工业用酶制剂测定技术导则国家标准简要编制说明

1、.工业用酶制剂测定技术导则简要编制说明一、工作简况（一）任务来源、起草单位、起草人本标准由中国食品发酵工业研究院组织上报，被国家标准化管理委员会列入2013年第二批国家标准制修订计划，计划编号为20131227-T-469。全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分委会（TC64/SC5）提出并归口。该标准项目属于国家质检公益性行业科研专项生物制造标准体系建设规划及重要标准研究与制定的研究内容之一。本标准主要起草单位略。本标准主要起草人略。负责标准技术资料查询、收集及对比，检测方法的验证比对，样品检测及数据整理，标准文本及编制说明的起草、撰写，行业内征求意见，组织标准的初审讨论会及标准报送等。（二

2、）简要起草过程标准任务下达后，中国食品发酵工业研究院于2014年初，启动开展工业用酶制剂测定技术导则国家标准的起草工作，成立标准起草工作组，收集国内外的同类标准及相关资料，组织召开标准研讨会，形成了工业用酶制剂测定技术导则标准文本（第一稿）。接下来，按照具体工作时间和进度，2014年10月，按照参与标准起草单位的讨论意见，整理出工业用酶制剂测定技术导则标准文本（第二稿），向各参与标准起草单位征集标准意见和建议。根据反馈情况，2015年9月，中国食品发酵工业研究院组织工业用酶制剂测定技术导则标准文本（第二稿）讨论，针对标准中的一些关键性问题达成一致意见，形成工业用酶制剂测定技术导则征求意见稿，向

3、行业内公开征求意见。二、对主要条款的说明1. 范围本标准规定了工业用酶制剂的测定指标分类、酶活力测定导则及标准方法的实施与评价导则，适用于标准中工业用酶制剂产品的测定方法建立、实施及评价的指导。2. 术语和定义本标准参考GB 25594-2010食品安全国家标准 食品工业用酶制剂，规定了“工业用酶制剂”的定义，同时考虑酶制剂测定的关键性指标“酶活力”，对其也进行了解释说明。3. 测定指标分类作为工业化的酶制剂产品，无论是研发、生产还是使用，都需要确认酶的存在及酶的含量，所谓酶的存在即能够催化产生特定的反应；所谓酶的含量不同于一般含量概念，无法与酶作为具有蛋白质特性而得到的质量或体积指标对等，而

4、是通过酶催化某一特定反应的能力来间接表示出酶含量的多少，这种催化反应的能力即命名为酶活力。酶活力的大小一般用酶在一定条件下所催化的一定化学反应的反应速度来表示。同时，随着酶制剂应用领域的不断拓宽，客户需求的不断增多，酶制剂企业会根据产品的实际应用条件，设计专门的制剂产品满足客户需求。因此，随着标准法规的健全以及酶制剂新品种的不断开发，容重、细度、pH等指标已经失去作为质量指标的存在意义，不再作为酶制剂质量评价及酶制剂识别的考察指标。综上所述，酶活力作为酶制剂产品一个特征性的专属质量指标的表达，是酶制剂分离、纯化，研究酶的特性，生产和应用酶时必不可少的指标。因此，依据工业用酶制剂产品特性分为关键

5、性指标和通用性指标，前者为酶活力，后者为容重、细度、pH等。4. 酶活力测定导则4.1 反应条件关键因素选择确立导则酶活力检测是衡量酶制剂质量的关键控制点，是酶制剂生产企业评价成品是否合格的决定性因素。虽然关于各种酶制剂的检测方法有相关国标、行标等，但大多数不是强制性标准，应用覆盖面有限；且酶促反应影响因素较多，各因素对反应速度的影响也不同；各厂家酶活力定义也千差万别。酶活力测定方法尽管种类繁多，检测的目的、对象不同，但原理和方法都是以酶能专一而高效地催化化学反应为基础，测定反应前后底物的减少或产物的增加。由于酶制剂本身的特性及化学方法检测时存在的许多变异因素，使得酶制剂行业的从业者需要对酶活

6、力的检测方法和检测过程有一个正确的理解。为了保证测定结果的一致性，本标准对酶活力检测的影响因素进行分析讨论，其中包括底物、温度、pH、缓冲溶液、反应时间、激活剂及抑制剂等，为酶制剂的检测分析提供参考。4.2 测定条件标准化关键因素导则在酶活测定适当反应条件确定的条件下，待测酶的浓度是影响反应速度的唯一因素。其他条件维持恒定的条件下，底物浓度足够高，保证使酶饱和的情况下，酶反应速度与酶浓度成正比。因此，从酶活测定方法建立原则的角度，酶浓度的选择在已定底物浓度的情况下只要确保反应过程酶处于饱和状态即可。标准曲线是酶制剂检测过程中能求出检测结果的唯一参照依据，曲线方程的好坏直接影响换算出来的检测值。

7、为了减少系统误差给检测结果带来的影响，标准曲线的绘制首先要有固定一致的操作程序，如与样品检测在同一条件下完成，用来作标准曲线的基准物需要烘干至恒重等，且应可行方便，其次要采用线性相关的方法，来确定相应的常数，要使曲线方程的截距尽量小，R平方值尽量趋近于1，同时还要规定在显色剂重新配置后一定要重新制定标准曲线，这样才能更好地减小曲线的误差对酶活力值的影响。4.3 测定方法相对准确校正因素选择确立从标准底物的筛选与确定，以及标准酶的筛选与确定，这两个方面进行研究。对于标准底物而言，其纯度要求、来源、准确度、线性关系、灵敏度等均需要技术规范；对于标准品，则对其本身特性、需考虑的检验项目、贮藏等应予以要求。5. 通用性指标测定方法主要指容重、细度、pH等指标，按照QB/T 1803-1993工业酶制剂通用试验方法执行。6. 酶活力测定标准方法的实施与评价导则酶活力测定的准确性是相对的，与一般化学分析测定不同，酶活力测定的重复性要求及精确性要求都规定在一个较为宽泛的水平。究其原因，一方面在于酶反应是个动态的过程，对反应速度的