DNA定量分析用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查探讨

1、DNA定量分析用于宫颈癌及癌前病变的早期筛查探讨         08-04-14 16:50:00     编辑：studa20                 作者：张薇，刘玉华，易细容，周单华 【摘要】  目的 探讨用DNA定量分析和常规细胞学相结合方法而诊断宫颈癌及癌前病变。方法 对3266名妇女用宫

2、颈刷取材，每例液基薄层制片2张，1张巴氏染色做常规细胞学检查，1张Feulgan DNA染色用全自动DNA倍体分析系统做DNA定量测定。常规细胞学和DNA倍体分析系统可疑的妇女在阴道镜下行宫颈组织学活检。结果 3266例宫颈癌标本中，常规细胞学发现42例非典型鳞状上皮（ASCUS），9例低级别鳞状上皮内病变（LSIL）及1例高级别鳞状上皮内病变（HSIL）。DNA倍体分析发现3个或3个以上5C细胞的35例。32例活检病例中有14例宫颈上皮内瘤变2（CIN2）或CIN2以上级别改变，这14例细胞标本中均可见DNA倍体异常，而常规细胞学发现1例正常，8例ASCUS，4例LSIL和1例HSIL。结论

3、 DNA倍体分析与常规细胞学相结合方法可提高宫颈癌及癌前病变的阳性率。 【关键词】  宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤变    Screening for Early Cervical Cancer and Precancerous Cervical Lesions by DNA Ploid Analysis    Abstract: Purpose To explore the diagnosis for cervical cancer and precancerous cervical lesions by DNA ploid a

4、nalysis combined with cytology. Methods A total of 3266 cervical samples were obtained by cervix brush. Cell monolayers were prepared by a liquid based sample preparation. Two slides were prepared from each case: one slide was stained by Papanicolaou stain for conventional cytology examination, whil

5、e the other slide was stained by Feulgen-Thionin method to measure relative amount of DNA in cell nuclei using an automated DNA imaging cytometer. Women suspected by cytology and DNA ploid underwent a colposcope examination and biopsy. Results Forty-two cases proved atypical squamous cells of 

6、undermined significance (ASCUS) by cytology; 9 cases, low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL); and 1 case, high-grade squamous intraepithelial lesion(HISL) were found, while DNA ploid analysis found 35 cases having 3 or more cells with DNA greater than 5C in a total of 3266 women. Fourteen

7、cases with cervical intraepithelial neoplasia 2(CIN2 or over） out of 32 biopsies were diagnosed as 1 case, normal; 8 cases, ASCUS; 4 cases, LSIL and 1 case, HSIL by cytology. However all 14 cases were determined aneuploid cells by a DNA image cytometry. Conclusion Combination of DNA ploid analysis a

8、nd cytology can increase positive rate of detection for cervical cancer and precancerous cervical lesions.    Key words：DNA ploid; cytology; cervical neoplasms; cervical intraepithelial neoplasia    宫颈癌是妇科高发的恶性肿瘤之一，宫颈癌及癌前病变的早期筛查与早期治疗是防治宫颈癌的主要手段。宫颈细胞学检查简便、可靠，是目前推行最广、最有成效

9、的防癌筛查方法。但在传统的宫颈细胞学检查过程中可出现：取材时细胞丢失和制片时涂片质量差、人眼工作疲劳等问题，往往会影响细胞病理学医生的正确诊断而导致较高的假阴性。近年来，我们采用宫颈刷取材，液基薄层制片，有经验的细胞学医生与全自动DNA图像分析系统相联合，力求把宫颈癌及癌前病变的漏诊率降低到最低限度。目前，DNA倍体分析系统进行宫颈癌前病变的诊断及预测在国内外已有大量报道13。在北美及欧洲细胞DNA定量分析诊断方法已是一种常见临床检测方法之一4，5。本研究主要探讨用宫颈常规细胞学结合全自动DNA图像分析系统诊断宫颈癌及癌前病变。    1  

10、材料与方法    2005年10月至2006年5月，3 266名妇女在本院进行宫颈癌筛查。参与检查妇女的年龄多数在2262岁。宫颈癌普查试剂盒由武汉兰丁肿瘤早期诊断检测中心提供，其中包括：宫颈刷、盛有固定液的标本管、标签、申请单等。    1.1   取   材    妇科医生在阴道扩张器直视下，手持宫颈刷的刷柄，通过扩阴器，将刷头中央较长的刷丝从子宫颈外口插入子宫颈管内（约8mm）处，周边刷丝顶部抵触于子宫颈黏膜面，顺时针或逆时针旋转35圈，取出宫颈刷后，用镊子夹

11、紧刷头底座，拔脱刷头，将刷尖向下垂直方向浸泡在样本收集管固定液内，旋紧管盖后震荡摇晃，然后将贴上标签的标本管送到细胞实验室制片。    1.2   液基薄层制片及染色    将装有固定液和刷头的标本收集管，经化学和物理处理，每例制成2张薄层细胞学片。其中1张巴氏染色做常规细胞学诊断，另外1张Feulgen DNA染色做DNA定量测定。    1.3   细胞学诊断    所有巴氏染色片经有经验的细胞病理医生读片。根据Bethesda诊断

12、分为5组：正常或良性；不明意义的非典型鳞状上皮(typical squamous cells of  undermined significance，ASCUS)；低级别鳞状上皮内病变(low?鄄grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)；高级别鳞状上皮内病变(high?鄄grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)或原位癌(carcinoma in sita，CIS)；鳞状上皮浸润癌。    1.4   细胞DNA定量分析  &

13、#160; 所有Feulgen染色片用AcCell全自动细胞图像分析系统进行扫描处理6，7，该系统已达到欧洲定量细胞病理学会所制定的有关DNA定量分析图像系统的各项标准8。一般情况下，AcCell系统对每张玻片上6 000个以上的细胞核进行扫描测定。经扫描后的每个细胞核均有128个特征值，其中包括形态特征、吸光特征、具体结构特征、Markovian和非Markovian结构特征和长度特征等。AcCell系统根据不同细胞成分所具有的不同特征参数来完成自动细胞分类和计数过程，如正常上皮细胞，增生或癌变细胞，淋巴细胞，中性白细胞及未参与诊断的垃圾细胞（重叠细胞核，聚焦不良细胞核和核碎片等）。标准对照

14、细胞为同张玻片上的100个正常上皮细胞，所测出的平均光密度(intergrated optical density，IOD)为2C的参考值，其CV（coefficient of variantion）值5%。如果出现以下三种情况就诊断异常：出现5C（DNA指数2.5）非整倍细胞。4C细胞数超过被测细胞总数的10%。出现非整倍体细胞峰。    凡是有DNA指数2.5以上细胞的玻片，都要通过细胞技术员在显微镜下逐一对DNA指数2.5细胞进行核实，以排除AcCell系统将垃圾和重叠的细胞核误认为癌细胞或异常细胞。    1.5   结