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文档简介

1、AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism）扩增片段长度多态性原理：此技术是建立在基因组限制性片段基础上的PCR 扩增。由于不同物种的基因组DNA 大小不同,基因组DNA 经限制性内切酶酶切后,产生分子量大小不同的限制性片段。使用特定的双链接头与酶切DNA 片段连接作为扩增反应的模板,用含有选择性碱基的引物对摸板DNA 进行扩增,选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性,只有那些限制性位点侧翼的核苷酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段才可被扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后根据凝胶上DNA 指纹的有无来检出多态

2、性。原理示意图：(1)(2).(3).(4).(5).(6).(7).技术路线：AFLP的缺点：此技术受到专利保护，应用受到限制，试剂盒价格昂贵。另外，操作中通常要利用同位素标记，对样品DNA质量要求严格。如今,在AFLP技术的基础上又发展了一种新的分子标记TE2AFLP(三内切酶扩增的限制片段长度多态性, three endonuclease amplified fragment length polymorphism) . 该技术是由荷兰科学家Vander Wurff 等在2000 年末发表的. TE2AFLP也是首先扩增限制性内切酶片段,然后在高分辨率凝胶(通常为序列分析胶) 上电泳分离这些扩增的片段,再根据这些片段的长度来检测DNA多态性。 与AFLP不同的是要用2 种低频率切点内切酶和1 种高频率切点内切酶混合酶切基因组DNA. TE2AFLP保留和发展了AFLP的优点,克服了AF

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