内皮型一氧化氮合酶基因多态性与老年高血压关系的研究

1、内皮型一氧化氮合酶基因多态性与老年高血压关系的研究         09-08-27 16:49:00     作者：刘海珍    编辑：studa20【摘要】  目的：探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因894G/T多态性与老年人原发性高血压病（EH）之间的关系。方法： 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术对湖北地区汉族129例高血压病患者（EH组）和117例健康者（NT组）的eNOS外显子894位点进行基因分型，生化

2、技术测定其血脂水平。结果：EH组T等位基因频率以及GTTT基因型分布频率均显著高于NT组（P<0.05）；在年龄不同组中这种显著相关性仅存在年龄小于61岁的中青年患者中。结论：eNOS基因可能与老年人群原发性高血压发生无关。 【关键词】  内皮型一氧化氮合酶； 高血压； 基因原发性高血压（essential hypertension，EH）是多种易感基因与环境相互作用所致的疾病，许多基因被选为高血压的候选基因。内皮型一氧化氮合酶（eNOS）属NOS家族，是血管内皮细胞合成NO的限速因子。近年来，一些研究显示，eNOS基因894G/T多态性与高加索人和日本人的原发性高血压、动脉粥

3、样硬化性相关疾病有关1，2，我们现在湖北地区老年群体中对eNOS基因894G/T多态性进行基因分型，旨在探讨该多态性与老年人群高血压的关系。    1  对象与方法    1.1  对象    选取2006年12月2007年10月我院住院部原发性高血压老年患者为高血压组（EH组），共129例，均符合1999 WHO/ISH诊断标准，并排除继发性高血压、心肌病、先天性心脏病、风湿性心瓣膜病、糖尿病及高血压合并冠心病。正常对照组(NT组)为随机挑选我院门诊健康体检者，共117例，血压正常，

4、排除心脑血管病、糖尿病、肝肾功能不全者。以上各组受检者均为无血缘关系的汉族人。    1.2  方法    采用改良碘化钠（NaI）法从外周血提取白细胞基因组DNA。    eNOS 894GT突变基因型检测：PCR反应引物序列参照Jachymova等3实验设计正向5'-GAG ATG AAG GCA GGA GAC AGT-3'，反向5'-TCC ATC CCA CCC AGT CAA T-3'，按常规PCR方法对目的DNA进行扩增。取8ul扩增产物, 37用M

5、bo限制性内切酶3U消化6h，然后在非变性8的聚丙烯凝胶电泳分离，硝酸银染色后鉴定基因型。酶法测定血清总胆固醇（TC）和甘油三脂（TG）；选择遮掩法直接测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）；直接法测定低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。所有指标的测定均在全自动化生化分析仪（岛津CL-7200）上进行。    1.3  统计分析    使用SPSS13.0软件包，研究对象与Hardy-Weinberg平衡符合程度、基因型与等位基因频率和组间计数资料采用2检验。组间的计量资料用t检验。以P< 0.05 为统计学差异有显著性。

6、    2  结果    2.1  原发性高血压组与对照组临床特征比较    除EH组收缩压和舒张压水平均显著高于NT组（P<0.05）外，两组间年龄、性别构成、体重指数及血脂水平的差异无显著性。    2.2  eNOS基因894G/T多态性分析    受检者DNA经PCR扩增，产物为263bp的片段。若在此片段中存在894GT位点突变，则产生限制性内切酶Mbo的切点，导致了3种基因型：GG型（无酶切位点纯合

7、子），酶切产物大小为263bp；TT型（存在酶切位点纯合子），酶切产物大小164 bp和99bp；GT型为3种片段并存的杂合子。所有研究人群的各等位基因频率经2检验，符合Hardy-Weinburg遗传平衡定律，见图1。    2.3  eNOS基因894G/T多态性基因频率与等位基因频率比较     09-08-27 16:49:00     作者：刘海珍    编辑：studa20    2.4

8、0; 年龄不同的EH组与NT组间eNOS基因型频率分布比较    中青年人群中eNOS基因型GT+TT基因型频率EH组显著高于NT组（2=6.40，P<0.05）。老年人群中，EH组eNOS基因型GTTT基因型频率高于NT组，但两组比较无差异显著性（P>0.05），见表2。表2  年龄不同的两组间eNOS基因型频率分布比较注：与NT组比较，* P<0.05。    3  讨论    对高血压病的发病的关键基因和相关基因透彻的了解，才有可能从基因水平诊治高血压病。人类e

9、NOS 基因人位于染色体7q35-36，全长21kb，有26个外显子，25个内含子，现已发现其基因存在近10个多态性位点，其中894位点碱基G被T所取代，导致编码产物第298号氨基酸由Glu变为Asp3。目前，有研究证实eNOS基因该位点多态性与高血压发病4，5以及治疗中的耐药性有相关性6，因此被认为是一种功能突变。此次本研究通过对246例中国湖北地区人群，进行eNOS基因894GT多态性分析发现，高血压组GT/TT基因型和T等位基因高于对照组，差异有统计学意义，提示该位点多态性可能时中国人群高血压发生的一个重要遗传标志。    进一步按不同年龄分析eNOS基因该

10、位点与高血压关系时，我们发现此多态性差异仅存在于中青年人群，与国内的一些研究不一致7。推测其原因可能是，随着年龄的增大，心血管系统结构与功能、肾功能、肾素系统、交感神经系统、血管感受器反射功能发生一系列变化，直接影响了老年高血压的病理生理，可能掩盖了基因多态性对老年高血压发生的作用。此外已有研究表明，eNOS基因G894T多态性分布具有种族差异和地区差异8。遗传、环境和生活习惯相互作用可能是结论不一致的原因之一。目前，尚未见该位点多态性与EH相关性存在年龄差别。另外，血压是一个连续变量，又涉及多个基因的作用，如何建立一个更合理的分析方法值得探讨。    高血压病是

11、多基因异常疾病，这就给对给靶基因的界定和选择带来了一定困难。某个单一基因多态性对疾病的作用显然不能说明全部问题，多个基因间相互关系以及与其他危险因素间已越来越引起人们的重视。提示我们需进一步深入探讨该多态性与该基因其他多态性间、该基因同其他高血压易感基因的间交互作用，以及同其他心血管疾病的关系，以期为高血压治疗带来更多进展。【参考文献】  1 Sawada T, Kishimoto T, Osaki Y, et al. Relation of the Glu298Asp polymorphism of the nitric oxide synthase gene to hyperte

12、nsion and serum cholesterol in Japanese workers. Prev Med， 2008 ，47:167171.2 Antoniades C,tousoulis D,Vasiliadou C, et al .Genetic polymorphism on endothelial nitric oxide synthase affects endothelial activation and inflammatory response during the acute phase of myocardial infarction. J Am Coll Car

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14、 essential hypertension in northern Han Chinese. Chin Med J (Engl)， 2006 ，119：10651071.5 Tang W, Yang Y, Wang B, et al. Association between a G894T polymorphism of eNOS gene and essential hypertension in Hani and Yi minority groups of China. Arch Med Res，2008，39：222225.6 Sandrim VC, Yugar-Toledo JC,

15、 Desta Z, et al .Endothelial nitric oxide synthase haplotypes are related to blood pressure elevation, but not to resistance to antihypertensive drug therapy.J Hypertens，2006，24:23932397.7 Wang Lin, Chen Dan, Xue Yu，et al.Relationship between the Glu298Asp Polymorphism of the Endothelial Nitric Oxide Synthase Gene and Essential Hypertension.Int J Gene