实验1.2培养基的配制(2016)

1、微生物重点实验微生物重点实验1 1实验实验1.2 1.2 培养基的配制培养基的配制 学习目标：学习目标：掌握培养基的配制的过程掌握培养基的配制的过程理解无菌操作理解无菌操作组内合作：组内合作：1 1、说出培养基配制流程；、说出培养基配制流程；2 2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用灭菌方法。灭菌方法。1、计计算算23、熔熔化化4、灭菌1.05kg/cm2、121，1530min灭菌锅灭菌锅（补补充：充：倒倒超净工作台超净工作台约约50防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污

2、染培养基 称量称量 熔化熔化 灭菌灭菌 调节调节pH 分装分装加热熔化琼加热熔化琼脂（搅拌）脂（搅拌）倒入三角烧瓶，与倒入三角烧瓶，与其他器具一起放入其他器具一起放入灭菌锅灭菌锅高压灭菌高压灭菌定容定容调节调节PH至至7.2-7.4计算计算恒温培养恒温培养超净工作台超净工作台超净工作台、酒精灯火焰旁操作超净工作台、酒精灯火焰旁操作1 1、如何检验培养基是无菌的？、如何检验培养基是无菌的？2 2、常用灭菌方法有哪些？、常用灭菌方法有哪些？将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条件下培养件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基，如果无菌落产生，则培养基是无菌的

3、。是无菌的。高压（蒸气）灭菌高压（蒸气）灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌用于培养基、培养皿、锥形瓶等用于培养基、培养皿、锥形瓶等用于用于接种环接种环等金属器具等金属器具3 3、消毒与灭菌的区别、消毒与灭菌的区别（1 1）消毒（如巴氏消毒法）消毒（如巴氏消毒法6262，30min30min、酒精、酒精擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。（2 2）灭菌（高压灭菌）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm21.05kg/cm2、121121、15-15-30min30min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微生物及其芽孢。生物及其芽孢。微生

4、物重点实验微生物重点实验2 2微生物的培养微生物的培养掌握划线法接种方法与作用单个单个菌体菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。颜色、硬度、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定义：定义：补充：菌落补充：菌落鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体菌落是由单个细胞分裂形成的菌落是由单个细胞分裂形成的种群种群常用工具图示接种环接种环玻璃刮铲玻璃刮铲微生物（如大肠杆菌）的培养：微生物（如大肠杆菌）的培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3

5、.熔化熔化4.4.调节调节pHpH5.5.分装分装6.6.灭菌灭菌 7.7.恒温培养恒温培养二二. .大肠杆菌的培养：大肠杆菌的培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基培养大肠杆菌：培养大肠杆菌： （超净工作台上、酒精灯火焰旁进行）（超净工作台上、酒精灯火焰旁进行）菌种菌种1.1.接种：接种：接种环接种环划线法划线法接种接种冷却后刮取菌苔冷却后刮取菌苔划线法接种：划线法接种：使接种物逐渐使接种物逐渐稀释，培养后稀释，培养后出现出现枯草杆菌菌落枯草杆菌菌落菌落灰白色，较菌落灰白色，较大，边缘比较粗大，边缘比较粗糙糙大肠杆菌菌落大肠杆菌菌落菌落灰白色，圆形，透明或半透菌落灰白色，

6、圆形，透明或半透明明滕黄八叠球菌菌落滕黄八叠球菌菌落菌落黄色，圆形、边缘菌落黄色，圆形、边缘光滑光滑为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上的微生物污染培养物的微生物污染培养物杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时接

7、种物逐渐稀释，培数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培养后得到单个菌落。养后得到单个菌落。避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。划线法划线法二二. .大肠杆菌的培养：大肠杆菌的培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基培养大肠杆菌：培养大肠杆菌：1.1.接种：接种：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的平板的平板倒置倒置放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养2 23d3dQ Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？：为什么划线法接种能观察到单个菌落？划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后出现单个细菌，

8、培养后出现单个菌落。出现单个细菌，培养后出现单个菌落。划线划线划线法优点：划线法优点：可对微生物进行分离、纯化，可对微生物进行分离、纯化，获获得单一菌落得单一菌落1 1、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（ ）A.A.将未接种的培养基放在实验桌上培养将未接种的培养基放在实验桌上培养B.B.将未接种的培养基放在窗台上培养将未接种的培养基放在窗台上培养C.C.将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养D.D.将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养C2 2、要将配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方、要将

9、配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方法是（法是（ ）A.A.灼烧灭菌灼烧灭菌 B. B.高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌C.C.干热灭菌干热灭菌 D. D.煮沸灭菌煮沸灭菌BB3 3、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（ ）A.A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.B.消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的C.C.接种环用灼烧法灭菌接种环用灼烧法灭菌D.D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭菌等菌等 4 4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、培