法测定黄芩苷分散片的含量及有关物质

1、HPLC法测定黄芩苷分散片的含量及有关物质Determination of Baicalin and its Related substances in Dispersible tablets by HPLC杨 清YANG Qing湖南省药品审评认证与不良反应监测中心（中国 410013）Center for Drug Evaluation and Authentication,ADR monitoring of hunan(China 410013)中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：18180086（2008）03摘 要 ： 目的  采用高效液相色谱法测定黄

2、芩苷分散片含量及有关物质。方法  C18（Polaris 4.6×150mm，5）色谱柱，以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）为流动相；检测波长280nm；流速1.0mlmin；柱温30；进样量10l。结果  分散片中辅料对主药测定无干扰，黄芩苷与有关物质完全分离。在12.68114.12g/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999，n=5)。平均回收率为99.3%（RSD=0.33%, n=6）。结论  本方法简便，迅速，准确，专属性强。关键词： 黄芩苷；分散片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质  &#

3、160;    Abstract：  Objective  To establish an HPLC-UV method for determination of Baicalin and its related substances in dispersible tablets. Methods  C18（Polaris 4.6×150mm，5） column was used. The mobile phase was consisted of methanol-water-phosphoric acid  (

4、47530.2). The flow rate was 1.0 mlmin with The detection wavelength was at 280nm. The column temperature was 30. The injection volume was 10l.Results  The linear range for the content of Baicalin was 0.12681.1412g ,the corretation coeffient was 1.0(n=5); The average recovery was 99.3%，and its R

5、SD was 0.66%(n=6).Conclusion  The method is simple， sensitive，accurate and specific.      Key words: Baicalin；Dispersible Tablets； HPLC； Determination； Related Substances   黄芩苷分散片系黄芩苷与适宜辅料制成的分散片，用于急、慢性肝炎、迁延性肝炎的辅助治疗。原剂型为普通片剂，崩解慢，药物溶出速度慢，不能满足患者希望药物迅速起效

6、的需求。而分散片是近年来研究应用较多的一种速释固体剂型，其兼有片剂和液体制剂的优点，并克服两者的不足。原剂型收载于国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地标升国标第十二册，原质量标准规定了黄芩苷的含量测定及两个化学反应鉴别。在原标准的基础上，采用高效液相色谱法测定黄芩苷分散片的含量及其有关物质，方法专属性强，灵敏度高，重复性好。1 仪器与试药    HP1100高效液相色谱仪（Agilent），TL9900数据处理软件。甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水；黄芩苷对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号为715-200211）；黄芩苷分散片（研制单位自制）。

7、2 实验方法2.1  色谱条件  色谱柱：C18（Polaris 4.6×150mm，5）；流动相：甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；流速1.0 ml/min；检测波长280nm；柱温30；进样量10l。2.2  系统适用性实验  取处方量辅料适量和黄芩苷分散片，按“2.9”项下操作，记录色谱图。另取经60减压干燥6小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，取10l注入液相色谱仪，记录色谱图。取黄芩苷适量，分别进行酸、碱、高温（热）、光照破坏处理后，各进样10l，色谱图见图1。实验结果表明，在“2.1”项

8、的色谱条件下，辅料对测定无干扰，黄芩苷经酸、碱、高温、光照破坏后，均有明显的分解产物峰，但分解产物均与主峰有良好的分离度，不影响测定。色谱柱理论塔板数按黄芩苷计算不得少于3000。图1  黄芩苷HPLC图A-空白辅料溶液；B-对照品溶液；C-片剂溶液；D-碱破坏；E-酸破坏；F-高热破坏；G-光照破坏；1-黄芩苷2.3  线性实验 取黄芩苷对照品12.68mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为贮备液（126.8g/ml）。精密量取贮备液1、3、5、7、9ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各取10l进样，记录色谱图，以浓度（C，g）

9、为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A=41841876C+219813，r=1.0，可见在黄芩苷0.12681.1412g范围内线性良好。2.4  精密度实验  配制浓度约为60g/ml的黄芩苷对照品溶液，进样10l，连续进样5次，记录峰面积，RSD为0.23%。2.5  重现性实验  取040316批样品，按“2.9”项下操作平行测定5次，计算其含量分别为标示量的99.54%、98.97%、98.79%、99.66%、98.97%，平均值为99.19%，RSD为0.4%。2.6  稳定性实验  按“2.9”项下

10、方法，取供试品溶液一份，于室温下放置，于0，2，4，8，12小时，分别进样1次，进样量为10l，记录峰面积，RSD=0.66%，说明样品溶液在12h内较稳定。2.7  回收率实验 取黄芩苷对照品与空白辅料，按处方工艺，制成主药浓度为标示浓度的80%、100%、120%各二份，按“2.9”项下方法，制成供试品溶液，精密取溶液10l进样，记录峰面积，并计算回收率，结果分别为99.35%、99.15%、98.98%、98.38%、100.17%、99.96%，平均回收率99.33，RSD为0.66%（n=6）。2.8  最低检测限  在选定的色谱条件下，按信噪

11、比为3对最低检测限进行测定，结果表明，最小检出量1.5ng。2.9  含量测定 取经60硅胶干燥器中减压干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml中约含60g的溶液，作为对照品溶液；另取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于黄芩苷6mg），置100ml量瓶中，加甲醇适量，超声30分钟使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取对照溶液和供试品溶液各10l，注入高效液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，即得。3批样品的含量分别为标示量的99.2%、98.8%、98.6%。2.10  有关物质测定 取本品5

12、片，研细，精密称取适量(约相当于黄芩苷5mg)，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液 (约含黄芩苷0.2mg/ml)。取经60硅胶干燥中减压干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml中约含20g的溶液，作为对照溶液。精密吸取对照溶液10l ,注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满制度的1525%，再量取供试品溶液10l注入液相色谱仪，记录色谱图（图2）至主成分峰保留时间的2倍，如有杂质峰，量取各杂质峰面积之和, 与对照溶液的主峰面积相比较。图2  黄芩苷有关物质HPLC图3  讨论3.1  流动相比例的选择  实验中曾用不同比例的甲醇-水-磷酸（42：58：0.2，50：50：0.2，47：50：0.2）为流动相，但分离效果差（与前后杂质峰未达基线分离）；改用甲醇-水-磷酸（4