中华仓鼠卵巢细胞cmp-唾液酸转运体基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达

1、病原生物学专业毕业论文 精品论文 中华仓鼠卵巢细胞CMP-唾液酸转运体基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达关键词：中华仓鼠 卵巢细胞 唾液酸转运体 基因克隆 基因表达 大肠埃希菌摘要：目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-

2、T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序

3、结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。正文内容 目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产

4、物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-

5、sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的C

6、MP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且

7、28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子

8、生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在I

9、PTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42

10、a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。

11、 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3

12、.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大

13、肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见

14、1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese

15、 Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖

16、凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白

17、表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP

18、/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列

19、完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.

20、RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR

21、是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transpo

22、rter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的

23、RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的条带，大小与报道的CMP-sat基因的理论报道大小相符，说明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR扩增到了特异的目的基因片段。 3.构建的CMP/pMD18-T克隆载体中目的基因片段的测序结果与Genbank公布的中华仓鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重组的表达质粒CMP/pET42a在IPTG诱导下表达的蛋白质经SDS-PAGE电泳显示有清晰的蛋白表达条带，相对分子量约为36.4kD。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的38.5。 结论： 利用分子生物学技术成功实现CHO细胞CMP-sat基因的克隆及在大肠埃希菌

24、中的表达。目的： 将中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)细胞的CMP-唾液酸转运体(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因进行克隆，并在大肠埃希菌中表达，为今后进一步研究该基因及其表达产物的作用奠定基础。 方法： 1.在CHO细胞中提取总RNA。 2.RT-PCR扩增CHO细胞的CMP-sat基因。 3.构建CMP-sat基因的克隆载体CMP/pMD18-T并测序鉴定。 4.构建CMP-sat基因表达质粒CMP/pET42a。 5.将CMP/pET42a在IPTG诱导下进行目的基因表达，表达产物进行SDS-PAGE鉴定。 结果： 1.在CHO细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测清晰可见18S和28S RNA带，且28S带的亮度是18S带亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR产物和PCR产物经琼脂糖凝胶电泳可见1条1000bp左右的