分析方法验证方案

1、下载可编辑异烟肼含量测定分析方法验证方案验证原因 ：验证类型 ：新项目验证预验证再验证回顾性验证其它转移验证方法描述 ：本分析方法为中国药典2010 版二部方法 。 为确保其检测结果准确 ，对该分析方法的专属性 、精密度 （系统精密度 、方法精密度 、中间精密度 ）、线性和范围 、准确度 、耐用性进行评价 。验证依据 ：中国药典 2010 年版分析方法 （295 页）验证时间 ：2010 年 07 月 09 日2010 年 07 月 10 日验证项目组成员及职责 ：部门成员职责QC仪器设备的确认QC分析方法编写QC分析测试QC数据评估质量部审核批准.专业 .整理 .下载可编辑.专业 .整理 .

2、下载可编辑验证内容 :-序列号确认测试项目可接受标准1 仪器设备的确认01. 1高效液相色谱仪的确认符合仪器设备的确认要求01. 2天平的确认符合仪器设备的确认要求02具体测试内容异烟肼峰面积 RSD2.0%,02.1系统精密度保留时间 RSD2.0%。异配置 1 份异烟肼工作标准溶液 ，连续进针 6 次，记录烟肼理论塔板数大于异烟肼峰面积 、保留时间 。4000 ，拖尾因子在 0.91.4 之间 。02.2方法精密度样品含量的 RSD2.0%。平行配制同一批样品的6 份样品溶液 ，每份溶液进样2 针，计算样品含量及其相对标准偏差 。02.3线性和范围R0.999以异烟肼工作标准品溶液的浓度为

3、100% ，配制20% 、60% 、 100% 、140% 、 180% 浓度的工作标准品溶液，每个浓度的标准品溶液进样1 次，计算出回归方程和相关系数R。02.4准确度该定量方法的回收率应为以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100% ，取同一批98.0%102.0% 。样品，配制浓度为80%、100% 和 120% 的样品溶液各 3 份，每份进样 2 针。计算其回收率 。.专业 .整理 .下载可编辑02.5耐用性理论塔板数大于 4000 ，配制异烟酸和异烟肼混合溶液，按下列条件改变方拖尾因子在 0.91.4 之间 ,法，稳定后按顺序进样 ，计算异烟肼的理论塔板数 ，分离度 R1.5，相对保留混合

4、溶液中异烟酸和异烟肼的相对保留时间 RRT。时间 RRT偏差绝对值不大改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min 。于 20。a.b. 改变柱温为 23 和 27。c.改变流动相缓冲液与甲醇配比为83:17 和 87:13 。d. 同一填料不同色谱柱 。3 程序及文件03.1液相色谱仪校正规程符合要求03.2液相色谱仪操作规程符合要求03.3分析天平校正规程符合要求03.4分析天平操作规程符合要求.专业 .整理 .下载可编辑验证前准备 ：a) 人员培训 ：培训人姓名培训时间培训内容b) 仪器设备 、标准品和试剂 ：仪器设备仪器名称型号编号校验有效期高效液相色谱仪MODEL200标准品和试

5、剂名称级别厂家批号.专业 .整理 .下载可编辑c) 样品名称厂家批号.专业 .整理 .下载可编辑验证过程 ：色谱条件色谱条件色谱柱：agilentODS-2长度：250cm，内径：4.6mm，填料 C18 ，填料粒度 ：5 m检测波长 ： 262nm ，带宽 30柱温：25进样量：20l流速：1.0ml/min流动相 A： 0.02mol/l 磷酸氢二钠溶液 （用磷酸调 pH 至 6.0），流动相 B：甲醇A:B=85:15停止时间 ： 12min1. 系统精密度1.1.溶液配制系统精密度溶液 ：取异烟肼 10mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密称量 ，用水溶解并稀释至刻度。1.2 验证过

6、程及结果系统精密度溶液连续进样6 次，记录其异烟肼峰面积 、保留时间 。可接受标准 ：异烟肼峰面积 RSD2.0%,保留时间 RSD2.0%。序号保留时间 (min)峰面积12.专业 .整理 .下载可编辑3456RSD%结论：2. 重现性试验 （方法精密度 ）2.1.溶液配制对照溶液 ：取异烟肼工作标准品10mg ，精密称量 ，置 100ml 容量瓶中 ，用水溶解并稀释至刻度 。方法精密度溶液 ：取异烟肼样品 10mg 置 100ml 容量瓶中 ，精密称定 ，用水溶解并稀释至刻度 。用此方法配置同一批号的样品溶液6 份。2.2.验证程序及结果工作标准品溶液进2 针，样品溶液各进 2 针。记录异

7、烟肼峰面积 ，计算样品含量 。可接受标准 ：异烟肼含量的 RSD2.0%。样品批号 ：称样量峰面积含量RSD（mg ）12平均值.专业 .整理 .下载可编辑结论：3. 线性和范围3.1.溶液配制供试品溶液 ：取异烟肼 50mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密称量 ，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。线性点溶液 ：精密移取 a 供试品溶液 5ml 、2ml 、1ml 、分别置 10ml 容量瓶中 ，用水稀释至刻度 ，得到浓度约为 50ug/ml （ d 供试品溶液 ）、 100ug/ml （c 供试品溶.专业 .整理 .下载可编辑液）、 250ug/ml （b 供试品溶液 ）、 500ug/

8、ml（a 供试品溶液 ）的线性点溶液 ，再精密移取 1mlb 供试品溶液 1ml 置 100ml 容量瓶中 ，用水稀释至刻度 ，得到浓度约为 2.5ug/ml （e 供试品溶液 ）。3.2.验证程序及结果按色谱条件分别对线性点溶液进行分析，每个溶液进样 1 次。以浓度为 X 轴，主峰峰面积平均值为 Y 轴，画出线性图 ，求出回归方程 ，计算线性相关系数R。可接受标准 ：R0.999项目（X1）（X2）（X3）X4）（X5）线性点溶液浓度 (ug/ml)异烟肼峰面积线性范围 （ug/ml ）线性回归方程相关系数 R结论：.专业 .整理 .下载可编辑4. 准确度4.1.溶液配制对照溶液 ：取异烟肼

9、 10mg ，置 100ml 容量瓶中 ，精密称量 ，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。准确度溶液 ：以对照溶液浓度为100% ，配置 80% 、100% 和 120% 浓度的准确度溶液。即分别取同一批异烟肼样品8mg 、 10mg 、12mg 至 100ml 容量瓶中 ，精密称量，用水溶解并稀释至刻度 。每个浓度的准确度溶液配制3 份 。4.2.验证程序及结果按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析，每个溶液各进 2 针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率 。可接受标准 ：该定量方法的回收率应为98.0% 102.0% 。回收率RSD2.0%。样品批号称样量峰面积实测量相

10、应含量回收率（ mg ）12平均值（mg ）80 100 120 .专业 .整理 .下载可编辑结论：5. 耐用性5.1.溶液配制混合溶液 ：精密称取 10mg 异烟酸和 10mg 异烟肼样品置 100ml 容量瓶中 ，用水溶解并稀释至刻度 ，混匀，即得。5.2.验证过程及结果按下列条件改变方法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数 ,拖尾因子 。计算相对保留时间 RRT 偏差绝对值 。a. 改变柱温为 23 和 27b. 改变流速为 0.9ml/min 和 1.1ml/min 。c. 改变 0.02mol/l 磷酸氢二钠溶液 (磷酸调 pH 至 6.0)与甲醇配比为 87

11、:13 和 83:17 。d. 选用同一填料的两个不同色谱柱比较可接受标准 ：理论塔板数大于4000 ，拖尾因子在 0.91.4 之间 。分离度 R1.5，相对保留时间 RRT 偏差绝对值不大于20。.专业 .整理 .下载可编辑条件异烟肼理论塔板数异烟肼拖尾因子原条件0.9ml/mina1.1ml/min23 b27 87:13c83:17色谱柱 1d色谱柱 2异烟酸条件RRT偏差绝对值 原条件23a270.9ml/minb1.1ml/min87:13c83:17色谱柱 1d色谱柱 2.专业 .整理 .下载可编辑结论：.专业 .整理 .下载可编辑验证结论 ：验证结果见表验证项目可接受标准验证结果判定异烟肼的峰面积及保留时间的 RSD均不大于系统精密度2.0 。 异烟肼理论塔板数大于 4000 。方法精密度RSD不大于 2.0线性回归系数R 应大于线性和范围0.999回收率在 98.0