加味四逆散防治肝损伤的实验研究

1、加味四逆散防治肝损伤的实验研究*摘要本实验旨在观察加味四逆散抗急性肝损伤的作用。一是采用四氯化碳一次性皮下注射造成急性肝损伤大鼠模型，检测血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH水平及肝组织MDA、GSH水平。二是采用D-氨基半乳糖造成急性大鼠肝损伤模型，检测血清SOD、MDA、GSH水平，并作病理学观察。三是观察加味四逆散对小鼠的急性毒性作用。结果表明：加味四逆散能降低CCl4所致的急性肝损伤大鼠模型血清升高的ALT、AST及MDA值，并使降低的SOD及GSH值升高；加味四逆散能降低CCl4所致的急性肝损伤大鼠模型肝组织中升高的MDA值，并使降低的GSH值升高；加味四逆散能降低D-GalN

2、所致的急性肝损伤大鼠模型血清中升高的MDA值，并使降低的SOD及GSH值升高；加味四逆散能使D-GlaN所致的急性肝损伤大鼠模型肝脏的病变程度明显减轻，尤以变性、坏死的程度减轻明显；加味四逆散对小鼠的半数致死量LD50为305.8032.55g/kg。研究表明，加味四逆散具有防治CCl4、D-GalN所致急性肝损伤作用，其抗肝损伤的作用机制与其降酶、抗过氧化作用有关，且该制剂口服安全无毒。关键词加味四逆散肝损伤实验研究中国书分类号R28 Effects of jia Wei Si Ni San (JWSNS) on Liver InjuryPeng Hanguang, et al(Union

3、Hosptial, Tongji Medical University,Wuhan,430022)Abstract：To investigate the protective effects of JWSNS on acute liver injury and the acute toxic effect.Two kinds of liver injury models were employed by ip injection of carbon tetrachloride(CCl4) and D-galac tosamise(D-GalN) respectively. Serum alan

4、ine aminotransferase(ALT),asparate aminotransferase(AST) and superoxide dismutase(SOD),glutathioe(GSH) activites,malondialdehyde(MDA) content in serum,GSH activity and MDA content in liver tissue were measured.The histopathological effects of JWSNS was observed.The results suggested:JWSNS could decr

5、ease ALT,AST activities and MDA content,but improve SOD and GSH activities in acute liver injury induced by CCl4-intoxication;JWSNS could decrease MDA content in liver tissue,but improve its GSH activity in acute liver injury induced by CCl4;JWSNS could decrease serum MDA content,but improve serum S

6、OD and GSH activities in acute liver injury induced by D-GalN;JWSNS could lessen steatois degree,especially inhibit the hepatocytes degeneration and necrosis;The median lethal dose of JWSNS (LD50) was 305.8032.55 g/kg.JWSNS had the marked effects of preventing liver injury,which related to its effec

7、ts of decreasing ALT,AST activities and anti-lipid peroxidation in liver injury.And JWSNS was safe.近年来，国内外肝损伤的发病率有明显上升趋势。市场上护肝降酶的药物并不少见，临床上相对有效的联苯双脂、甘利欣等药，停药后反跳严重，且对相当数量患者无效。因而迫切需要寻求无毒、护肝疗效可靠且无反跳的中药制剂，以适应临床需求。笔者用加味四逆散进行防治肝损伤的动物试验和临床实践研究均取得了满意效果。为开创新的保肝、护肝、抗肝损伤的有效中药复方，提供了先进的科学依据。现对“加味四逆散防治肝损伤的实验研究”课题

8、介绍于下：1加味四逆散防治CCl4致大鼠急性肝损伤的实验研究取大鼠60只，随机分成加味四逆散合剂大、中、小剂量组(72g/kg体重、36g/kg体重、18g/kg体重)，模型组、正常对照组及联苯双脂滴丸组(20.25mg/kg体重)，每组有实验动物10只。加味四逆散合剂大、中、小剂量组及联苯双脂滴丸组预防给药5天，模型组和正常对照组分别给同体积蒸馏水。于末次给药后2小时，一次性皮下注射CCl40.5ml/100g体重，造成大鼠急性肝损伤模型，造模48小时后处死大鼠，取血及肝组织标本待检。1.1加味四逆散对CCl4所致急性肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响模型组大鼠血清ALT、AST明显升高(5

9、1.5818.57U/L，56.5014.93U/L)，与正常对照组比较有显著性差异(正常对照组ALT、AST分别为23.8311.37U/L、27.0010.21U/L，P均0.01)。加味四逆散大、中剂量组ALT值明显降低(29.1710.95U/L，34.586.73U/L)，与模型组比较有显著性差异(P0.01)；加味四逆散大、中、小剂量组AST明显降低，与模型组比较有显著性差异(P0.01，P0.01，P0.05)。1.2加味四逆散对CCl4所致急性肝损伤大鼠血清中SOD、MDA及GSH的影响造模组大鼠血清SOD值明显降低(276.6235.05NU/ml)，与正常组比较(458.5

10、284.72NU/ml)有显著性差异(P0.01)；加味四逆散大剂量组SOD值(429.5055.23NU/ml)明显升高，与模型组比较，有显著性差异(P0.01)；中、小剂量组亦有不同程度的升高，但与模型组比较无显著性差异(P均0.05)。模型组MDA值明显升高(16.014.33nmol/ml)，与正常组(7.281.06nmol/ml)相比均有显著性差异(P0.01)；中、小剂量组均有不同程度的降低，但与模型组比较无显著性差异(P均0.05)。模型组GSH值(17.285.19mg/L)明显降低，与正常组(51.934.45mg/L)比较有显著性差异(P0.01)；加味四逆散大、中、小剂

11、量组GSH值(42.933.80mg/L、40.556.13mg/L、27.537.70mg/L)均明显升高，与模型组比较均有显著性差异(P0.01，P0.01，P0.05)。1.3加味四逆散对CCl4所致急性肝损伤大鼠肝组织MDA、GSH的影响模型组MDA(12.063.26mmol/ml)明显升高，与正常组(6.412.59mmol/ml)比较有显著性差异(P0.05)；加味四逆散大、中、小剂量组MDA值(6.802.35nmol/ml，7.774.67nmol/ml，7.773.19nmol/ml)都明显降低，与模型组比较有显著性差异(P0.05，P0.05，P0.05)。模型组肝组织中

12、GSH值(107.811.96mg/L)明显降低，与正常组比较(138.6130.54mg/L)比较有显著性差异(P0.05)；加味四逆散大剂量组肝组织GSH值(140.2723.41mg/L)明显升高，与模型组比较有显著性差异(P0.05)；中、小剂量组亦有不同程度的增高，但与模型组比较无显著性差异。2加味四逆散防治D-GalN所致大鼠急性肝损伤的实验研究实验方法同CCl4所致急性大鼠肝损伤实验，用D-GalN取代CCl4，剂量为600mg/kg体重。2.1加味四逆散对D-GalN所致急性肝损伤大鼠血清SOD、GSH、MDA的影响模型组SOD值、GSH值(264.9885.79NU/ml，6

13、.785.30mg/L)均明显降低，与正常组(450.6124.04NU/ml，20.035.83mg/L)比较，有显著性差异(P0.01)；加味四逆散大、中、小剂量组SOD、GSH均明显上升，与模型组比较均具有显著性差异(P0.05，P0.01)。模型组MDA(14.564.38nmol/ml)比正常组MDA(9.042.87nmol/ml)明显升高，两者相比有显著性差异(P0.05)；加味四逆散大剂量组血清MDA值(9.382.93nmol/ml)则明显降低，与模型组比较有显著性差异(P0.05)；中、小剂量组亦有不同程度的降低，但与模型组比较无显著差异(P0.05)。2.2加味四逆散对D

14、-GalN所致急性肝损伤大鼠肝组织病理学的改变D-GalN所致急性肝损伤大鼠肝细胞发生广泛的水样变性，胞浆疏松化及混浊肿胀，肝细胞可见点状和灶状坏死，可见核碎裂、嗜酸小体及脂肪变，汇合区炎性细胞浸润。加味四逆散各防治组的病变程度明显减轻，尤以变性坏死程度明显减轻。其中加味四逆散大剂量防治组仅个别肝细胞出现浊肿，基本接近正常组，中、小剂量组肝细胞浊肿、变性程度有所减轻，汇合区见少量炎性细胞浸润。3加味四逆散对小鼠的急性毒性试验取小鼠50只，雌雄各异，随机分成5组，每组10只，通过预试验找出最大致死量为480g/kg(生药)，最小致死量为196.6g/kg(生药)，由480g/kg(生药)开始，按10.80比例用蒸馏水等比稀释，灌胃给药，给药体积为0.4ml/kg体重，2次/d(间隔3小时)，后连续观察7天，记录小鼠毒性反应，用Bliss法计算小鼠的半数致死量LD50为305.832.55g/kg，相当于成人(70kg体重)每日口服生药剂量的192214倍以上，表明该剂口服安全性较大。本实验研究表明，加味四逆散能明显升高CCl4中毒大鼠血清SOD含量，及血清和肝组