激光扫描共聚焦显微镜技术讲座

1、编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑pptHippocampus neurons expressing GFP编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt荧光显微镜LSCM编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑pptNoImage激光扫描共聚焦显微镜荧光显微镜编辑ppt激光扫描共聚焦显微镜中常见的激光器激光扫描共聚焦显微镜中常见的激光器 Ar激光器激光器: 458nm, 476nm, 488nm, 514nm HeNe : 543nm,633nm 固体固体激光器激光器(UV): 405nm激光器的特点激光器的特点: 1) 方

2、向性好方向性好: 激光基本延直线传播激光基本延直线传播 2) 单色性好单色性好 :=10-8nm 3) 高亮度高亮度: 激光方向性好激光方向性好, 其在空间上的能量分布是高其在空间上的能量分布是高 度集中的。度集中的。 4) 偏振性偏振性: 激光为平面偏振光激光为平面偏振光, 光纤耦合光纤耦合编辑pptLeica DM IRBE 倒置荧光显微镜编辑ppt编辑pptLSCM物镜的重要参数 NA编辑ppt编辑ppt编辑ppt 4x 20 x 10 x 40 x 60 x 100 x 编辑ppt编辑ppt编辑ppt分析软件控制软件+编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt图1. 共聚焦显微镜简化原理

3、图 用于激发荧光的激光束用于激发荧光的激光束(Laser)透过入射小孔透过入射小孔(light source pinhole)被二向色镜被二向色镜(Dichroic mirror)反射，通过显微物镜反射，通过显微物镜(Objective lens)汇聚后入射于待观察的标本汇聚后入射于待观察的标本(specimen)内部焦点内部焦点(focal point)处。激光照射所产生的荧光处。激光照射所产生的荧光(fluorescence light)和少和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于波

4、长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔(Detection pinhole)到达光电探测器到达光电探测器(Detector)（通常是光电倍增管（通常是光电倍增管（PMT）或是雪崩光电二极管（）或是雪崩光电二极管（APD），变成电），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。不会被探测到。编辑ppt共轭编辑ppt普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜的区别普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜的区别编辑pptZXYXY平面编辑pptOptica

5、l sections collected simultaneously at three different excitation wavelengths (488, 568, and 647 nanometers). The specimen is the fruit fly third instar wing imaginal disk. XYXY平面编辑pptXYXY平面timeTime-lapse imaging of a living fruit fly embryo injected with calcium green is presented in Figure 2. The

6、series of images shows the change in distribution of the fluorescent probe over time. 0 s10 s20 s30 s编辑pptPeripheral nervous system of a fruit fly embryo ZXYXY平面编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑ppt编辑pptXenopus oocytes编辑pptCalcium green用细胞内液稀释Calcium green导入微注射器以20nL/oocyte注射卵母细胞18C避光放置40分钟共聚焦显微镜观察编辑ppt编辑ppt编辑pptHEK293 cells expressing PLC-PH-GFPPLC-PH-GFP + H1 receptor LipofactAMINE2000 混合20分钟混合物孵育细胞 4-6小时