黄藤素片微生物检验方法验证中加菌方法的比较研究

1、    【关键词】  微生物方法验证；抑菌作用；离心法摘要 目的：比较黄藤素片微生物方法验证中的加菌方法不同，所出现的回收率差异。方法：采用离心法薄膜过滤法弃除黄藤素片中的抑菌成分。结果：离心前加入阳性对照菌所得回收率非常低，采用薄膜过滤法的阳性对照菌所得回收率可达70%以上，两者有显著性差异。结论：薄膜过滤法最后一次冲洗加入阳性对照菌仅能说明黄藤素片的抑菌作用可采用离心薄膜过滤法弃除，而不能反映该药品在生产、运输、贮藏过程所污染的微生物。关键词 微生物方法验证；抑菌作用；离心法薄膜过滤法A study on the microbiology

2、verifying test of Huangtengsu tablet with bacterial put in Abstract Objective:To compare the different recovery rates resulted from different methods in putting bacterial in microbiology verifying test of Huangtengsu tablet. Methods: The centrifugalization and membrane filtration were used to get ri

3、d of the components restraining bacterial from Huangtengsu tablet. Results: The recovery rate of the bacterial put into drug before centrifugalization was evidently different from that after the last washing of membance filtration. Conclusions: The result of putting bacterial into drug after membran

4、e filtration may not illustrate some bacterial contaminated in production, transportation and garner.Key words Microbiology verifying test; Bacteriostasis function; The centrifugalization and membrane filtration    2005版中国药典在药品微生物限度检验方法项下增加了方法学验证的内容，特别对有抑菌作用的药品指出可采用离心沉淀集菌法、薄膜过滤法或联合使用这

5、些方法消除抑菌作用，并要求阳性菌的加入方法是最后一次滤膜冲洗时。针对黄藤素片的抑菌情况，笔者采用离心薄膜过滤法消除其抑菌，并就其加入阳性对照菌的方法进行了比较，发现加入阳性对照菌的方法不同，所得到的回收率差异是非常显著的。1  材料和方法1.1  试验材料1.1.1  样品  黄藤素片分别由玉溪维和制药有限公司（批号20040113，样品1）、昆明制药有限公司（批号20040452，样品2）、云南滇池制药有限公司（批号20040701，样品3）提供。1.1.2  稀释剂及培养基  无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）按药典配制，TTC营养

6、琼脂培养基、营养肉汤培养基1均来源于北京三药科技开发公司。1.1.3  阳性对照菌  大肠杆菌CMCC（B）44102、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、白色念珠菌CMCC（F）980011，2，由中国药品生物制品检定所提供。1.2  方法1.2.1  供试品的制备  分别取样10 g，匀浆后加入无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）至100 mL，制成110供试液备用1。1.2.2  阳性菌液制备  取相应菌株的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，培养1820

7、 h后用无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）稀释至相应的浓度1，备用。1.2.3  试验组  分别吸取110约含50100个/mL阳性菌的供试液10 mL，置无菌离心管中，经500 r/min离心5 min后，以无菌操作取上清液1 mL置无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）100 mL中，加入装有直径为50 mm、孔径为（0.45±0.02）m的微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）冲洗滤膜3次，每次50100 mL，取出滤膜，按上述操作分别进行5次，各置5皿，再注入约45 的TTC营养琼脂培养基约15 mL，混匀，37 培养48 h后计数。1

8、.2.4  试验组  分别吸取110供试液10 mL置无菌离心管中，经500 r/min离心5 min后，以无菌操作取上清液1 mL置无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）100 mL中，加入装有直径为50 mm孔径为 (0.45±0.02)m的微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用无菌磷酸盐缓冲液（pH 7.2）冲洗滤膜3次，每次50100 mL，最后一次冲洗时同时加入1 mL约含50100个/mL阳性菌菌液，取出滤膜，按上述操作分别进行5次，各置5皿，再注入约45 的TTC营养琼脂培养基约15 mL，混匀，37 培养48 h后计数。- 28 焦灵利，倪孟祥，陈日，等. 头孢唑林钠联合舒巴坦钠对产酶和非产酶菌的体内抗菌活性J. 中国药师，2000,3(5):26629 Gavalda J, Torres C, Tenorio C, et al. Efficacy of ampicillin plus ceftriaxone in treatment of expeimental endocarditis due to Enterococcus faecalis strains highly resistant to aminoglycosides J. Antimicrob Agents Chemo