荧光定量PCR仪参数比照表

1、荧光定量PCR仪参数比照表品牌QIAGENRocheBio-RadABI比较参数Rotor-GeneQ5-plex+HRM480CFX96/IQ5ABI7300(32000)激发光源LED（发光二极管）每个通道配备独立的LED光源，HRM为独立的通道氤灯LED/1个卤素灯卤鸨灯：光强逐渐衰减，寿命短，每2-3个月需要更次。独立光源和滤光片独立光源和滤光片，每个通道均得到特异，均一的激发；最小的光谱重叠，6个LED独立激发，无需预热，使用方便，即开即用，自动开关光源，即使过夜，也不用担心光源会烧坏棱镜折射，光谱重叠及相互的干扰，需要预热，实验结束必须关机；氤灯使用寿命仅1000-2000小时，一

2、两年必需更换，曲川更换成本更高达几千美金；且它们的光强会不断衰减，影响结果稳定性96个光纤检测，移动检测，稳定性差，需要预热，实验结束必须关机；光路需要复杂调校，仪器搬动后也需要专业调校棱镜折射，光谱重叠及相互的干扰，需要预热，实验结束必须关机；卤鸨灯使用寿命仅1000-2000小时，一两年必需更换，曲川更换成本更局达儿干美金；且它们的光强会不断衰减，影响结果稳定性激发光范围365-670nm450nm,483nm,523nm,588nm,615nm400-700nm/450-730nm500-660nm荧光检测器PMT（光电倍增管）：灵敏度局CCDCCD/二级管低温CCD:灵敏度低，检测线性

3、范围较窄升降温速率升温15C/秒；降温20C/秒。升温4.8C/sec降温2.5C/sec升温5C/sec降温3.3C/sec基座的平均升降温速度3.5C/秒，样品实际平均温度变化速度为1C/秒温度均一性3.01C由2ci0.5C10.5C温度分辨率3.02C士0.1C士0.2C士0.25C线性范围与区分度10个数量级（1-1010）能清晰区分单个拷贝10个数量级9个数量级9个数量级温度范围室温-99C4-99C4-99C4-99C反应体系最低可以做5微升体系，节省试剂5-100ul体系10-50ul体系只能做到10微升体系内参温度均一性好，没有光程差，不需要加ROX内参96孔板有光程差，必须

4、加ROX内参96孔板有光程差，必须加ROX内参温度均一性不够好，96孔板有光程差，必须加ROX内参，增加了成本HRM分析技术上专用的HRM分析工具，可自动分类/型，突变检测等需要增加软件的功能，/、同的软件，HRM功能表现不好，无义就支持HRM功能表现不好，无义献支持耗材耗材开发专用耗材，顶部无法标记专用耗材，顶部无法标记专用耗材，顶部无法标记SNP河碱基艾化典型的Tm变化稀有性（人类）1C/T和G/A较大0.5C很小0.2C64%2C/A和G/T20%3C/G9%4A/T7%这个表格反映的是碱基的不同，带来的Tm值的变化，可以看出A/T之间的突变，需要温度分辨率小于0.2C才能区分开，而象A

5、B等其它公司的分辨率是土0.25C,所有它是区别不开第四类的SNP变化的，HRM技术的发明者，曾发表过一篇文章，用市场上所有能做HRM机器的定量，做了一次比较，结果显示QIAGENRotor-GeneQ是能做的最好的一个公司；文章全文可见以下链接：Herrmannetal2007ClinicalChemistry53,/cgi/content/abstract/clinchem.2007.088120v1ExpandedInstrumentComparisonofAmpliconDNAMeltingAnalysisforMutationScannin

6、gandGenotypingFig1（detail）Normalizedmeltingcurvesofa110bp0-globinamplicon（triplicateHRMdata）以下是一些关于定量PCRHRM（HighResolutionMelt中文：高分辨率熔解曲线）一些介绍！（QIAGEN）有2个最显著特点：1）是温控精度非常高（温度均一性：40.01C,温度分辨率：却.02）及升降温速度非常快（升温可达15C/秒，降温可达20C/秒）2）是区别与其它的公司定量PCR的是它的HRM功能，这个是其它厂家都无法能做到的（比如ABI7500Fast及其它公司这种板式加热系统，因为它的温度分

7、辨率达不到）QIAGEN是一个集遗传分析和定量完美结合的一款机器；现阶段，大家检测SNP时都用一贯的检测方法，包括测序，探针还有DHPLC等等，而甲基化大多用MSP.至于HRM技术并不为大家所熟知，有两个原因：1）适合做HRM技术的仪器在国内的普及程度不高，具我了解能真正能够做HRM的只有QIAGENRoter-GeneQ+HRM系列和IdahoLightScanncer.Roche;其中QIAGEN在其温度控制及软件分析上是做的最好的.（其它的比如ABI7500Fast及伯乐也对外宣传它的HRM功能，但由于它的温控精度，决定了它做HRM功能是做不好的，可见也是一个赶时髦的功能，也只能通过软件

8、的模拟来处理）2）HRM的实验灵敏度太高，影响实验因素过多，很多人都做了，但是就是做不出来.因此就放弃，就换用其他比较成熟的方法.殊不知,HRM技术的检测方法有其他技术难以比拟的优势，不仅能实现高通量和高精度的同时,PCR和荧光定量在同一管内进行，能够有效避免假阳性.（QIAGEN上海有个用的非常好的用户，是交通大学华山医院的关明主任，用这个机器发表了一篇非常好的文章，如果老师有兴趣，可过去看看）作为新一代的遗传扫描工具，HRM具有"简，效，快，廉”等其他技术难以比拟的优势：简：无需序列特异性探针，不受碱基位点局限，同时检出已知或未知突变、SNP和甲基化位点：闭管操作，避免交叉污染。效：最低检测0.1%-0,01%的突变或异常甲基化，检测SNP灵敏度和特异性均为100%。快：1次同时检测几十个样本，在一个小时左右就完了成检测。廉：简化操作步骤、降低人工和试剂成本，费用远少于测序、Taqman探针等方法。价格就几毛钱（2毛人民币）；其它用定量PCR来做SNP研究的方法，都只能对已知SNP进行分析，而且基本都需要合成序列特异性探针，局限性和费用都比较大，一来只能做已知的SNP,二来需要合成序列特异性探针。而HRM则不受这些条件的限制，既可做已知位点又可做未知位点，且无需序列特异性探针，费用大大降低，应用的灵活性也大大提高。HRM技术特