） 稻草或麦秸稻草或麦秸20kg、粪肥（干）、粪肥（干）30kg、石膏、石膏500g、水适量。、水适量。方法：稻

32、草切成方法：稻草切成2cm长粪肥长粪肥混合发酵石混合发酵石膏膏调水调水装瓶装瓶灭菌灭菌稻草麸皮培养基（草菇）稻草麸皮培养基（草菇） 干稻草干稻草78%、麸皮或米糠、麸皮或米糠20%、蔗糖、蔗糖1%、过磷酸钙过磷酸钙1%、水适量、水适量方法：稻草切成方法：稻草切成2cm长长发酵发酵蔗糖麸皮蔗糖麸皮过磷酸钙过磷酸钙 1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法 木屑米糠培养基木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）（香菇、木耳、猴头、平菇等） 木屑木屑78%、麸皮或米糠、麸皮或米糠20%、石膏、石膏1%、蔗糖、蔗糖1%、水适量。、水适量。 木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）木屑、麸皮

33、、黄豆粉培养基（银耳） 木屑木屑50kg、麸皮、麸皮15kg、黄豆粉、黄豆粉1kg、蔗糖、蔗糖0.75kg、MgSO4 0.25kg、水、水7075kg。棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇）棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇） 棉籽壳棉籽壳99.7%、蔗糖、蔗糖0.1%、石膏、石膏0.2%、水适量。、水适量。1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法 (三三) 原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则掌握碳氮比例掌握碳氮比例 食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（氮比（C）。）。菌丝体生长

34、阶段：菌丝体生长阶段：C=20 1；子实体形成阶段：子实体形成阶段：C=3040 1；C 过高，菌丝体生长过旺，而子实体小、过高，菌丝体生长过旺，而子实体小、产量低。产量低。2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则 选好培养材料选好培养材料首先选不含杀菌物质的木屑首先选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。处理，如：蒸煮、晒等。 根据食用菌的喜好选木屑根据食用菌的喜好选木屑 如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑

35、好； 培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。木屑好。 注意物理性状注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。以及持水性能等物理性状。调节酸碱度调节酸碱度 各种食用菌需要的各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料值不同，配制培养料时，应选用时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将往将pH值适当调高值

36、适当调高0.51。2、培养基（料）配制原则、培养基（料）配制原则3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）木屑：木屑： 树种：树种：除松树、杉树、柏树、樟树、除松树、杉树、柏树、樟树、芸香属、按属等树种之外，绝大多数阔芸香属、按属等树种之外，绝大多数阔叶树和木屑都可以利用。（因其中含有叶树和木屑都可以利用。（因其中含有酚、酯、精油等杀菌物质）酚、酯、精油等杀菌物质） 粗细：粗细：不宜过细，以免培养基过湿或不宜过细，以免培养基过湿或通气不良。通气不良。 3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）木屑：木屑： 选择：选择：根据食用菌分解能力选择，分解

37、能根据食用菌分解能力选择，分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之采用软质树种木屑。采用软质树种木屑。如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木屑为宜，木屑越陈越好；屑为宜，木屑越陈越好；茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。屑或松木钉。 米糠、麸皮作用米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。作用：补充氮源和维生素。 稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。以下。麸皮：麸皮

38、：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：米糠：含氮量比麸皮少。含氮量比麸皮少。用量：一般用量：一般10%20%，过多易引起污染。，过多易引起污染。 3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）加糖的作用加糖的作用初期补充碳源，用量初期补充碳源，用量1%5%。诱导胞外酶的产生。诱导胞外酶的产生。 纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。产生，更好地利用纤维素

39、。 3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）Ca2作用作用 提供食用菌钙离子：原料中加石膏、提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；离子； 钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙不断中和食用菌产生的有机酸； 钙还能中和单宁；钙还能中和单宁； 减少过量减少过量K、Mg对菌丝中毒，促进对菌丝中毒，促进菌丝生长。菌丝生长。 3、原料选择的注意事项（几点说明）、原料选择的注意事项（几点说明）(三三) 原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术4、原种、栽培种的制作方法、原种、栽培种的制作方法 按配方称取原料按配方称取

40、原料拌料拌料装瓶（袋）装瓶（袋）打洞（孔径打洞（孔径1cm深至瓶底）深至瓶底）灭菌（灭菌（1.5 kgcm2，1.52 h）冷却冷却接种（接入接种（接入黄豆大小一块）黄豆大小一块）培养（培养（25 27 ）菌丝长满瓶（袋）菌丝长满瓶（袋）培养培养7 d8 d扩扩大成栽培种。大成栽培种。 (三三) 原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术5、杂菌检查（菌种检查）、杂菌检查（菌种检查） 接种后的原种，一般在接种后的原种，一般在3 d5 d左右菌丝左右菌丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及时剔除。有污染及时剔除。（正常为白色，若混有其它色泽，应及时（

41、正常为白色，若混有其它色泽，应及时处理）；如发现接种块无新菌丝萌发，则处理）；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。认为是死菌，应及时补种。 正常：菌丝白色正常：菌丝白色 杂菌：黄、红、绿、黑杂菌：黄、红、绿、黑 死菌：补种死菌：补种二、菌种保藏二、菌种保藏 菌种是食用菌栽培成败的关键。分菌种是食用菌栽培成败的关键。分离筛选一株优良的菌种是一项艰苦的离筛选一株优良的菌种是一项艰苦的任务，而长期保持优良菌种的性能，任务，而长期保持优良菌种的性能，也是一项极为重要的工作。食用菌与也是一项极为重要的工作。食用菌与其他其他微生物微生物一样，都是有遗传性和变一样，都是有遗传性和变异性。异性

42、。遗传性遗传性：保证了优良菌种的性能相对稳定，能：保证了优良菌种的性能相对稳定，能传给下一代，为菌种保藏提供了良好的条件。传给下一代，为菌种保藏提供了良好的条件。变异性变异性：使高产优质的菌种，逐渐衰退，给菌：使高产优质的菌种，逐渐衰退，给菌种保藏带来了困难。种保藏带来了困难。菌种保藏的目的：菌种保藏的目的：保持菌种的优良性状；保持菌种的优良性状；降低衰退速度。降低衰退速度。确保菌种纯洁，长期在生产上应用。确保菌种纯洁，长期在生产上应用。（不衰退、不死亡、不污染杂菌）（不衰退、不死亡、不污染杂菌）二、菌种保藏二、菌种保藏 原理：原理：降低菌种代谢活动。降低菌种代谢活动。降低代谢活动方法：降低代

43、谢活动方法：（创造各种条件）（创造各种条件） 低温低温 干燥干燥 缺氧等缺氧等 在这些条件下，食用菌可处于在这些条件下，食用菌可处于“休眠休眠”状态或处于微弱的代谢活动。状态或处于微弱的代谢活动。 常用的保存方法有以下几种。常用的保存方法有以下几种。 二、菌种保藏二、菌种保藏 （一）斜面低温保藏法（一）斜面低温保藏法 这是一种较好的简易保藏法，目前应用最多。这是一种较好的简易保藏法，目前应用最多。方法：方法：将培养好的斜面菌种，放入将培养好的斜面菌种，放入4冰箱内保冰箱内保藏。藏。保存期：保存期：36月月适用范围：适用范围：多数食用菌多数食用菌注：不适于草菇。由于草菇对低温的耐受力较注：不适于

44、草菇。由于草菇对低温的耐受力较差，其菌丝在差，其菌丝在5下易死亡，所以保藏草菇菌种下易死亡，所以保藏草菇菌种的温度需提高至的温度需提高至1012或在草菇斜面菌种上加或在草菇斜面菌种上加34ml 10%甘油防冻。甘油防冻。二、菌种保藏二、菌种保藏 （二）石蜡封藏法（隔绝空气法）（二）石蜡封藏法（隔绝空气法）方法：方法：用注射器注入灭菌的石蜡。注入量以高用注射器注入灭菌的石蜡。注入量以高出斜面尖端出斜面尖端1cm为宜，然后塞上棉塞或无菌橡为宜，然后塞上棉塞或无菌橡皮塞，用蜡封好，保藏在冰箱或低温干燥处。皮塞，用蜡封好，保藏在冰箱或低温干燥处。（菌丝体与空气隔绝，降低其代谢活动，防止（菌丝体与空气隔

45、绝，降低其代谢活动，防止培养基干燥）培养基干燥）保存期：保存期：6年年适用范围：适用范围： 可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。 石蜡石蜡培养基培养基菌丝体菌丝体二、菌种保藏二、菌种保藏 （三）担子孢子保藏法（干燥）（三）担子孢子保藏法（干燥） 食用菌的孢子，可用滤纸条、河砂、氯食用菌的孢子，可用滤纸条、河砂、氯化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。1、滤纸片保藏法、滤纸片保藏法 将食用菌的孢子吸附在无菌的滤纸条上，将食用菌的孢子吸附在无菌的滤纸条上，干燥后进行保存，一般可保存干燥后进行保存，一般可保存35年。年。方法：

46、方法：滤纸片（剪成滤纸片（剪成40.8cm小条小条灭菌）灭菌）收集孢子（让孢子弹射到滤纸条上）收集孢子（让孢子弹射到滤纸条上）将有孢子的滤纸条放入试管中（含硅胶）将有孢子的滤纸条放入试管中（含硅胶）封口封口冰箱中保存冰箱中保存（三）担子孢子保藏法（干燥）（三）担子孢子保藏法（干燥）1、滤纸片保藏法、滤纸片保藏法2、砂土管保藏法、砂土管保藏法砂土（砂土（2 1）装管装管灭菌灭菌接入孢子接入孢子干燥干燥保存。保存。 （四）冷冻、真空、干燥保藏法（四）冷冻、真空、干燥保藏法 这种方法是利用低温、干燥、缺这种方法是利用低温、干燥、缺氧等条件保存菌种，一般可保存氧等条件保存菌种，一般可保存10年左右。年

47、左右。 二、菌种保藏二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染底部取菌：底部取菌：可根据细菌只发生在可根据细菌只发生在培养基表面培养基表面，而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点，用无而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点，用无菌操作法敲破试管取出培养基，在培养基的底菌操作法敲破试管取出培养基，在培养基的底部挑取一小块带有菌丝的培养基，移植到另一部挑取一小块带有菌丝的培养基，移植到另一试管中培养，可得到纯正的母种。试管中培养，可得到纯正的母种。二、菌种保藏二、菌种保藏三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制

48、种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染底部取菌底部取菌覆盖培养：覆盖培养：将熔化培养基冷却到将熔化培养基冷却到40，倒在已，倒在已污染细菌的斜面上，使之形成厚约污染细菌的斜面上，使之形成厚约20 cm的覆的覆盖层，当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落盖层，当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时，即可挑取转管纯化。时，即可挑取转管纯化。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染真菌污染真菌污染 若污染的是青霉、黄霉、木霉等真菌，只要若污染的是青霉、黄霉、木霉等真菌，只要母种菌丝与这

49、些杂菌没有相联或尚有一部分菌母种菌丝与这些杂菌没有相联或尚有一部分菌丝没有相联，并且这些杂菌的菌丝还没有产生丝没有相联，并且这些杂菌的菌丝还没有产生孢子时，可以用无菌方法仔细挑取没有相联的孢子时，可以用无菌方法仔细挑取没有相联的一部分菌丝，移植到另外的试管中继续培育，一部分菌丝，移植到另外的试管中继续培育，就能得到纯正的母种。就能得到纯正的母种。 三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？怎样鉴别？ 根据杂菌开始发生的部位，大致有以下几根据杂菌

50、开始发生的部位，大致有以下几种污染原因：种污染原因：若杂菌同时在培养基的若杂菌同时在培养基的上、中、下上、中、下部位发部位发生，主要是由于生，主要是由于培养基灭菌不彻底培养基灭菌不彻底造成的。造成的。若杂菌开始发生在若杂菌开始发生在接种块接种块上，这很可能是上，这很可能是母种或原种已经感染了杂菌；或者是由于母种或原种已经感染了杂菌；或者是由于接接种工具不严格种工具不严格（消毒），把杂菌带入。（消毒），把杂菌带入。2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？些？怎样鉴别？若杂菌先在若杂菌先在培养基表面培养基表面发生，这是由发生，这是由于接种过程中于接种过程

51、中无菌操作不严无菌操作不严而引起的。而引起的。若杂菌是在若杂菌是在接种后若干天才接种后若干天才发生的，发生的，而且是发生在瓶口往下挂的，这说明杂而且是发生在瓶口往下挂的，这说明杂菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原因是因是培养室湿度过大、棉塞受潮，造成培养室湿度过大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致霉菌滋生所致。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法3、为什么母种不能多次转管移植？、为什么母种不能多次转管移植？ 母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力，母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力，降低出菇率，甚至造成菌丝不孕而不能降低出菇率，甚

52、至造成菌丝不孕而不能形成子实体。因此母种培育可以一次多形成子实体。因此母种培育可以一次多培育几支试管，不要反复多次分离转管，培育几支试管，不要反复多次分离转管，以确保菌丝旺盛的生活力。以确保菌丝旺盛的生活力。（发生变异）（发生变异）4、优良菌种的标准是什么？、优良菌种的标准是什么？ 各种食用菌菌种，既有特定的质量标各种食用菌菌种，既有特定的质量标准，也有共同的质量标准。这些共同的准，也有共同的质量标准。这些共同的质量标准主要是质量标准主要是纯、壮纯、壮两条。两条。纯：纯：除银耳菌种，其余各种栽培食用除银耳菌种，其余各种栽培食用菌均是一种菌丝体的纯培养物，不得混菌均是一种菌丝体的纯培养物，不得混

53、入杂菌或纯培养物以外的其它菌种。入杂菌或纯培养物以外的其它菌种。例如：香菇例如：香菇7925菌种，只能是菌种，只能是7925菌株菌株菌丝体的纯培养。菌丝体的纯培养。4、优良菌种的标准是什么？、优良菌种的标准是什么？ 第一、不得混入毛霉、根霉、曲霉、木第一、不得混入毛霉、根霉、曲霉、木霉等任何霉菌或细菌、病毒；霉等任何霉菌或细菌、病毒；（杂菌）（杂菌）第二、也不得混入平菇、金针菇等其它第二、也不得混入平菇、金针菇等其它食用菌的菌丝体；食用菌的菌丝体；（其它食用菌）（其它食用菌）第三、也不得混入香菇第三、也不得混入香菇7925菌株以外的菌株以外的任何一种香菇菌株。任何一种香菇菌株。（其它菌株）（其

54、它菌株）壮：壮：菌种长相正常、长势旺、再生能菌种长相正常、长势旺、再生能力强。力强。 1、食用菌生产中常用的设备和用具有哪些？、食用菌生产中常用的设备和用具有哪些？（1）接种设备：如接种箱、超净工作台、接种）接种设备：如接种箱、超净工作台、接种室等；室等；（2）灭菌设备：如高压蒸汽灭菌锅、常压灭菌）灭菌设备：如高压蒸汽灭菌锅、常压灭菌锅等；锅等；（3）培养设备：如培养室、生化培养箱；）培养设备：如培养室、生化培养箱；（4）培养菌种容器：如试管、菌种瓶、菌种袋；）培养菌种容器：如试管、菌种瓶、菌种袋；（5）接种工具：如接种针、环、刀、钩、铲、）接种工具：如接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；锄、枪等；（6）消毒药品：如）消毒药品：如70%酒精、酒精、0.1%升汞、升汞、0.1%KMnO4、5%石炭酸、石炭酸、 2%来苏尔、新洁来苏尔、新洁尔灭、甲醛（福尔马林）等。尔灭、甲醛（福尔马林）等。一、简答题一、简答题2、写出、写出PDA培养基的配方和配制方法培养基的配方和配制方法。PDA培养基的配方：培养基的配方：马铃薯马铃薯200g，葡萄糖，葡萄糖20g，琼脂，琼脂20g，水，水1000mL，pH6.5配制方法：配制方法：马铃薯去皮马铃薯去皮切成片切成片称取称取200g加水加水1000mL煮沸煮沸2030mim双