三聚氰胺性质及其化学检测方法1

1、性质概述性质概述前处理方法前处理方法分析检测方法分析检测方法C3H6N6概述概述 三聚氰胺三聚氰胺(Melamine)简称三胺，俗称蜜胺、简称三胺，俗称蜜胺、蛋白精，是一种重要的氮杂环有机化工原蛋白精，是一种重要的氮杂环有机化工原料。料。 三聚氰胺属白色结晶粉末，无味，毒三聚氰胺属白色结晶粉末，无味，毒性轻微。动物若长期摄入三聚氰胺则会造性轻微。动物若长期摄入三聚氰胺则会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结成生殖、泌尿系统的损害，膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。石，并可进一步诱发膀胱癌。 三聚氰胺是一种用途广泛的基本有机化三聚氰胺是一种用途广泛的基本有机化工中间产品，最主要的用途是作为

2、生产三聚工中间产品，最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂（氰胺甲醛树脂（MF）的原料。三聚氰胺还）的原料。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。 装饰装饰面板面板 涂料涂料 模塑粉模塑粉 纸张纸张 主要主要用途用途v2007年期间，美国相继发生多起猫狗宠物肾年期间，美国相继发生多起猫狗宠物肾衰竭并导致死亡的事件，这是因为饲料中存衰竭并导致死亡的事件，这是因为饲料中存在三聚氰胺且长期食用的原因在三聚氰胺且长期食用的原因。v2008年年9月，我国媒体报道称许多婴儿因吃月，我国媒体报道称许多婴儿因吃三鹿奶粉而导致泌尿系统疾病，甚至患肾结三鹿奶粉而导致泌尿

3、系统疾病，甚至患肾结石，同时三鹿公司也承认三鹿奶粉受三聚氰石，同时三鹿公司也承认三鹿奶粉受三聚氰胺污染后，食品中含三聚氰胺的危害才引起胺污染后，食品中含三聚氰胺的危害才引起人们的高度重视。人们的高度重视。 目前广泛认为三聚氰胺毒性非常轻目前广泛认为三聚氰胺毒性非常轻 微，基本上没有肾毒性，但是由于加工微，基本上没有肾毒性，但是由于加工过程中的原因使得三聚氰胺中常常混有过程中的原因使得三聚氰胺中常常混有三聚氰酸，两者紧密结合形成不溶于水三聚氰酸，两者紧密结合形成不溶于水的网格结构。摄入人体后易在肾细胞中的网格结构。摄入人体后易在肾细胞中两者再次结合沉积从而形成肾结石。两者再次结合沉积从而形成肾结

4、石。 收治婴儿中有收治婴儿中有90%以上经过化验结以上经过化验结果显示是尿酸胺结石，这种情况在结果显示是尿酸胺结石，这种情况在结石中非常少见，只占到各种结石的石中非常少见，只占到各种结石的6%-10%。经过进一步检测，推测这些婴。经过进一步检测，推测这些婴儿是由于摄入的脂肪和蛋白含量比例儿是由于摄入的脂肪和蛋白含量比例失调，引起体内嘌呤碱代谢异常，继失调，引起体内嘌呤碱代谢异常，继而产生尿酸和尿酸盐结晶，在上尿路而产生尿酸和尿酸盐结晶，在上尿路梗阻后形成肾结石，导致肾衰竭。梗阻后形成肾结石，导致肾衰竭。样品前处理方法样品前处理方法固相萃取固相萃取(SPE)柱的选择：柱的选择： 混合型的阳离子交

5、换柱混合型的阳离子交换柱(PCX)样品前处理步骤样品前处理步骤 标准样品配制标准样品配制 提取提取 净化净化(PCX小柱，小柱，60mg/3mL)样品前处理步骤标准样品配制标准样品配制： 取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50mL 得到 1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。 提取提取： 称取样品 5g，加入 50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2mL 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取部分溶液转移至 10mL 离心管中，8000rpm/min 离心 10min，取上液3mL 过混合型阳离子交换小柱(PCX)。

6、 净化净化(PCX(PCX小柱，小柱，60mg/3mL)60mg/3mL) ： 活化及平衡：3mL 甲醇，3mL 水 上样：加入提取液 3mL 淋洗：3mL 水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配置：5mL 氨水+95mL 甲醇)。 浓缩：50，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL，HPLC 分析或衍生化后 GC-MS分析。固相萃取操作离心机处理固相萃取分离酶联免疫法酶联免疫法 重量法重量法升华法升华法高效液相高效液相色谱法色谱法气质联用法气质联用法电位滴定法电位滴定法液相色谱条件液相色谱条件 色谱柱：色谱柱：Venusil

7、ASB-C18 4.6250mm 缓冲液：缓冲液：10mM 柠檬酸柠檬酸, 10mM 庚烷磺酸钠庚烷磺酸钠 流动相：缓冲溶液流动相：缓冲溶液:乙腈乙腈= 92:8 进样量：样品用流动相溶解，进进样量：样品用流动相溶解，进20L 流流 速：速：1.0mL/min 柱柱 温：温：40 波波 长：长：240nm 为了缩短运行时间，我们将抽取不同样品检测动相流中乙腈比例由为了缩短运行时间，我们将抽取不同样品检测动相流中乙腈比例由 8%调为调为8.5%，使，使得得RT=8.889min，主峰与前杂峰的分离度，主峰与前杂峰的分离度 R=1.893，已达到基线分离，主峰，已达到基线分离，主峰TF=1.240

8、，满足分析要求，故调整流动相中乙腈比例至，满足分析要求，故调整流动相中乙腈比例至 8.5%，进行下一步研究。，进行下一步研究。 酶联免疫吸附法简称酶联免疫吸附法简称ELISA，是在免疫酶技术基础，是在免疫酶技术基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。上发展起来的一种新型的免疫测定技术。基本原理是基本原理是: 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。又保留酶的活性。

9、在测定时在测定时,把受检标本把受检标本(测定其中的抗体或抗原测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物底物被酶催化变为有色产物,产物产物的量与标本中受检物质的量直接相关

10、的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。刊物定性或定量分析。样品萃取 样品萃取液 三聚氰胺HRP酶耦合物 标准品 微孔 包备有三聚氰胺抗体 培养 样品中的三聚氰胺和三聚氰胺样品中的三聚氰胺和三聚氰胺HRP酶酶耦合物与三聚氰胺抗体竞争性结合，也就耦合物与三聚氰胺抗体竞争性结合，也就是受检标本（测定其中的抗体或抗原）与是受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体发生特异性结固相载体表面的抗原或抗体发生特异性结合反应，形成酶标记的免疫复合物合反应，形成酶标记的免疫复合物 培养物底物洗涤加入显色酶 结合的酶耦合物使液体现蓝色 没

11、有结合的三聚氰胺和三聚氰胺HRP酶耦合物将被冲洗掉 酶标仪读数 将未知样品的读数将未知样品的读数和标准品的读数比和标准品的读数比较就能得出样品中较就能得出样品中的三聚氰胺浓度的三聚氰胺浓度 由于酶的催化效率很高，间接地放大了由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。敏感度。酶联免疫吸附法也存在着局限性，如检测三聚氰胺的精确度有酶联免疫吸附法也存在着局限性，如检测三聚氰胺的精确度有限，同时还不排除其他类似化合物出现同样的检测结果。因此，限，同时还不排除其他类似化合物出现同样的检测结果。因此，这种试剂盒可以用于对可能含有三聚氰胺这种物质的产品的初这种试剂盒可以用于对可能含有三聚氰胺这种物质的产品的初步筛查。如果出现颜色三聚氰胺的检测，必须选择精确度更高步筛查。如果出现颜色三聚氰胺的检测，必须选择精确度更高的方法，才能更好地确保结果的真实性的方法，才能更好地确保结果的真实性结论结论分析化学只是一个检测手段分析化学只是一个检测手段,即使有最方便最准确最可靠的方即使有最方便最准确最可靠的方法来分析三聚氰胺法来分析三聚氰胺,也只能保证老百姓不消费含有三聚氰胺的也只能保证老百姓不消费含有三聚氰胺的奶制品。三聚氰胺本不应该在奶制品中存在奶制品。三聚氰胺本不应该在奶