硕士论文--厚朴配方颗粒质量标准及高效液相指纹图谱研究

1、成都中医药大学硕士学位论文厚朴配方颗粒质量标准及高效液相指纹图谱研究姓名：盛燕申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：夏厚林20060401摘要厚朴配方颗粒为木兰科植物厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮经炮制后制成的配方颗粒，具有燥湿消痰、下气除满之功效，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。为了控制厚朴配方颗粒的质量，确保临床用药的安全性和有效性，本文对其质量标准、指纹图谱及稳定性进行了研究。本文系统地研究了厚朴配方颗粒质量控制的各项指标。性状项下，规定本品为棕褐色颗粒，气香，味苦；鉴别项下，分别对厚朴的酚类、生物碱类及挥发油化学成分进行了薄层层析并确定了色谱条件；检查项下，对中国

2、药典年版一部颗粒剂项下的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度及重金属、砷盐、有害元素、农药残留量进行了检查；浸出物项下，对水溶性浸出物、醇溶性浸出物的浸出方法、浸出溶剂进行了研究，并确定它们的含量限度为；含量测定项下，采用高效液相色谱法对厚朴酚、和厚朴酚进行了含量测定，进行了供试品溶液制备方法（提取方法、溶剂、时间）的考察，色谱条件（流动相、柱温、检测波长）的考察，系统适应性试验及方法学考察，并确定本品每袋含厚朴以厚朴酚（。）与和厚朴酚（。）的总量计不得少于。此外，采用红外光谱法及薄层色谱法对所用辅料一糊精及干姜进行了检查，结果阴性均有一定干扰，故有关辅料检查还有待于进一步研究。本文参照中

3、药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）的要求，采用高效液相色谱法对厚朴配方颗粒的指纹图谱进行了研究，包括供试品溶液制备方法（提取方法、溶剂、时问）的考察，色谱条件（色谱柱、流动相、检测波长、柱温、流速）的考察，系统适应性试验、参照物的选择及方法学考察，确定了其指纹图谱共有模式。用“计算机辅助相似性评价系统”对十批中试样品、十二批厚朴药材及十六批姜厚朴药材的指纹图谱分别进行了全谱的相似度评价，结果中试样品指纹图谱相似度系数均大于，厚朴药材、姜厚朴药材指纹图谱相似度系数均大于。对厚朴配方颗粒与厚朴、姜厚朴药材之间的相关性进行了评价，结果表明三者之间具有一定的相关性。本文对三批中试样品进行了个月的长

4、期留样稳定性试验及加速稳定性试验，各项考察项目均符合规定，结果表明本品基本稳定，故本品有效期可暂定为二年。、本文研究结果对建立厚朴配方颗粒质量标准提供了科学的依据；为指纹图谱技术的推广，及配方颗粒的临床大规模推广和使用奠定了基础。关键词：厚朴配方颗粒质量标准指纹图谱稳定性厚朴酚和厚朴酚，：，：，），；：，一：，（，），（，），（），（）：（），（，），（，），”；，：；，成都中医药大学硕士学位论文引言厚朴为中国药典年版（一部）收载品种，始载于神农本草经。其性味苦、辛、温，归脾、胃、肺、大肠经，具有燥湿消痰、下气除满之功效，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。临床上主要用于防治

5、龋牙、消除手术中鼓肠现象、肌强直、急性肠炎、细菌性或阿米巴痢疾、慢性胃炎等。其应用广泛、历史悠久，为我国重要传统中药，常用于厚朴三物汤、半夏厚朴汤、大承气汤、栀子厚朴汤等多种方剂，及藿香正气水、麻仁丸、香砂养胃丸等余种中成药中。中药配方颗粒始于世纪年代，由日本、韩国及台湾首先普遍应用并远销欧美等地，我国大陆起步较晚。年，“江苏天江”首家中药配方颗粒厂诞生；年由国家中医药管理局倡导并牵头立项研究：年月臼，国家药品监督管理局发布中药配方颗粒管理暂行规定，同时对中药配方颗粒的质量标准研究提出了技术要求；年，被列入国家“十五”重大科技专项“创新药物和中药现代化”课题从而迎来了中药配方颗粒的春天。中药配

6、方颗粒是对传统中药饮片应用形式的突破。是以优质中药饮片为原料，经现代工艺提取、真空低温浓缩、瞬间干燥、干法制粒等多道工序精制而成的系列产品。用它组合成方或单味药冲服，可作为汤药和中成药之间的补充。其既秉承了传统汤剂的优点，又具有剂量小、疗效高、起效快、服用携带贮藏方便等优势，因此相对于传统汤剂更适应现代快节奏的生活，受到了广大医务人员和病人的欢迎。厚朴配方颗粒为木兰科植物厚补的干燥千皮、根皮及枝皮经炮制后经醇水双提、挥发油包合且加入一定量的辅料制成的配方颗粒，其化学成分与姜厚朴相当；经等效性试验验证，药效亦与姜厚朴相当。厚朴的化学成分研究迄今余年，主要含有厚朴酚（）、和厚朴酚（）等酚类成分，木

7、兰箭毒碱（弘。部删）等生物碱成分，榜叶醇（）等挥发油三大类化学成分“，其主要活性成分为厚朴酚与和厚朴酚。厚朴酚、和厚朴酚具有中枢抑制、肌松作用、镇吐、抗龋齿、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化作用；此外，厚朴酚还具有抗溃疡、保护心肌、抗心律失常、抗溶血、保肝等作用；木兰箭毒碱具有降压、抗十二指肠痉挛、肌松等作用；故本文拟采成都中医药大学硕士学位论文用薄层色谱法对酚类、生物碱类和挥发油类进行鉴别，采用高效液相色谱法对厚朴酚及和厚朴酚进行含量测定来控制成品质量。厚朴煎液具有双向调节小鼠离体肠管、抗溃疡、抗菌、抗龋齿、抗过敏、箭毒样等作用；厚朴乙醇提取物具有抗菌、抗氧化、抗过敏等作用；故本文拟定了水溶性浸出物、

8、醇溶性浸出物含量限度。为了能多层次表达厚朴有效成分信息，更全面地控制成品质量，故本文进一步研究了其指纹图谱。中药配方颗粒的诞生与新生事物一样，存在着许多缺点和不足，如在质量可控性、疗效确定性及稳定性等方面还需要做大量的基础研究工作。本课题的研究为配方颗粒的临床大规模推广运用奠定了一定的基础。成都中医药大学硕士学位论文厚朴配方颗粒质量标准研究厚朴配方颗粒为木兰科植物厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮经炮制后制成的配方颗粒，具有燥湿消痰、下气除满之功效，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。为了控制厚朴配方颗粒的质量，确保临床用药的安全性和有效性，本文对其质量标准进行了研究，研究内容包括性

9、状、鉴别、检查、浸出物、辅料检查、厚朴酚及和厚朴酚的含量测定等。试药、试剂与仪器样品（）厚朴配方颗粒实验室自制小样批；四川省绿色药业科技发展股份有限公司生产中试样品批，批号：、。（）厚朴药材经本院生药教研室卫莹芳教授鉴定为木兰科植物厚朴）茆的干燥干皮及枝皮，符合年版我国药典规定。对照品：厚朴酚（）、和厚朴酚（）均购自中国药品生物制品检定所，批号依次为、，供含量测定用。试剂：甲醇（色谱纯，），其它试剂均为分析纯。仪器：型高效液相色谱仪；高效液相色谱工作站；型超声波清洗器（，昆山市超声仪器有限公司）；型电子分析天平（：，；北京赛多利仪器系统有限公司）：等。成都中医药大学硕士学位论文实验部分性状根据

10、批中试样品实际情况描述：本品为棕褐色颗粒，气香，昧苦。鉴别本品主要含酚类、生物碱及挥发油三大类化学成分，故采用薄层色谱法分别进行鉴别来控制成品的质量“。酚类成分的鉴别“”供试品溶液的制备：取本品（批号、），加甲醇，密塞，超声处理分钟，滤过，即得。对照品溶液的制备：取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加甲醇制成每各含的混合溶液，即得。药材对照溶液的制备：取厚朴对照药材，按供试品溶液的制备方法制备，即得。阴性对照溶液的制备：取缺厚朴的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制各，即得。色谱条件：薄层板：硅胶自制板；厚度：点样量：上述溶液各展开剂：展开系统苯一甲醇（：）：展开系统环己烷一乙酸乙酯一甲醇（：）展开

11、条件：室温，在的湿度环境中放置分钟后展开。展开方式：上行展开，展距显色：喷以香草醛硫酸溶液，在。加热至斑点显色清晰，：光检视。结果：见图。由图可见，在供试品色谱中，在与对照品及厚朴对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，特征性强，且阴性对照无干扰。在两个展开系统条件下进行层析，均可得到较好效果。展开系统（）条件下厚朴酚，和厚朴酚；展开系统条件下厚朴酚，和厚朴酚。成都中医药丈学硕士学位论文，生物碱类成分的鉴别嗍供试品溶渡的制备：取本品（批号、），加甲醇，密塞，超声处理分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，即得。药材对照溶液的制各：取厚朴对照药材，按供试品溶液的制备方法制备，即得。阴性对照溶液

12、的制各：取缺厚朴的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制备，即得。色谱条件：薄层板：硅胶自制板；厚度：点样量：上述溶液均展开剂：展开系统乙酸乙醅一丁酮一甲酸一水（：）展开系统乙酸乙酯一异丙醇一甲酸一水（：）展开方式：上行展开，展距显色：喷以改良碘化铋钾试剂，日光下检视。结果：见图。由图可见，两个展开系统条件下，供试品色谱中，在与厚朴对照药材色谱相应的位置上，均显橙红色主斑点，且阴性对照无干扰。其中在展开系统条件下，斑点一：斑点二；展开系统（条件下，斑点一；斑点二。挥发油类成分的鉴别呻供试品溶液的制备：取本品（批号、），加倍量石油醚（），密塞，超声处理分钟，滤过，取滤液加振摇提取次，每次，合并石油醚

13、液，蒸千，残渣加石油醚（）一乙酸乙酯（：）使溶解，即得。药材对照液的制备：取厚朴药材粉末，按供试品溶液的制备方法制备，即得。挥发油对照液的制备：取厚朴药材粉末，加倍量水蒸馏提取取挥发油加石油醚（）使溶解，即得。阴性对照渡的制备：取缺厚朴的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制备，即得。成都中医药大学硕士学位论文色谱条件：薄层板：硅胶自制板；厚度：点样量；挥发油对照液；其余溶液均展开剂：展开系统¨苯一乙酸乙酯（：）展开系统石油醚（。）。乙酸乙酯（：）展开方式：上行展开，展距：显色：喷以香草醛一浓硫酸试剂，加热数分钟，至斑点显色清晰，日光下检视。结果：见图。由图可见，在两个展开系统条件下，供

14、试品色谱中，在与厚朴挥发油和厚朴对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色主斑点，且阴性对照无干扰。其中在展开剂¨条件下，斑点较圆整，斑点一；斑点二；展开系统条件下，斑点一；斑点二。检查粒度照中国药典年版一部粒度测定法项下第二法（附录，双筛分法）测定。结果见表。表粒度测定结果批号不能通过一号筛与能通过五号筛的总和（）本品不能通过一号筛与能通过五号筛的总和均小于，符合药典规定。成都中医药大学硕士学位论文。水分取本品，照中国药典年版一部水分测定法项下第二法（附录，甲苯法）测定。结果见表。表水分测定结果批号水分（）本品水分均小于，符合药典规定。溶化性照中国药典年版一部颗粒剂（附录）项下溶化性检

15、查方法检查。结果见表。表溶化性检查结果本品均分钟内全部溶化，无焦屑等异物，符合药典规定。成都中医药大学硕士学位论文装量差异照中国药典年版一部颗粒剂（附录）项下装量差异检查方法检查。结果见表。表装量差异测定结果批号装量差异（）±±±±±±±±±±（）本品装量差异均小于±，符合药典规定。微生物限度照中国药典年版一部微生物限度检查法（附录）进行检查。结果见表。表微生物限度检查结果成都中医药大学硕士学位论文本品细菌数每不过个；霉菌和酵母菌数每不过个；大肠埃希菌和活螨每未检出，均符合药典规定。重

16、金属照中国药典年版一部重金属检查法项下第二法（附录）检查。取本品，置己炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，捌硝酸：，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸，置水浴上蒸干后加水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（），微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成，作为供试品溶液；另取配制供试品溶液韵试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（）与水。微热溶解后，移置纳氏比色管中，分别精密加标准铅溶液、，再用水稀释成，作为标准对照品溶液。在以上各溶液中分别加硫代乙酰胺试液各，摇匀，放置分钟，同置白纸上，自

17、上向下透视，供试品溶液所显颜色与标准对照品溶液的颜色比较较浅。结果见表。表重金属检查结果本品重金属均小于。成都中医药大学硕士学位论文砷盐取本品，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，加无砷氢氧化钙，加少量水，搅匀，烘干，在小火上小心灼烧至烟雾除尽，移入高温炉中，在。炽灼至灰化，取出，放冷，加盐酸与水，转入砷化氢发生器中，照中国药典年版一部砷盐检查法第二法（附录，二乙基二硫代氨基甲酸银法）自“再加碘化钾试液”起，依法操作，检查，供试品溶液的颜色均浅于标准砷对照液（相当于表）。结果见表。砷盐检查结果本品砷盐均小于。有害元素照中国药典年版一部铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录）、药用植物及制品进出口绿色行业

18、标准及卜等方法进行测定，结果见表。室！批号铅塑：塑：壁：垂：塑焦至绫墨！堡量生！镉砷汞、铜本品铅小于，镉小于，砷小于，汞小于，铜小于，。成都中医药大学硕士学位论文农药残留量照中国药典年版一部农药残留量测定法项下有机氯类农药残留量方法（附录）及等方法进行测定，结果见表。表农药残留量检查结果（）本品六六六小于，滴滴涕小于，五氯硝基苯小于”瓜辅料的检查所用辅料为糊精及干姜，采用红外光谱法及薄层色谱法进行初步检查。糊精的检查（）多糖的制备“”厚朴配方颗粒多糖的制各：取厚朴配方颗粒（批号），用适量热、水溶解，加乙醇调含醇量至，冷藏，放置过夜，离心，轻倾出其上清液，余下的沉淀加水搅匀，再反复醇沉次。取沉淀

19、用水溶解，加三氯乙殷（），使浓度达，冷藏，放置过夜，离心，轻倾出上清液，浓缩，醇沉，得沉淀加水溶解，再加入处理一次。取沉淀加水溶解，用活性炭煮沸脱色两次，抽滤，滤液再醇沉，得残渣依次用乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤数次，于真空干燥，即得。姜厚朴多糖的制备：取姜厚朴药材（干皮；枝皮；中试用），用倍量水煎煮次（，），过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为，放冷。按厚朴配方颗粒多糖的制各方法进行醇沉、除蛋白、脱色、洗涤、干燥，即得。（）红外光谱法：分别取糊精、厚朴配方颗粒多糖、姜厚朴多糖，加入干燥晶体，在红外灯照射下，在玛瑙研钵中研磨后，用压片机压片，于红外区扫描。红外光谱见图。糊精一：（），（），（吡喃

20、糖环），舵都中医药大学硕士学位论文。，厚朴配方颗粒支糖：（），（），（毗喃糖环），姜厚朴多糖：（），（），（吡喃糖环），。，对红外光谱进行分析，结论如下：糊精、厚朴配方颗粒多糖、姜厚朴多糖谱的蜂位、峰宽、峰高均相似，提示红外光谱法不能达到鉴别厚朴配方颗粒中糊精的目的。厚朴配方颗粒中糊精的鉴别还有待于进一步研究。（）薄层色谱法“”：对照品溶液的制备：取（）一葡萄糖、一半乳糖、果糖、木糖对照品适量，分别加水制成的溶液，即得。取糊精，加入几的，封管，水浴水解，用（）先中和一部分，盘近终点时，再用。中和至中性。离心，轻倾出上清液，水浴蒸干，用水转移至容量瓶中，定容，即得。供试品溶液的制各：取厚朴配方颗

21、粒多糖，同法操作，即得。阴性溶液的制备：取姜厚朴多糖，同法操作，即得。色谱条件：薄层板：硅胶加磷酸二氢钠的薄层板点样量：缸展开剂：正丁醇一丙酮水（：）展距：显色：用苯胺一邻苯二甲酸试剂（将邻苯二甲酸和的苯胺溶于水饱和的正丁酵中）显色，在加热至显色清晰即可。再在紫外灯下观察。结果：见图。由图可见，在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，但阴性对照有干扰。成都中医药大学硕士学位论文结果提示如下：糊精主要由葡萄糖组成，而姜厚朴多糖水解产物（阴性溶液）亦有葡萄糖，鉴别有阴性干扰，故采用法对多糖水解产物进行鉴别，不能达到鉴别厚朴配方颗粒中糊精的目的。厚朴配方颗粒中糊精的鉴别还有待于进

22、一步研究。干姜的鉴别根据化学成分预试结果，干姜可能含挥发油、酚类、香豆素类、黄酮类、葸醌类化学成分。考虑到成品中炮制用干姜较少，故将样品分段、浓集后进行薄层鉴别。（）方法一供试品溶液的制备：取本品（批号），加倍量，醇，超声处理，过滤，取滤液，回收乙醇，用水转移，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇提取，取石油醚层、乙酸乙酯层、水饱和正丁醇层及水层，定容到，得各提取层样品；取残渣，加倍量水超声，过滤，取滤液，定容到，得水提液样品。阴性对照溶液的制备：取缺于姜的阴性制剂，同法制备，即得。药材对照溶液的制备：取干姜对照药材粉末，加，醇超声处理，滤过，取滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，得醇提液样品；取残渣

23、，加水，超声处理，过滤，得水提液样品。色谱条件：薄层板：硅胶板；点样量：以环己烷一乙醚（：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，在加热至斑点显色清晰“”。结果：见图。由图可见，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置（，）上，未见相同颜色的斑点；在为之间，厚朴酚、和厚朴酚含量较高，干扰了干姜的鉴别，故下一步尝试对石油醚提取液用萃取后再鉴别。以正丁醇一乙酸乙酯一异丙醇一水：为展开剂，展开，取出，晾干，喷以一萘酚硫酸溶液，在热至斑点显色清晰“”；结果：见图。由图可见，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置成都中医药大学硕士学位论文上显相同颜色的斑点，但阴性有干扰。（）方法二供试品

24、溶液的制各：取本品（批号），加倍量石油醚（），密塞，超声处理分钟，滤过，取滤液加振摇提取次，每次，合并石油醚液，蒸干，残渣加石油醚（）一乙酸乙酯（：）使溶解，即得。药材对照溶液的制备：取干姜对照药材粉末，法制各，得药材对照液（）。取干姜对照药材粉末，加倍量石油醚（），密塞，超声分钟，滤过，取滤液，蒸干，残渣加石油醚（）一乙酸乙酯（：）使溶解，得药材对照液（）。阴性对照液的制各：取缺干姜的阴性制荆，按供试品溶液的制备方法制备，即得。色谱条件：薄层板：硅胶板；厚度：点样量：展开剂：环己烷一乙醚（：）展开方式：上行展开，展距：显色：喷以香草醛一浓硫酸试剂，热数分钟，至斑点显色清晰，日光下检视。结果：

25、见图。由图可见，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置（，）上，显相同颜色的斑点，但阴性有干扰。（）方法三考虑到聚酰胺对酚类、黄酮类、醌类等成分的选择性较强，故采用聚酰胺柱层析法处理样品后进行薄层鉴别。供试品溶液的制各：取本品（批号），加倍量，醇超声处理次，每次小时，过滤，合并滤液，浓缩，得浸膏。取浸膏加适量聚酰胺拌匀，上聚酰胺柱，依次用倍柱体积水、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、，醇、乙醇、乙醇洗脱，收集洗脱液，分别减压回收乙醇，加适当浓度乙醇溶解，得号供试品溶液。按供试品溶液的制备方成都中医药太学硕士学位论文药材对照溶液的制备：取干姜对照药材，同法制成号药材对照溶液。阴性对照溶液的

26、制各：取缺干姜的阴性制剂，同法制成号阴性对照溶液。色谱条件：吸取上述溶液各，分别点于同硅胶薄层板上。针对挥发油、酚类，以环己烷一乙醚（：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，在热至斑点显色清晰（见图）；针对香豆素类，以正丁醇一乙酸一水（：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以氢氧化钾溶液，在紫外灯下检视（见图）；针对黄酮苷，以乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水（：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在紫外灯下检视（见图）；针对黄酮苷元，以甲苯一氯仿一丙酮（：）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在紫外灯下检视（见图）；针对蒽醌类，以环己烷一乙酸乙酯（：）为展开剂，展开，取出

27、，晾干，氨熏，在紫外灯下检视（见图）；结果：在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的斑点，或显相同颜色的斑点，但阴性有干扰。以上结果提示，厚朴配方颗粒中干姜的鉴别还有待于进一步研究。浸出物水溶性浸出物（）水浸出方法的选择取本品（批号），精密称定，置的锥形瓶中，精密加水，照中国药典年版一部水溶性浸出物测定法项下的冷浸法、热浸法（附录）测定。结果见表。表水浸出方法选择结果方法冷浸法热浸法水溶性浸出物（）结果表明，采用热浸法所得水溶性浸出物含量较高，故选用热浸法。成都中医药大学硕士学位论文（）样品测定取本品，精密称定，置的锥形瓶中，精密加水，照中国药典年版一部水溶性浸出物测定法项

28、下的热浸法（附录）测定。结果见表。表水溶性浸出物测定结果批号水溶性浸出物（）根据测定结果，暂定本品水溶性浸出物的含量在之间。醇溶性浸出物（）醇浸出方法的选择取本品（批号），精密称定，用乙醇作溶剂，照中国药典年版部醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法、热浸法（附录）测定。结果见表。表醇浸出方法选择结果方法醇溶性浸出物（）冷浸法热浸法结果表明，采用热浸法所得醇溶性浸出物含量较高，故选用热浸法。（）酵浸出溶剂的选择取本品（批号），精密称定，分别用、作溶剂，照中国药典年版一部醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录）成都中医药大学硕士学位论文测定。结果见表。表醇浸出溶剂选择结果溶剂乙醇乙醇醇溶性浸出物（）结果表

29、明用醇作溶齐所得醇溶性浸出物含量较高，故选用乙醇作溶剂。（）样品测定取本品，精密称定，用乙醇作溶剂，照中国药典年版一部醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录）测定。结果见表。表醇溶性浸出物测定结果批号（）醇溶性浸出物（）根据测定结果，暂定本品醇溶性浸出物的含量在之间。含量测定本品主要含厚朴酚与和厚朴酚，且为主要活性成分，故含量测定选择厚朴酚与和厚朴酚为测定指标。许雄伟、芦金清、缪海均等人研究报道用高效液相色谱法、薄层扫描法、超临界流体萃取一毛细管气相色谱法等测定厚朴酚及和厚朴酚含量“”。因高效液相色谱法具有高效、灵敏、准确的特点，故本文采用高效液相色谱法测定本品中所含厚朴酚及和厚朴酚。（）对照品

30、溶液的制备精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每含厚朴酚成都中医药大学硕士学位论文、和厚朴酚的混合溶液，即得。（）供试品溶液的制各提取方法的考察冷浸法：取本品（小样）约，平行份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，摇匀，密塞，浸渍小时，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。超声法：取本品（小样）约，平行份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。加热回流法：取本品（小样）约，平行份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，

31、称定重量，加热回流小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。精密吸取对照品溶液，供试品溶液，依选定色谱条件测定，结果见表。表供试品制备方法考察由以上实验可见：超声法提取效率高且省时，故选定超声法制备供试品溶液。提取溶剂的考察取本品（小样）约，平行份，精密称定置具成都中医药大学硕士学位论文塞锥形瓶中，分别精密加甲醇、乙醇，密塞，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，分别用甲醇、乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按选定色谱条件测定，结果见表。溶剂表提取溶剂的考察含量（）平均值（）总

32、酚含量厚朴酚和厚朴酚厚朴酚和厚朴酚（）甲醇柏乙醇由以上实验可见：甲醇溶剂提取效率高，故选定用甲醇制各供试品溶液。提取时间的考察取本品（小样）约，平行份，精密称定，置具寒锥形瓶中，分别精密加甲醇，密塞，称定重量，超声处理、，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按上述方法测定，结果见表。表提取时间的考察成都中医药大学硕士学位论文由以上实验可见：提取时间对提取效率影响不大，故选定提取制备供试品溶液。综上所述，供试品溶液制备方法为：取本品约，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减

33、失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即锝。（）色谱条件与系统适应性试验流动相选择取对照品溶液，分别以甲醇一水（：）“”、甲醇磷酸（：）。“为流动相，流速为，柱温为，检测波长为，测定，各色谱流出图见图、。由结果可见，以甲醇一水（：）为流动相，厚朴酚保留时间为，且峰形较差，对称因子为；而以甲醇一磷酸（：）为流动相，厚朴酚保留时间缩短为，且蜂形较好，对称因子为，故选择以甲醇一磷酸（：）为流动相。一柱温选择取对照品溶液，分别以。、为柱温，流动相为甲醇一磷酸（：），流速为，检测波长为，测定，各色谱流出图见图、。由结果可见，以、为柱温，厚朴酚、和厚朴酚两者均分离良好且峰形较对称，但以为柱温，厚朴酚保留时间为，和厚朴酚保留时间为，丽以。为柱温，两者保留时间缩短，厚朴酚为，和厚朴酚为，故选定柱温为。检测波长的选择取对照品溶液及供试品溶液；于扫描。结果见图。由结果可见，对照品及样品中所含厚朴酚、和厚朴酚