蛋白质及核酸的含量测定方法_第1页
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文档简介

1、整理ppt1蛋白质及核酸的含量测定方法整理ppt2 蛋白质(protein)是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。因此,它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。 核酸是许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。整理ppt3蛋白质 目前常用的方法有凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford)。整理ppt4凯氏定氮法_原理蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化,使蛋白质分解,产生

2、的氨与硫酸结合生成硫酸铵,留在消化液中,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再用盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外,还含有其它含氮物质,所以此蛋白质称为粗蛋白。整理ppt5三、仪器与试剂(一)试剂一)试剂1、硫酸铜(、硫酸铜(CuSO45H20) 2、硫酸钾、硫酸钾3、硫酸(密度为、硫酸(密度为1.8419g/L)4、硼酸溶液(、硼酸溶液(20g/L)5、氢氧化钠溶液(、氢氧化钠溶液(400g/L)6、0.01mol/L盐酸标准滴盐酸标准滴定溶液。定溶液。7、混合指示试剂:、混合指示试剂:0.1%甲甲基红乙溶液液基红乙溶液液1份,与份,与

3、0.1%溴甲酚绿乙醇溶液溴甲酚绿乙醇溶液5份临用份临用时混合。时混合。整理ppt6反应机理 (二)仪器二)仪器微量定氮蒸馏装置:如图所微量定氮蒸馏装置:如图所示。示。1、电炉;、电炉; 2、水蒸气发生、水蒸气发生器(器(2L平底烧瓶);平底烧瓶);3、螺、螺旋夹旋夹a;4、小漏斗及棒状玻璃、小漏斗及棒状玻璃塞(样品入口处);塞(样品入口处);5、反、反应室;应室;6、反应室外层;、反应室外层;7、橡皮管及螺旋夹、橡皮管及螺旋夹b;8、冷凝管;、冷凝管;9、蒸馏液接收、蒸馏液接收瓶。瓶。整理ppt7核酸 核酸测定常用方法有定磷法、定糖法、紫外吸收法。整理ppt8【实验原理】 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光,RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下,每1ml含1g RNA溶液的光吸收值为0.0220.024,每1m1含1g DNA溶液的光吸收值约为0.020,故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。 整理ppt9仪器及试剂1.实验器材 离心机, 离心管,紫外分光光度计; 2.实验试剂 (1)钼酸氨高氯酸试剂(沉淀剂):如配制200ml,可在193ml蒸馏水中加入7ml高氯酸和

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