常用贮液与溶液.

1、常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（ Spermidine ）:溶解 2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于 - 20。1mol/L 精胺（ Spermine ）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于 - 20。10mol/L 乙酸胺（ ammonium acetate ）：将77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白 (BSA）：加 100mg 的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加

2、入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于- 20。1mol/L二硫苏糖醇（ DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水，分成小份贮存于 - 20。或转移 100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（ potassiumacetate ）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中， 加水定容到 100ml 。1mol/L氯化钾（ KCl）：溶解 7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（ sodium aceta

3、te）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH至 5.2 ，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和 NaOH溶液（ 0.5mol/L ），混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O 和 20g 的 NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES溶于约 90ml 的水中，用 NaOH调 pH（ 6.8-8.2 ），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl ：加 8.6ml 的浓盐酸至91.4ml 的水中。25mg/ml IP

4、GT：溶解 250mg的 IPGT（异丙基硫代 - -D- 半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份贮存于 - 20。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 ·6H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 - 20。20mg/ml 蛋白酶 K（ proteinase K）：将 200mg的蛋白酶L 加入到 9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于- 20。10mg

5、/mlRnase（无 DNase）（ DNase freeRNase）：溶解 10mg的胰蛋白 RNA酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA酶失活。用1mol/L 的Tris HCl 调 pH 至 7.5 ，于 - 20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml 。10N氢氧化钠 （ NaOH）：溶解氢氧化钠完全溶解后用水定容至400g 氢氧化钠颗粒于约1L。0.9L水的烧杯中 （磁力搅拌器搅拌），10 SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移

6、到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（ TCA） : 在装有 500gTCA的试剂瓶中加入100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 X gal （ 5- 溴-4- 氯 -3- 吲哚 - 半乳糖苷）：溶解25mg的 X gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（ DMF） , 用铝箔包裹装液管，贮存于- 20。100×Denhardt 试剂（ Denhardt's regent）成分及终

7、浓度配制 100ml 溶液各成分的用量2g2%聚蔗糖（ Ficoll，400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（2gPVP-40）2%BSA（组分 V）2g水加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于- 20贮存。10×标准 DNA连接酶缓冲液（ standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L贮液100mmol/L MgCl21ml 1mol/L贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L贮液2mmol/L ATP200u

8、l100 mmol/L 贮液5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L贮液0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）0.5ml10 mg/mL贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs贮液， - 80可贮存至少6 个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP贮液10mm

9、ol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP贮液水12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为20聚乙二20g醇50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g固体氯2.5mol/L氯化钠化钠水补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二88.2g水）175.3g3mol/L氯化钠补足 1L水溶解柠檬酸三钠（二水

10、）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH溶液调 pH 为 7.0 ，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC 于 100ml在 15 psi 条件下高压灭菌处理 Tris 缓冲液。水中，使 DEPC的体积分数为 0.1 。在 37温浴至少 12h，然后20min，以使残余的 DEPC失活。 DEPC会与胺起反应， 不可用 DEPC甲酰胺（ deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份

11、，充氮气于- 80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L的磷酸二氢钠 （单碱） 和 1mol/L 磷酸氢二钠 （双碱）贮液，获得所需 pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（ NaH2PO4·H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（ Na2HPO4）贮液 : 溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠1mol/L 磷酸氢二钠（ ml）最终 pH值（ ml）8771236.08501506.18151856.27752256.37352

12、656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制 100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1ml 1mol/LTris-HCl（ pH7.4-8.0，25）1mmol/L EDTA200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0 ）水98.8mlTris 缓冲液（ Tris-HCl buffer）将 121g 的 Tris碱溶解于约0.9L 水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N ），用水调整终体

13、积至 1L。浓盐酸的体积（ ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二 . 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液（一）电泳缓冲液50×Tris - 乙酸（ TAE）缓冲液成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量242g2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸57.1 ml 的冰乙酸（ 17.4 mol/L）100 mmol/L EDTA（pH 8.0 ）200ml 的 0.5 mol/L EDTA水补足 1L5×Tris - 硼酸（ TBE）缓冲液成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量54g445

14、mmol/L Tris碱27.5g硼酸445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA20 ml的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0 ）水补足 1L（二）染料1溴酚蓝（ bromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（ xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到100ml 。10mg/ml 的溴化乙锭（ ethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。（三）

15、凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠300ul 10N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA120ul0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）18聚蔗糖（ 400 型）1.8g0.15 溴甲酚绿15mg0.25 二甲苯青 FF25mg水补足到 10ml6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L

16、EDTA（ pH8.0 ）15聚蔗糖（ 400 型）1.5g水补足到 10ml6×溴酚蓝 / 二甲苯青 / 聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝2.5ml 1溴酚蓝0.25二甲苯青 FF2.5ml 1二甲苯青 FF15聚蔗糖（400 型）1.5g水补足到 10ml6×甘油凝胶上样液（ 4贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）50甘油3ml水3.9ml6&

17、#215;蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝1.5ml 1溴酚蓝0.15二甲苯青 FF1.5ml 1二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）40聚蔗糖4g水补足到 10ml10×十二烷基硫酸钠/ 甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.2 溴酚蓝20mg0.2二甲苯青 FF20mg200 mmol/L EDTA4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)0.1 SDS100ul 10 SDS50甘油5ml水补足到 10ml三 . 常用培养基LB

18、培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH（ 1ml）调整 pH至 7.0 ，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L, 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L 。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加 1ml灭过菌的 1mol/L 氯化镁。SOC培养基成分、 方法同 SOB培养基的配制， 只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml 的小份中加1ml 灭过

19、菌的 1mol/L 氯化镁外， 再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。TB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/LK2HPO4的溶液（ 2.31g 的 KH2PO4和 12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。2×YT 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨16g酵母提

20、取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH（ 1ml）调整 pH至 7.0 ，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L, 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L 。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨酸，因为 YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四 . 常用抗生素氨苄青霉素（ ampicillin）（ 100mg/ml ）溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于- 20贮存。常以25ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（ carbenicillin）（ 50mg/ml）溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于- 20贮存。常以 2