蛋白纯化AKTA操作说明

1、精选优质文档-倾情为你奉上AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。2. 打开系统：打开电脑：双击 Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面， Evaluation界面和Administration界面。其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual-Execute Manual

2、instructions-.； Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在System Control界面下，点击manual-Execute Manual instructions-Pumps-Pump A wash-点开inlet，选择A1-Excuse。4. 设置系统参数：设柱压：Alams-alam systerm pressure-high alam-设置柱压-Execute；设流速：Pumps-System flow -设置s

3、ystem flow（1mL/min）-Execute。注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。6.平衡柱子：分子筛buffer平衡柱子，一般要两个小时左右，盐离子浓度达到5.5%左右。7.设置系统及收集参数：命 名：先end-Manual instructions，点击browse，弹出sel

4、ect result name&location 界面，点开文件夹“defaultHome”，找到文件夹“labdata”，点开，选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建)，在界面下方“name”指令框进行命名。注意：命名时要标明日期，柱子型号，样品名称。设流速：Pumps-System flow-设流速（1 mL/min）-Execute；设柱压：Alams- alam systerm pressure-high alam-设置柱压-点击Execute；洗A泵：Pumps-Pump A wash-点开inlet，选择A1-Excuse；紫外调零：Monitors-Auto zero UV

5、-Execute；设置收集体积：Fracton collection-peak fractionation-fraction size-设置收集体积- Execute；一般设为1 mL(可根据实际情况调整)。 设置收集水平：Fracton collection-peak fractionation parameters-Start level-设置起始收集水平- Execute。注意：对于初次纯化的蛋白，由于蛋白含量未知，起始水平可设低些，如10 mAU,避免损失蛋白。8.上样：冲洗Loop环：取5mL注射器，吸取5 mL分子筛（不能有气泡），从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop

6、环；蛋白样品处理：取出蛋白样品（< 2 mL），12000 rpm离心3 min，把上清转移至新的离心管管，重复一次，以去除沉淀，避免堵塞系统；手动蛋白上样：把蛋白样品转移至注射器内，从进样口把样品注射入Loop环内； 注意：上样时应小心操作，首先弹出注射器内的气泡，随后稍推注射器，使注射器出口处悬挂一样品液滴（别太用力，导致液滴滴落），然后把注射器插入进样口，把蛋白样品推入Loop环中。Inject:点击Flow path-injection valve-点开position选项-inject-Execute-走2倍Loop体积的分子筛缓冲液；Load:点击Flow path-inje

7、ction valve-点开position选项-manual load-Execute，调回Load状态。9.收集目标蛋白：参照标准蛋白曲线，估计样品出峰位置，收集蛋白样品，做好标记，过完后，peak fracstop 900 停止收集。10. 20%乙醇平衡柱子：等精氨酸峰出来，离子浓度平衡后，点击pause，进分子筛的buffer的泵头用去离子水洗，放入20%的乙醇中，continue-洗泵（A1泵），平衡柱子。20%的乙醇平衡柱子，一般要两小时左右，盐离子浓度达到0%。11.收柱子（先下后上）：调节流速至0.5 mL/min，拧下柱下面的接头，连上注射器，再调流速至1 mL/min，注

8、射器内吸入3-5 mL 20%乙醇，取下柱上面的接头看是不是往外流液体，因为注射器内有压力，液体会倒流，盖子内滴满液体，立即拧上盖子，防止进气泡，将进样阀的线接到检测器上。12.关闭系统：点击End 关闭系统界面，关闭AKTA pure电源，关电脑。2018-09-01AKTA pure操作说明离子交换蛋白纯化步骤（RESOURCE Q/S）1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。2. 打开系统：打开电脑：双击 Unicorn 7.0打开系统,进入log on 界面，用户名默认为Default,输入密码：default,点ok键，出现提示对话框，继续点

9、确定，进入系统。注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面, Evaluation界面和Administration界面。其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual-Execute Manual instructions-.； Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。3. 洗泵：点击pause暂停系统-去离子水冲洗A1,B1进液泵头-分别放入A，B液中；洗B泵： 选择System Control界面manual-Execute Manual

10、 instructions-Pumps-Pump A wash-点开inlet，选择B1-Excuse；洗A泵： 选择System Control界面manual-Execute Manual instructions-Pumps-Pump A wash-点开inlet,选择A1-Excuse,洗泵结束后调B至100%，0min-Execute。4. 设置系统参数：设柱压：Alams-alam systerm pressure-high alam-设置最高柱压-Execute。设流速：Pumps-System flow-设置system flow（1 mL/min）-execute；注意：流速

11、和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。5. 安装RESOURCE柱（先上后下）：装离子柱时先拧开离子柱上面，连上来自进样阀的线，边拧紧上面边拧松柱下面，在离子柱子下端出口连上转接头，接上一根较短的先并连到检测器上（流出液体，滴满检测器上的连接口的洞里，再拧紧）。6. 平衡RESOURCE 柱：等B液平衡后，点击Pumps-gradient-Target-调B至0%，0min-Execute。等平衡后，记录最高和最低盐离子浓度：离子交换B液盐离子浓度约为84%，离子交换A液盐离子浓度约为1.7%。7.设置系统及收集参数：命 名：先end-Manual instructions，点

12、击browse，弹出select result name&location界面，点开文件夹“defaultHome”，找到文件夹“labdata”，点开，选择自己名字首字母缩写文件夹(已创建)，在界面下方“name”指令框进行命名。注意：命名时要标明日期，柱子型号，样品名称。设流速：Pumps-System flow-设流速（1 mL/min）-Execute;设柱压：Alams-alam systerm pressure-high alam-设置柱压-点击Execute；紫外调零：Monitors-Auto zero UV-Execute；设置收集体积：Fracton collect

13、ion-peak fractionation-fraction size-设置收集体积- Execute；一般设为1 mL (可根据实际情况调整) 。设置收集水平：Fracton collection-peak fractionation parameters-Start level-设置起始收集水平- Execute。注意：对于初次纯化的蛋白，由于蛋白含量未知，起始水平可设低些，如10 mAU，避免损失蛋白。8.上样：冲洗Loop环：取5 mL注射器，吸取5 mL分子筛（不能有气泡），从进样口注射2倍Loop体积的分子筛来清洗Loop环；蛋白样品处理：取出蛋白样品（< 2 mL），12

14、000 rpm离心3 min，把上清转移至新的离心管管，重复一次，以去除沉淀，避免堵塞系统；手动蛋白上样：把蛋白样品转移至注射器内，从进样口把样品注射入Loop环内； 注意：上样时应小心操作，首先弹出注射器内的气泡，随后稍推注射器，使注射器出口处悬挂一样品液滴（别太用力，导致液滴滴落），然后把注射器插入进样口，把蛋白样品推入Loop环中。Inject: 点击Flow path-injection valve-点开position选项-inject-execute-走2倍Loop体积的分子筛缓冲液；Load: 等流穿峰出来后，点击Flow path-injection valve-点开posit

15、ion选项-manual load-Execute，调回Load状态。注意：流穿峰蛋白先别丢弃，它有可能是样品没有挂上柱子而直接流出来的目标蛋白。9. 洗脱目的蛋白：Pumps-Gradient target 50%，length 50 min (可调)-Execute，自离子柱上洗脱结合的蛋白10. 收集目标蛋白：收集洗脱下来的蛋白样品，做好标记，过完后，peak fracstop 900停止收集。11. B液平衡离子柱：Pumps-Gradient target 50%，length 0 min- Execute，至盐离子浓度达到最高且平衡。如继续纯化其他蛋白样品：要用A液再平衡后再上样，步骤同上1-11。如不再纯化其他蛋白样品：点击pause暂停系统-去离子水冲洗A1