乳糖操纵子简介

1、操纵子（operon)：很多功能相关的结构基因串联排列在染色体上，由一个共同的控制区来操纵这些基因的表达，包含这些结构基因和控制区的整个核苷酸序列就称为操纵子。 乳糖操纵子 § 三个特异性序列：§ 操纵序列 O (operator): 阻遏蛋白结合位点。§ 启动子 P (promoter): 位于结构基因的上游。§ CAP结合位点：环cAMP受体蛋白(分解代谢物激活蛋白)结合位点。§ 一个调节基因l lac I：编码阻遏蛋白，能结合于操纵序列位点。操纵子的组成： § -结构基因(structural gene, SG) ：操纵元中被调

2、控的编码蛋白质的基因 § -启动子(promoter，P)：是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。 § -操纵基因(operator，O)：是指能被调控蛋白特异性结合的一段DNA序列。§ 阻遏物基因(inhibitor,I),产生阻遏物(repressor)。结构基因 Z编码-半乳糖苷酶：将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。 Y编码-半乳糖苷透过酶：使外界的-半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。 A编码-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基转到-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。当一个mRNA含有编码一个以上蛋白质的编码信息

3、，而且这些蛋白质都是以独立的多肽被翻译时，这样的mRNA称之多顺反子mRNA。§ 多顺反子mRNA在细菌中是很普遍的。§ 多顺反子lac mRNA中的lacZ，lacY，lacA经翻译生成的产物分别生成代谢分解乳糖的三种酶§ 始终存在着一定的比例关系( Z : Y : A = 5 : 2 : 1 )§ lacZ、Y、A基因的转录是由lacI基因指令合成的阻遏蛋白R所控制。lacI一般和结构基因相毗连，但它本身具有自己的启动子和终止子，成为独立的转录单位。§ 由于lacI的产物是可溶性蛋白，按照理说是无需位于结构基因的附近。它是能够分散到各处或结

4、合到分散的DNA位点上。阻遏蛋白的负调节(negative control of repressor)§ 无乳糖(no lactose): lac操纵元处于阻遏状态(repression)§ 有乳糖(presence of lactose)：lac操纵元即可被诱导(derepression,induction)§ 诱导剂(inducer): 别乳糖、半乳糖、IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）为什么选用IPTG作诱导物？§ 能诱导酶的合成，但又不被分解的分子,称为安慰诱导物（gratuitous inducer）。§ 由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随

5、之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。 § X-gal（5-溴-4-录-3-吲哚-半乳糖苷）也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作 半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。 § 某些诱导物与自然的-半乳糖苷酶相似，且不能被酶分解，比如异丙基-D-硫代半乳糖苷，（isopropylthiogalactoside,IPTG）。不被细菌分解性质稳定，它的浓度在实验中不会改变。 § 复杂的动力学问题，便于研究。§ IPTG能在缺乏lacY基因

6、下而有效地被运送。§ 半乳糖苷键中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同，IPTG虽不为-半乳糖苷酶所识别，但它是lac基因簇十分有效的诱导物。乳糖操纵子的CAP正调控（Positive Control of CAP）§ CAP(catabolite activator protein) -分解代谢基因激活蛋白,又称为 CRP (cAMP receptor protein), lac operon高水平转录必需的一个激活蛋白。§ CAP(同二聚体),含DNA结合区 以二聚体的方式与特定的DNA序列结合, cAMP结合区与

7、cAMP特异结合，并发生空间构象的变化,形成cAMP-CAP复合物（有活性）当CAP与CAP结合位点这段序列结合时，可激活RNA转录酶活性，使之提高50X 葡萄糖 降解产物 ATP cAMP 5AMPCRP（非活性状态） CAP（活性状态）无葡萄糖，cAMP浓度高时促进转录, 有葡萄糖，cAMP浓度低时不促进转录葡萄糖效应：当细菌在含有葡萄糖套和乳糖的培养基中生长时，通常优先利用葡萄糖。只有当葡萄糖消耗完，经过一段停滞期，在乳糖的诱导下半乳糖苷酶开始合成，细菌才能充分利用乳糖。葡萄糖的降解物能抑制腺苷酸环化酶活性，并活化磷酸二脂酶，因而降低 cAMP的浓度。所以葡萄糖存在时，cAMP浓度低；仅

8、在葡萄糖消耗完毕时, cAMP浓度增高，CAP-cAMP 复合物形成（结合于lac operon CAP结合位点)，才会促进转录。乳糖操纵子的协调调控(coordinate regulation)§ 由于Plac是弱启动子，单纯因乳糖的存在发生去阻遏使lac操纵元转录开放，还不能使细菌很好利用乳糖，必需同时有CAP来加强转录活性，细菌才能合成足够的酶来利用乳糖。§ 关键条件：lac操纵元的强诱导既需要有乳糖的存在又需要没有葡萄糖可供利用。Lac操纵子基因表达受阻遏蛋白和CAP的双重调控§ 负调节与正调节协调合作Ø 阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用Ø 如没有CAP加强转录，即使阻遏蛋白R从P上解聚仍无强大转录活性 葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌优先利用葡萄糖Ø 葡萄糖可降低cAMP浓度，阻碍其与CAP结合从而抑制转录本底表达§ 在细胞中透性酶等总是以最低量存在着，足以供给底物开始进入时的需要。也就是说，操纵子有一个本底水平（basal level）的表达，即使没有诱导物的存在，也保持此表达水平（诱导水