药物定量分析与分析方法验证

1、不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法含卤素有机药物的分析含卤素有机药物的分析 含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐结构特点：结构特点：CX卤原子的活泼性卤原子的活泼性1. 1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系和它直接相连的烃基的结构有很大关系乙烯型卤和芳卤乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼CH2CH XX

2、烯丙型卤和苄卤烯丙型卤和苄卤 活泼活泼CH2XCH2CH CH2X（3 3）卤代烷型）卤代烷型 介于两者之间介于两者之间CH2CH (CH2)nX n2分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多，活泼性分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显含卤素有机药物的分析含卤素有机药物的分析XXC适当的处理直接回流后测定法直接回流后测定法碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法氧瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法CCl

3、3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010 12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 取本品约取本品约0.4g，精密称定，精密称定，加氢氧化钠溶液加氢氧化钠溶液30ml与锌粉与锌粉1.0g，加热回流，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤水洗涤，滤过

4、，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴，滴，用硝酸银滴定液用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2ONaClHClOClCNaOH2 溶液点燃适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分

5、析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析 一、容量分析法一、容量分析法 （一）容量分析法的特点（一）容量分析法的特点 操作简单、快速；操作简单、快速； 比较准确（比较准确（RSDRSD0.5%0.5%）；）； 仪器普通易得。仪器普通易得。1. 1. 滴定度（滴定度（T T）的概念）的概念 每每1ml1ml滴定液相当于被测物质的量滴定液相当于被测物质的量(mg)(mg)2. 2. 滴定度的计算滴定度的计算 aAaA + + bBbB cCcC + + dDdD T T = = M Ma/ba/bB B3. 3. 百分含量的计算（原料药）百分含

6、量的计算（原料药） （1 1）直接滴定法）直接滴定法 D% = D% = V V F F T/WT/W 100%100% F F = = 实际标定的浓度实际标定的浓度/ /规定的浓度规定的浓度 （二）容量分析法的计算问题（二）容量分析法的计算问题（2）剩余滴定法 %mFVVTs ）（百百分分含含量量T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）F浓度校正因子 ms供试品的质量 片剂含量测定结果的计算 %100/%100%片）标示量（）平均片重（）供试品重（）测得量（标示量每片含量标示量gggg%100%标示量平

7、均片重标示量smTVF烟酸片含量测定烟酸片含量测定 取本品10片片,精密称定为3.5840g,研细,精密称取0.3729g,置100 mL锥形瓶中,置水浴加热溶解后,放冷.加酚酞指示剂3滴,用氢氧化钠滴定液（0.1005mol/L),滴定至粉红色,消耗25.02 mL.每1mL氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当12.31mg的烟酸. 求供试品中烟酸的标示百分含量（标示量0.3g/片）标示量标示量%=V T F 平均片重平均片重W 标示量标示量100 %=25.02 12.31/1000 0.1005/0.10.35840.3729 0.3= 99.17%100 % 二、光谱分析法二、光谱分

8、析法 （一）紫外（一）紫外- -可见分光光度法（可见分光光度法（200nm200nm760nm)760nm) 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）为）为2% 5%5% 仪器价格低廉操作简单，易普及，应用广仪器价格低廉操作简单，易普及，应用广 2. 2. 定量：朗伯定量：朗伯- -比耳定律比耳定律 A = EA = E1%1%1 1cmcmCL CL 3. 3. 仪器校正和检定仪器校正和检定 波长校正波长校正用汞灯中较强谱线用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,237.38,253.65

9、,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与与576.96nm576.96nm 或用仪器中氘灯的或用仪器中氘灯的486.02nm486.02nm与与656.10nm656.10nm进行校正。进行校正。 吸收度吸收度的检定：用的检定：用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液至液至1000ml1000ml 波长波长(nm) 235(nm) 235(最小

10、最小) 257() 257(最大最大) 313() 313(最小最小) 350() 350(最大最大) ) E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5 144.0 48.62 106.6 杂散光杂散光检查：检查： 试剂试剂 浓度浓度(g/ml) (g/ml) 测定波长测定波长 透光率透光率(%)(%) NaINaI 1.00 220nm 1.00 220nm 0.80.8 NaNONaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.80.8 4. 4. 对溶剂的要求对溶剂的要求: : 220 220240nm 241240nm 2412

11、50nm 251250nm 251300nm 300nm 300nm300nm以上以上 溶剂溶剂+吸收池吸收池A 0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.10 0.050.05 5. 5. 测定方法测定方法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7 对照品比较法：对照品比较法：C Cx x=(=(A Ax x/ /A Ar r) )C Cr r; ; 含量含量%=%=C Cx xD/WD/W100 100 % % 常用方法常用方法 吸收系数法：吸收系数法： 含量含量%= (%= (E E1%1%1 1cmcm ) )x x/(/(E E1%1%1

12、 1cmcm ) )r r 100 %100 % 计算分光光度法：计算分光光度法：V VA A的三点校正法的三点校正法 比色法比色法定量计算方法（1）对照法 对供对供对供对供对供对供AAccccAAlcElcEAA%1cm1%1cm1（2）吸收系数法 100)g/ml()g/100ml(1%1cm1%1cm%1cm1lEAclEAcclEA%mVnlEAs%cm 百分含量百分含量 （二）荧光分光光度法（二）荧光分光光度法 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在低浓度进行测定，防止在低浓度进行测定，防止F与与C不成正比及自熄灭作用不成正比及自熄灭作用 1. 特点特

13、点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰因素多。灵敏度高，但干扰因素多。 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。 用样品量少。用样品量少。 2. 荧光分析仪荧光分析仪 有二个单色光器有二个单色光器激发单色光器与发射单色光激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3. 含量测定含量测定 常用的方法对照品比较法常用的方法对照品比较法: Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) Cr Ch.P收载收载地高辛片、利血平片、洋

14、地黄毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。 三、色谱分析法三、色谱分析法 按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类方法分类 按分离方法分为：按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC，HPLC。 （一）（一）HPLC法法 1. 对对HPLC仪器一般要求仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱、流动相按品种项下要求。 色谱柱的理论板数：色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系统性试验系统性试验 分离度：分离度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 重复性

15、：重复性：RSD2% 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在应在0.95 1.05 正常峰和不正常峰如何判断？ 用拖尾因子（对称因子）：T T= W0.05h/2AT：0.95 1.05 对称峰 1.05 拖尾峰1.5c内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质siisAAmm和测混匀进样过程：校正因子（f）=AS/CSAR/CR含量（CX）=fAS/CSAX第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示 （一）含量

16、测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1. 原料药原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度（具体做法：测定高、中、低三个浓度（n=3）, 共共9个数据来评个数据来评价，回收率的价，回收率的RSD2%；用；用UV和和HPLC法时，一般回收率

17、可达法时，一般回收率可达98%102%；容量法可达；容量法可达99.7%100.3% 二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的接近程度。之间的接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 2. 标准偏差（标准偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2 3. 相对标准差相对标准差(relative standard deviation, RSD)

18、 RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/X 100%（二）重复性、中间精密度及重现性（二）重复性、中间精密度及重现性 1. 重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度由一个分析人员测定所得结果的精密度. 2. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。同设备测定结果的精密度。 3. 重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。 三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等

19、如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，可能存在下， 采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。查、含量测定方法，均应考察其专属性。 （一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应。的样品均应呈现负反应。 （二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。 图中应注明各组分的位置，色谱法中分

20、离度应符合要求。在能图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。 四、检测限四、检测限 是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。指标。它无需测定，只要指出高

21、于或低于该规定的浓度或量即可。 （一）常用的方法（一）常用的方法 1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。检测出的最低浓度或量。 2.2.仪器分析方法仪器分析方法 GCGC和和HPLCHPLC法：法： LODLOD = = S S/ /N N = 2 = 2或或3 3 五、定量限五、定量限 是指样品中是指样品中被测物能被定量测定的最低量，被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求

22、 LOQLOQ. . 常用信噪比法确定定量限，一般以常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10S/N=10时，相应的浓度时，相应的浓度进行测定。进行测定。 六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度。呈正比关系的程度。 UVUV法：首先制备一个标准系列，浓度点法：首先制备一个标准系列，浓度点n =5; A = 0.3n =5; A = 0.30.70.7 建立回归方程建立回归方程C = C = aAaA + b ;r + b ;r 0.9990.999。 HPLCHPLC法：制备一个标准系列，浓度点法：制备一个标准系列，浓度点n =5 n =5 7; 7; 以以C C对对h h或或A A或与或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程内标物的峰面积之比，建立回归方程r r0.9990.999。 七、范围七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或