HPLC流动相的缓冲液参考模板

1、HPLC流动相的缓冲液缓冲液流动相可以根据下面的操作步骤配制：将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液（溶液A）。用pH计确定或调节溶液A的pH。将一定体积（如200ml）的有机溶剂B与由步骤2配制的溶液A（如800ml）混合，制成最终流动相（此处的有机相为20%）。检查最终流动相的pH（此处为选项）。由于测定含有有机调节剂的流动相pH计发生漂移，使其测定pH不很可靠，所以上面的步骤4一般只有在考察误差的主要来源时采用，大多数实验室皆略去此步骤。步骤1一般是将配制缓冲液所用的两种试剂（A1和A2）分别按计算量先溶解在水中制成水溶液，然后再将这两种溶液按一定的比例混合得到预期pH的溶液A。若在此步骤2中

2、调节pH，则可以采用溶剂A滴定溶剂B，也可反过来滴定，并通过pH计测量得到所需pH的最终缓冲溶液。在大多数实验室中，pH的测量精度通常不会达到±0.050.1个pH单位，这会显著影响一些样品的分离。当HPLC方法对pH非常敏感时，步骤2只能大致确定pH值。        将准确称重的缓冲液配制试剂与精确体积的脱气蒸馏水混合，使其成为均一的溶液（不进一步调整pH），如此配得得缓冲溶液得pH可以控制在非常窄得范围内（±0.02单位），已知准确pH值得缓冲液浓溶液已有市售。        为了改善峰形

3、或塔板数，有时在流动相中加入酸或碱（如三乙胺、乙酸等），如果这些添加剂并非为配制缓冲溶液时所采用得试剂，那么将这些试剂加入到流动相中后，还需重新滴加酸或碱，使流动相达到所需的pH值。常用缓冲液的配制        当缓冲液被稀释或浓缩时，pH也应不变。其pH值应近似恒定不变，或当其中的离解的阳离子（K+、Na+）或阴离子（Cl-、Br-）被其它种类的离子替换时，表14中给出了响应的配制方法，平衡阳离子为Na+，缓冲液的最终浓度为0.1mol/l，对于其它浓度的缓冲溶液或阳离子种类（通常K+）更好，表中的数据也可供参考。较稀的或较浓的缓冲溶液，及包含有不同

4、阳离子的溶液，其pH值会与表中的数据稍有出入。在方法建立过程中，精确的流动相pH值往往并不重要，重要的是每次新配制的流动相的pH值与第一次基本相同（最好控制在±0.02范围内）。注意，只有当缓冲溶液的pH在缓冲试剂解离常数pKIa±1范围内时，缓冲溶液才具有有效的缓冲容量（如乙酸盐的pKa=4.6，其适宜的pH范围为3.65.6）。表1 低pH值（25）磷酸盐缓冲溶液的配制方法溶液A1：0.1M磷酸。配制精确pH值缓冲液时，所用磷酸需滴定H3PO4的含量。溶液A2：0.1M磷酸二氢钠溶液，称量13.8g NaH2PO4·H2O溶解于水中，定容于1L容量瓶中。

5、60;       pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）                pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        2.0        565  &#

6、160;     435                2.8        175        825        2.2        455        545                3.0 

7、;       110        890        2.4        345        655                3.2        55        945        2.

8、6        250        750                                        表2 不同pH值（25）醋酸缓冲溶液的配制方法溶液A1：0.1M醋酸溶液。6.0g（5.8ml）冰醋酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M醋酸钠溶液。8.2g C2H3O2Na（或1

9、3.6g C2H3O2Na·3H2O）溶解于水中定容到1L容量瓶中。        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        3.6       

10、; 926        74        4.8        400        600        3.8        880        120        5.0        296   

11、60;   704        4.0        820        180        5.2        210        790        4.2        736        264 

12、      5.4        176        824        4.4        610        390        5.6        96        904        4

13、.6        510        490                                表3 不同pH值（252 / 4）柠檬酸缓冲溶液的配制方法溶液A1：0.1M柠檬酸溶液。21.0g 柠檬酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M柠檬酸钠溶液。29.4g C6H5O7Na3·2H2O溶解于水中，定容到1L容量瓶中

14、。        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        3.0        930        70

15、60;       5.2        360        660        3.2        870        126        5.4        320        680     

16、60; 3.4        810        190        5.6        270        726        3.6        750        260        5.8   

17、    230        764        3.8        700        300        6.0        190        810        4.0        660

18、0;       340        6.2        140        856        4.2        610        370        6.4        60       

19、; 940        4.4        560        440        6.6        40        960        4.6        510        490   

20、60;   6.8        30        970        4.8        460        540        7.0        10        985        5.0  &#

21、160;     410        590                                表4 中等pH值（25）磷酸缓冲液的配制方法溶液A1：0.1M磷酸二氢钠溶液。13.8g NaH2PO4·H2O溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M磷酸氢二钠溶液。26.8g Na2HPO4·7H2O（或35.9g Na2HPO4

22、3;12H2O）溶于水中，定容到1L容量瓶中。        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        5.6        948  

23、0;     52        7.0        390        610        5.8        920        80        7.2        280        720

24、60;       6.0        877        123        7.4        190        810        6.2        815        185     

25、60; 7.6        130        870        6.4        735        265        7.8        85        915        6.6    &

26、#160;   685        315        8.0        53        947        6.8        510        490                   

27、;             表5和6给出了适于pH=710.6范围的两种有机碱缓冲液配制方法，这种有机碱缓冲液可以有效低减缓硅胶基柱的柱效降低。表5 高pH（25）甘氨酸缓冲溶液的配制方法溶液A1：0.2M甘氨酸。15.01g 甘氨酸溶于水中，定容于1L容量瓶中。溶液A2：0.1M NaOH溶液，稀释较浓的NaOH溶液。        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml） 

28、      pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        8.6        25        2.0        9.6        25        11.2     

29、   8.8        25        3.0        9.8        25        13.6        9.0        25        4.4        10.0  

30、0;     25        16.0        9.2        25        6.0        10.4        25        19.3        9.4        25&#

31、160;       8.4        10.6        25        22.75        表6 高pH值（25）Tris缓冲溶液的配制方法溶液A1：0.1M Tris（无碱），12.11g Tris溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M HCl溶液，稀释较浓HCl溶液。        pH      &#

32、160; A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        7.1        50        45.7        8.1      

33、0; 50        26.2        7.2        50        44.7        8.2        50        22.9        7.3        50        43.4        8.3        50        19.9        7.4        50