丹参多酚酸口腔崩解片的质量标准研究质量标

1、丹参多酚酸口腔崩解片的质量标准研究作者:周毅生,孟江,咸银库,廖华卫,刘林,段芳【摘耍】目的建立丹参多酚酸口腔崩解片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别丹参多酚酸口腔崩解片中主要成分丹酚酸B,采用高效液相色谱法及紫外可见分光光度法分别测定丹参多酚酸口腔崩解片中的丹酚酸B及丹参总酚酸的含量,并测定其崩解时限和片重差异。结果丹参多酚酸口腔崩解片平均崩解时限为23. 5 s,且片重差异符合规定;丹酚酸B在41. 04205. 2|J g mL-1范围内色谱峰面积与进样量间线性关系良好,r=0. 999 6,平均回收率为99. 96%,RSD为0.55%;原儿茶醛在41. 36248. 16 pg.m

2、L-l范围内色谱峰面积与进样量间线性关系良好,r=0.999 6,平均回收率为96. 67%, RSD为1.54%。结论建立了该制剂的质量标准,其鉴别与含量测定方法简便、可靠,可作为该制剂的质量控制指标。【关键词】丹参多酚酸丹参酚酸B 口腔崩解片质量标准Abstract:Objective To establish the quality standard of orally disintegrating tablets of salvianolic acids. Methods The mainingredient of the tablets, salvianolic acid B, wa

3、s identified by TLC.The contents of salvianolic acid B and total salvianolic acids in theorally disintegrating tablets of salvianolic acid were measured byHPLC and UV. The disintegration time and tablet weight weredetermined. Results The tablets of salvianolic acids disintegratedin 26.5 seconds, and

4、 the tablet weight was fit for the criterion. Agood linearity of salvianolic acid B was obtained within the range of41.04-205.2 |J g mL-1 with the correlation coefficient 0.9996. Therecovery was 99. 96 % and RSD 0.55 %. A good linearity ofprotocatechuic aldehyde was obtained within the range of 41.

5、36-248. 16|J g mL-1 with the correlation coefficient 0.9996. The recovery was96. 67% and RSD 1. 54%. Conclusion The method for identifying and determining salvianolic acids is useful for the quality controlof orally disintegrating tablets of salvianolic acids.Key words:salvianolic acids B; salvianol

6、ic acid ; orallydisintegrating tablets; quality standard丹参多酚酸是中药丹参中的水溶性成分,具有显著的抗心肌缺血作用,降低心脏耗氧量,并能对抗诱导的血小板聚集和抑制血栓的形成。临床试验研究表明,丹参多酚酸对于冠心病、心绞痛,疗效显著、确切,病人使用安全1,其中丹酚酸B具有较高的生物活性。口腔崩解片是近年来国内外研究开发的一种速释新剂型,不需用水或只需少量水,亦无需咀嚼,而只需将药物置于舌面上,遇唾液迅速崩解后,随吞咽动作入胃起效,方便老人、儿童、吞咽困难或特殊环境下的患者用药2。本研究通过对丹参多酚酸口腔崩解片的质量标准研究,为该制剂的质

7、量控制提供依据。1仪器与试药1. 1试剂与试药丹参多酚酸口腔崩解片(自制,规格:0.25 g/片;丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所,批号:丨丨丨讯2 200605;原儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所,批号:H0810 200506;乙腈、甲醇和甲酸为色谱纯,其余试剂均为分析纯。1.2仪器与设备Waters自动进样液相色谱仪,alliance一2966型光电二极管阵列检测器(美国;U V2450型紫外可见分光光度计(日本岛津;色谱柱Luna C18(2 100A (5 M m, 250 m m X4. 60 mm及配套预柱(广州菲罗门科学仪器有限公司;电子分析天平(赛多利斯starto

8、rius/BPMlD; ZF I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂;D I. 360A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司。2丹参多酚酸口腔崩解片的鉴别2. 1理化鉴别取本品研细后的粉末适量,加水超声处理20 min,放冷, 过滤,在滤液中加1滴FeC13乙醇溶液,立即出现污蓝色沉淀。2.2薄层鉴别取10片S制的丹参多酚酸口腔崩解片研碎,精密称定0.25 g,置50 mL容量瓶中,加水30 mL,超声20 min,定容至刻度,放冷,过滤,取续滤液 5 mL,稀释定容至10 mL,作为供试品溶液。另取丹酚酸B对照品,制成0. 2 mg mL-1的75%甲醇溶液,作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液

9、、对照品溶液各5 M L点于同一硅胶G板上,以三氯甲烷甲醇甲酸(体积比8 : 3 : 1为展开剂,展开,取出,晾干。喷以5%FeC13乙醇液,供试品溶液与对照品液在相应的位置上有相同颜色的斑点,结果见图1。1.样品液;2.对照液;3.样品液;4.空白液图1丹参多酚酸口腔崩解片薄层鉴别图(略Figure 1 TLC of orally disintegrating tablets3丹参多酚酸口腔崩解片的检查3.1崩解时限测定方法取样品1片,置事先于(37±1 °C水浴中预热的10 mL干燥烧杯中,加入(37±1 V的水 2 mL,静置,观察至完全崩解并能全部通过2号

10、筛的时限,不得超过1 min。压制3批样品,每批分别测定6片。结果各批的平均崩解时间为23. 5 s。3.2重量差异检查参照中国药典2005年版中重量差异检查的要求: 片重0.25 g,重量差异限度为±0.75 %。对所压制的3批样品分别检查,结果均符合规定。4丹参多酚酸口腔崩解片的含量测定4.1丹酚酸B的含量测定4.1.1色谱条件按中国药典2005年版一部丹参含量测定项下:色谱柱Luna C18(2 100A (5 |J m, 250 mmX 4. 60 mm及配套预柱;流动相:甲醇乙腈甲酸水(体积比30 : 10 : 1 : 59;流速:1. 0 mL min-1;检测波长:28

11、6 nm;进样体积:10 M L;柱温:30 °C;理论塔板数按丹酚酸B计算应不低丁'2 000。色谱图见图2。4.1.2丹酚酸B对照品溶液的制各精密称取丹酚酸B对照品适量,加体积分数75%甲醇溶液,溶解定容至25 mL量瓶中,得到质量浓度为0. 205 2mg mL-1的丹酚酸B对照品溶液。2. 1.3供试品溶液的制备取10片自制的丹参多酚酸口腔崩解片,在研钵中研碎,精密称定0.25 g,置50 mL量瓶中,加水30 mL,超声20 min,定容至刻度,放冷,过滤,取续滤液5 mL,稀释定容至10 mL,即得。4.1.4空白辅料溶液的制备按丹参多酚酸口腔崩解片的处方配比,精

12、密称取混合均勻的辅料2. 489 g,取约0.25 g,依“4.1.3”项进行处理,即得。4.1.5标准曲线的建立分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 mL, 稀释定容至10 mL,分别进样10 M L,记录色谱图。以色谱峰面积(A对丹酚酸B质量浓度(p 作回归,回归方程为:A=9544. 8p-60876,r=0. 999 6,表明丹酚酸质量浓度在41. 04205. 2 M g * mL-1范围内线性关系良好。2. 1. 6精密度试验取丹酚酸B对照品溶液,进样1 M L,连续进样5次,测定丹酚酸B对照品的峰面积的RSD为0. 28%。4.1.7重复性试验取同一批号的丹参多酚酸口腔崩解

13、片,称取5份,按“4. 1. 3”项方法处理并进样测定,丹酚酸B的峰面积的RSD为1. 67%,结果表明重复性良好。A.对照品;B.供试品;C.空白辅料;1.丹参酚酸B图2丹酚多酚酸口腔崩解片HPLC图(略Figure 2 HPLC chromatograms of orally disintegrating tablets1. 1. 8稳定性试验取同一浓度的供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、12、24 h进样,测得丹酚酸B供试品的峰面积的RSD为1.39%,结果表明供试品溶液在24 h内稳定。2. 1.9加样回收率试验精密称取同一批号已知含量的丹参多酚酸口腔崩解片样品6份,精密分别加入含

14、等量的丹酚酸B对照品溶液,按“4. 1.3”项方法处理并进样测定,计算回收率,结果见表1。表1丹酚酸B加样回收率试验结果(略Table 1 Recovery of salvianolic acid B4.1.10样品丹酚酸B含量的测定取研细的丹参多酚酸口腔崩解片适量,按“4. 1. 3”项下处理并进样测定丹酚酸B的含量,3批样品的测定结果分别为13.03、13.99、14.06 mg/片。4.2总丹酚酸的含量测定1. 2. 1测定方法3 取待测液1 mL置10 mL容量瓶中,加入质量分数l%NaN03溶液2.5 mL,振荡摇匀,暗处静置显色5 min;然后加入10% Al (N03 3溶液0.

15、5 mL,振荡摇匀,暗处静置显色5 min;再加入4%NaOH溶液4. 0 mL,用水稀释至10 mL,摇匀,暗处静置显色10 min。在500 nm波长处,测定吸光度。4.2.2原儿茶醛对照品溶液的制备精密称定原儿茶醛适量,用体积分数75%甲醇溶液溶解,定容至50 mL容量瓶中,得到0. 206 8 rag mL-1的对照品溶液。1. 2. 3供试品与空白辅料溶液的制备按“4. 1. 3”项下同法操作。4.2.4标准曲线的建立分别精密吸取原儿茶醛对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1. 2 mL,按“4. 2. 1”项下操作测吸光度。以吸光度(A对原儿茶醛对照品溶液的质量浓度(

16、P 作回归,回归方程为:A=2. 681 p+0.0074,r =0. 999 6,表明原儿茶醛在41. 36248. 16 1g mL_l范围内与吸光度呈良好的线性关系。1. 2. 5精密度试验取原儿茶醛对照品溶液1 mL,按“4. 2. 1”项操作,连续测定5次吸光度,测定吸光度的RSD为0. 87 %。4.2.6重复性试验取同一批号的丹参多酚酸口腔崩解片,称取5份,制备成供试品溶液,按“4.2.1”项操作,结果表明重复性良好,吸光度的RSD为2. 24%o4.2.7稳定性试验取同一浓度的供试品溶液,按“4.2. 1”项操作,分别在0、5、10、15、25、30 min测定,测得吸光度的R

17、SD为1. 4%,结果表明供试品溶液在30 min内稳定。4.2.8加样回收率试验取同一批号的供试品溶液6份,加入含等量的原儿茶醛对照品溶液,摇匀,按“4.2.1”项操作测定吸光度,并计算回收率。见表2。表2原儿荼醛加样回收率试验结果(略Table 2 Recovery results of protocatechuic aldehyde4.2.9样品总丹酚酸含量的测定取研细的丹参多酚酸口腔崩解片适量,制备供试品溶液,按“4.2.1”项下分别测定总丹酚酸的吸光度并计算含量,3 批丹参多酚酸口腔崩解片的总丹酚酸的含量分别为17. 70、17. 96和18. 19 mg/ 片。5讨论5.1丹参多酚酸及丹酚酸B在水中的溶解性好,故选用水作为提取溶剂,分别考察了超声时间10、20、30 min对丹参多酚酸口腔崩解片提取情况,结果表明超声20 min就可以大部分提取完全,同时,考察了超声后以过滤方式及离心方式澄清溶液,结果表明二者的差别不大,所以选择20 min超声提取,然后滤纸过滤,制备供试品溶液,结果回收率符合耍求。表明该方法可行。5.2本研究同时进行了体内口感试验,健康志愿者6人,试验开始前15 min停止饮水,每人每次口含本品1片,至完全崩解,试验间隔为15 min以上。结果平均崩解时间为23. 5 s,口感良好,沙砾感很小,味甜。5.3本研究通过