天然物质取扱

1、天然物質取扱天然物単離天然材料植物，微生物，海洋生物抽出溶媒抽出，樹脂吸着，交換精製，結晶化構造決定NMR，MS，X線天然成分抽出有機化合物親和性高溶媒溶解性質利用，試料溶媒添加，目的成分溶解溶液分離方法培養液水不混和性有機溶媒抽出使用有機溶媒水分配係数分配，酢酸，生体多量水含水混和性溶媒水抽出，水（熱水），水生体乾燥物目的成分溶解溶媒抽出種類溶媒使用可能溶媒抽出水溶液中有機化合物疎水性相互作用系樹脂（HP-20）再使用可能吸着力弱，芳香族化合物吸着溶出溶媒水，水，（ODS）再使用可能吸着力弱溶出溶媒水，活性炭吸着力強，芳香族化合物吸着溶出溶媒水，非極性有機溶媒中化合物親水性相互作用，（），酢

2、酸，（混合溶媒）吸着溶離（溶出）強酸性陽交換樹脂塩基性物質，両性物質交換基：酸（Dowex 50）酸活性化（H+型）溶出液水弱酸性陽交換樹脂強塩基性物質交換基：酸解離平衡Na+型使用可溶出液水，塩酸水強塩基性陰交換樹脂酸物質，両性物質交換基：級（Dowex 1）塩基活性化（OH-型）溶出液塩酸水弱塩基性陰交換樹脂強酸性物質交換基：級解離平衡Cl-型使用可溶出液塩酸水，水交換天然物精製不混和性種溶媒中，溶質上層下層分配。十分低濃度領域，両溶媒層溶質濃度比一定温度一定（分配律）分配係数P = 有機溶媒層溶質濃度 / 水層溶質濃度分配天然抽出物酢酸水分配酢酸層水分配水層層水層 /90%水 /（10：

3、1） 吸着剤固定相（水）吸着，展開溶媒間分配連続的行，溶質分離順相系固定相保持担体（吸着剤）：，展開溶媒： 酢酸水水緩衝液酢酸水逆相系固定相保持担体（吸着剤）：ODS，系樹脂展開溶媒： or 水 or 酢酸水 or 緩衝液吸着比較，多量試料処理困難分配遠心機中固定相（上層下層）遠心力保持，移動相（下層上層）液滴内通過分配行液滴（上層）遠心力遠心分配（CPC）遠心機中固定相（上層下層）遠心力保持，移動相（下層上層）液滴内通過分配行液滴（下層）遠心力遠心分配（CPC）吸着剤展開溶媒間吸着溶離平衡利用，化合物分離極性吸着剤，（）展開溶媒： 酢酸非極性吸着剤活性炭展開溶媒： 水水緩衝液分配明確区別困難

4、多非可逆的吸着分離障害吸着毛細管現象浸透上昇溶媒利用，分配吸着溶離平衡試料分離順相系，（）展開溶媒： 酢酸酢酸水逆相系ODS展開溶媒： 水酢酸水緩衝液分離優精製用場合担体，目的物抽出比較，多量試料処理困難薄層（TLC）高密度担体充填金属用，高圧展開溶媒流，高分離能実現障害担体間空隙試料拡散細粒化球状担体高密度充填空隙体積減少試料拡散減少，流速減少逆相系ODS展開溶媒： or 水 or 酢酸水 or 緩衝液順相系展開溶媒： 2-ODS繰返使用可能劣化高速液体（HPLC）非破壊的方法検出必要（利用）UV（254 nm）UV吸収化合物検出一部，発色法検出（TLC上硫酸発色）TLCUV（254 nm）

5、UV吸収化合物検出疎水性化合物水発色細長短冊状切取，発色剤発色HPLC検出装置連結UV（254 nm）UV吸収化合物検出UV（220 nm）結合UV吸収検出UV（195 nm）有機化合物検出示差屈折計（RI）有機化合物検出，低感度天然物精製化合物検出使用溶媒限定完熟種子粉砕物（100 kg）抽出，濃縮酢酸抽出（pH 7）酢酸層水層酢酸抽出（pH 2.5）酢酸層水層酢酸（55：4560：40）活性炭水（1：1）Sephadex G-50分配1 M 酸緩衝液（pH 5.4）（95：593：7）TLC酢酸酢酸（8：20：1）A1（10 mg）COOHOCOHOCH3HHOHStreptomyces

6、ribosidicus培養濾液pH 7調整弱酸性陽交換樹脂（NH4+型）0.5 M 水濃縮，pH 7調整弱酸性陽交換樹脂（NH4+型）0.2 M 水濃縮強塩基性陰交換樹脂（OH-型）水凍結乾燥再結晶結晶H2NHOOOOH2NOHOHNH2NH2OHOOHOHColeophoma empetri培養物（20 L）添加，濾過，濃縮酢酸抽出酢酸層水層抽出層水層（3：11：1）ODS逆相50%洗浄80%溶出遠心分配水（4：1：5）酢酸水（6：1：1）WF11899A（11 mg）HNNHNNNHHNOOOHOOCH3H2NOOOOOHOHHOHHHOHOHHOH3COHHOHHHNHCH3OSO3Na

7、天然物構造決定1805年 発見1925年 構造決定1928年 発見1945年 構造決定120年17年NMR (nuclear magnetic resonance)原子核（特水素炭素）近傍構造，原子方MS (mass spectrometry)分子質量（分子量） IR (infrared)官能基確認UV (ultraviolet)二重結合共役状態，化合物同定X線 (X-ray) 結晶解析立体構造決定機器分析構造決定医薬医薬品開発糖尿病治療薬1980年代利用高価B鎖C末端 Thr30 Ala30 197年遺伝子解明1980年Herbert Boyer （Genentech社創設）組換大腸菌生産1

8、987年 組換酵母生産 上Amp耐性PBR322制限酵素制限酵素A鎖組換体形質転換，Amp選択TTAACTAGEcoRIBamHIAATTCTAGEcoRIBamHIA鎖遺伝子遺伝子組換技術生産A鎖遺伝子組換大腸菌，B鎖遺伝子組換大腸菌両鎖別生産，可溶化結合形成（B鎖-C鎖-A鎖）遺伝子組換大腸菌生産，可溶化結合形成B切断B鎖A鎖融合遺伝子組換酵母体分泌生産切断組換技術生産医薬対象疾患製造法糖尿病大腸菌酵母成長小人症大腸菌心房性利尿急性心不全大腸菌低血糖症酵母組換技術生産酵素医薬酵素適用製造法t-PA血栓溶解動物細胞血液凝固第因子血友病動物細胞血液凝固第因子血友病動物細胞組換医薬生産用宿主宿主分泌生産糖鎖大腸菌困難枯草菌可能酵母可能酵母型CHO細胞可能型組換医薬生産用大腸菌pBR322系酵母（pBR322酵母ars1）動物細胞 （pBR322MMLV）目的遺伝子運手宿主細胞内安定複製適当制限酵素切断点有薬剤耐性有組換技術生産B型肝炎粒子HBsAg（表面抗原）感染防御抗原HBcAg（抗原）DNADNA結合質X質組換HBsAg酵母生産（糖鎖）B型肝炎医薬対象疾患製造法B型肝炎，C型肝炎，大腸菌大腸菌大腸菌受容体可溶性TNF受容体関節動物細胞（）増殖因子貧血動物細胞G-CSF白血球減少大腸菌組換技術生産類医薬抗体対象疾患製造法（）抗HER2抗体乳