巴马小型猪糖尿病心肌病模型的建立及鉴定

1、巴马小型猪糖尿病心肌病模型的建立及鉴定目的:探讨静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立巴马小型猪糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy,DCM)模型,确定最佳造模方法,研究构建巴马小型猪糖尿病心肌病模型的代谢特点及心肌病理组织学变化,为今后糖尿病心肌病更广泛领域的研究提供合适的动物模型。方法:实验一：巴马小型猪DCMR佳造模方法的确立及鉴定:选取4-5月龄、体质量为19-25kg的健康雄性广西巴马小型猪12头，一日三次普通饲料喂养,随机分为两组：正常对照组(n=6只);DCM模型组(n=6只)。DCMK型组空腹12h后，一次性耳缘静脉注射STZ150

2、mg/kg。观察两组小型猪一般状况,记录造模前及造模后体重变化及空腹血糖(fastingplasmaglucose,FPG)水平。造模前、造模后6月末及10月末,前腔静脉抽血测定丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)、肌酐(creatinine,Cr)和血尿素氮(bloodureanitrogen,BUN)浓度，造模后6月选取正常对照组及DCM真型组各一头，行胰腺及心肌组织进行HE染色、胰岛B细胞免疫组化染色，造模后10月末全部处死取材，取两组小型猪心肌组织进行HE及MASS

3、ON色。实验二：巴马小型猪DCMPT复制性及特征研究:选取4-5月龄的健康雄性广西巴马小型猪10头,随机分为2组:正常对照组(n=5),DCM模型组(n=5)。DCMK型组空腹12h后，按照实验一的造模方法进行造模。测定并记录两组小型猪造模前基本情况及生化指标,造模后10月末两组小型猪前腔静脉抽血后全部处死取材,检测记录生化指标,应用试剂盒检测小型猪血清氧化应激指标:丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(OrgoteinSuperoxideDismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(glutathioneperoxidase,GSH-PX);Westernblot

4、法检测小型猪心肌组织NF-KBp65、BcL-2、Bax、TGF01表达。造模后10月末两组小型猪心肌取材后行电镜检测。结果:实验一:(1)DCM模型组小型猪均成模,表现出典型的“三多一少”的症状,无死亡及感染。(2)自造模后3天开始，与对照组比较，DCM真型组FPG/K平明显升高并一直维持在较高状态(P(27)0.01);(3)小型猪造模后6月末及10月末,正常对照组体重持续增长，而DCMt型组小型猪体重涨幅并不明显，与DCM真型组比较有差异(P(27)0.01)。(4)STZ造模后6月末，两组小型猪ALTASTBUNCr水平比较无统计学意义(P>0.05),STZ造模后10月

5、末，与正常对照组比较，DCM模型组ASTBUNCr水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。(5)造模后6月末，两组小型猪胰腺及心肌组织HE染色镜下结果显示：DCM奠型组可见胰岛细胞明显减少、胰岛细胞分布紊乱、萎缩,空泡变性等病理表现。胰岛B细胞免疫组化染色结果显示：DCM真型组可见散在数个胰岛细胞团，细胞排列紊乱。心肌组织HE染色结果示：肌纤维排列整齐，分布比较均匀。(6)造模后10月末取心肌组织行HE染色结果显示：DCM真型组小型猪心肌细胞存在不同程度的变性(如空泡变性,水变性等)、坏死及凋亡,局部可见炎症细胞浸润。MASS冰色结果显示：心肌细胞出现水月中、体

6、积变大、月中胀，溶解等现象，纤维化较严重，整体结构极其紊乱，不规则。实验二:(1)DCM模型组4只成模,1只死亡;(2)造模后10月末，与正常对照组小型猪相比，DCM真型组小型猪FPGRALT试剂盒检测血清氧化应激指标结果提水平明显升高(P<0.05,P<0.01);(3)示：与正常对照组比较，DCM真型组小型猪MD给量明显升高，SOD和GSH-PX舌性明显下降(P<0.01);(4)与正常对照组比较，DCM真型组心肌组织NFKB365、BAXTGF01蛋白表达水平明显升高，BCL-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。(5)造模后10月末取心肌组织电镜结果显示:心肌组织可见肌原纤维排列较紊乱、肌原纤维间隙线粒体数量明显减少,心肌组织可见大量空泡变性线粒体。结论：采用大剂量STZ(150mg/