第四章 药物定量分析与分析方法验证ppt课件

1、第四章第四章 药物定量分析与药物定量分析与 分析方法验证分析方法验证第一节第一节 定量分析样品的前处置方法定量分析样品的前处置方法一、概述一、概述 含卤素有机药物系指药物分子构含卤素有机药物系指药物分子构造中所含卤素直接与芳环或脂肪链相造中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐盐或氢卤酸盐构造特点构造特点ArXArXRXRX一卤原子的活泼性一卤原子的活泼性1. 1. 卤原子与其相衔接的烃基的构造卤原子与其相衔接的烃基的构造1乙烯型卤和芳卤乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼CH2CH XX2烯丙型卤和苄卤烯丙型卤和苄卤 活泼活泼CH2X

2、CH2CH CH2X3卤代烷型卤代烷型 介于两者之间介于两者之间CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数n 分子中所含卤原子的个数越多，分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性加强更加明显活泼性加强更加明显3. 卤素的种类卤素的种类 活泼性活泼性IBrClF常见的含卤素有机药物常见的含卤素有机药物CCH3OHCH3CCl3三氯叔丁醇药用辅料、防腐剂三氯叔丁醇药用辅料、防腐剂含量测定碱性回流银量法含量测定碱性回流银量法COOHII

3、INHCOCH3CH3CONH泛影酸诊断用药泛影酸诊断用药含量测定碱性复原银量法含量测定碱性复原银量法碘苯酯碘苯酯- -诊断用药诊断用药含量测定氧瓶熄灭法间接碘量含量测定氧瓶熄灭法间接碘量法法CHCH3(CH2)8COOCH2CH3IOFFCH3HHOHCH3CCH2OCOCH3OOOCCH3CH3醋酸氟轻松醋酸氟轻松氟检查氧瓶熄灭法氟检查氟检查氧瓶熄灭法氟检查BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOH磺溴酞钠诊断用药磺溴酞钠诊断用药含量测定硫和溴氧瓶熄灭法含量测定硫和溴氧瓶熄灭法(二二)、含金属有机药物、含金属有机药物 含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接含金属的有机药物：金属

4、原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物物 如葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁如葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+ 3H2O酒石酸锑钾酒石酸锑钾CCHCCOOOFeOMg(C17H35COO)2硬脂酸镁硬脂酸镁富马酸亚铁富马酸亚铁CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法 适用于含金属有机药物或结适用于含金属有机药物或结合不结实的含卤素等药

5、物的分析。合不结实的含卤素等药物的分析。 适用于金属原子不直接与碳原子适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些相连的含金属有机药物或某些CM键键结合不结实的有机金属药物。结合不结实的有机金属药物。一一. 直接测定法直接测定法1.氧化复原滴定法氧化复原滴定法富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的含量测定 Ch.P (2019) 取本品约取本品约0.3g，精细称定，加稀硫酸，精细称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水冷水50ml与邻二氮菲指示液与邻二氮菲指示液2 滴，立刻用滴，立刻用硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定

6、滴定，并将滴定的结果用空白实验校正。每的结果用空白实验校正。每1ml硫酸铈滴硫酸铈滴定液定液(0.1mol/L)相当于相当于16.99mg 。C4H2FeO4原理原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe3+ NN3Fe2+ + e-NN3Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+例例 葡萄糖酸锑钠的含量测定葡萄糖酸锑钠的含量测定 Ch.PCh.P20192019 取本品约取本品约0.3g0.3g，精细称定，置具塞，精细称定，置具塞锥形瓶中，加水锥形瓶中，加水100ml100ml、盐酸、盐酸15ml15ml与碘化钾与碘化钾试液试液10ml10ml，密

7、塞、振摇后，在暗处静置，密塞、振摇后，在暗处静置10min10min，用硫代硫酸钠滴定液，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消逝，并将滴定的结果用空白实验校至蓝色消逝，并将滴定的结果用空白实验校正。正。2. 利用药物中金属离子的氧化性测定法利用药物中金属离子的氧化性测定法 K2ISbKI2Sb23H56423222OSNaNaI2OSNa2I 本法适用于含卤素有机药物构造本法适用于含卤素有机药物构造中卤素原子结合不结实的药物中卤素原子结合不结实的药物二二. 经水解后测定法经水解后测定法

8、 RX 溶剂NaOH回流水解X-银量法银量法Volhard法法铁铵钒指示剂法铁铵钒指示剂法1.碱水解后测定法碱水解后测定法例：三氯叔丁醇的含量测定例：三氯叔丁醇的含量测定 Ch.P2019本品适量本品适量乙醇、乙醇、NaOH 回流回流H2O HNO3定量过量定量过量AgNO3 (0.1mol/L)邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸二丁酯Fe3+指示剂指示剂 振摇振摇 NH4SCN(0.1mol/L)滴定滴定T = 6.216 mg / mlCCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2OAgNO3 + NH4SCNAgSCN +

9、 NH4NO3淡棕红色淡棕红色(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 定量过量定量过量过量的SCN-将发生AgClSCN AgSCN +Cl不能出现不能出现Fe(SCN)2红色，耗费红色，耗费NH4SCN过量，采取消除误差的方法：过量，采取消除误差的方法：将生成的将生成的AgCl过滤，再滴定，繁琐；过滤，再滴定，繁琐；滴定前参与一定量的有机溶剂，将滴定前参与一定量的有机溶剂，将AgCl包裹。包裹。三三. .经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法 适用于含金属及含适用于含金属及

10、含X、N、S、P等有机药等有机药物构造中的待测原子与碳原子结合结实者。物构造中的待测原子与碳原子结合结实者。 高温炽灼法和氧瓶熄灭法高温炽灼法和氧瓶熄灭法 一干法破坏一干法破坏2. 氧瓶熄灭法氧瓶熄灭法运用于含卤素、硫、磷、硒等有机药物的运用于含卤素、硫、磷、硒等有机药物的分析分析1原理原理 2RXOHXNaX 燃吸收溶液 本法特点是简便、快速、破坏完本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析全，尤其适用于微量样品的分析 2 仪器与资料仪器与资料 仪器安装仪器安装 熄灭瓶为熄灭瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥形瓶；瓶塞空硬质玻璃锥

11、形瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状下端呈螺旋状或网状,长度长度为瓶身长的为瓶身长的2/3称样用资料及称样称样用资料及称样 A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. 液体样品液体样品 无灰滤纸纸袋无灰滤纸纸袋 C. C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹裹吸收液吸收液 A. 作用：吸收液的作用是将样品经作用：吸收液的作用是将样品经熄灭分解所产生的各种价态的卤素、熄灭分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为硫、氮、硒

12、等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态一定的便于测定的价态氧气氧气B. 吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 氯氯 H2O-NaOH溶液溶液溴溴 H2O-NaOH-SO2饱和溶液饱和溶液碘碘 H2O-NaOH-SO2饱和溶液饱和溶液硫硫 H2O2 溶液溶液H2O磷磷 H2O HNO3(少量少量硒硒 HNO3硝酸溶液硝酸溶液3操作方法操作方法 吸收液吸收液熄灭瓶熄灭瓶充充O212玻片盖好玻片盖好 样品样品无灰滤纸无灰滤纸按折线包好按折线包好 将纸包夹在铂丝的螺旋将纸包夹在铂丝的螺旋中中(尾部在外尾部在外)点火点火 插入熄灭瓶中插入熄灭瓶中压住瓶塞压住瓶塞充分熄灭充分熄灭 灰分入吸收液灰分入吸收

13、液 吸收产生的烟雾吸收产生的烟雾充分振摇充分振摇 放置放置15 冲洗瓶塞及铂丝冲洗瓶塞及铂丝合并洗液合并洗液 同法另作空白实验同法另作空白实验98：140. 氧瓶熄灭法中的安装有A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 磨口软质玻璃锥形瓶C. 铂丝D. 铁丝E. 铝丝96：13399x： 选择氧瓶熄灭法所必备的实验物品A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 铂丝C. 普通滤纸D. 氢气 E. 无灰滤纸99：76氧瓶熄灭法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼饱和液E. NaOH硫酸肼饱和液99：134. 氧瓶熄灭法可用于A. 含卤素有机药物的含量测

14、定B. 醚类药物的含量测定C. 检查甾体激素类药物中的氟D. 检查甾体激素类药物中的硒E. 芳酸类药物的含量测定二湿法破坏二湿法破坏 凯氏定氮法：以硫酸硫酸盐法为根底的凯氏定氮法：以硫酸硫酸盐法为根底的含氮有机药物定量分析方法。含氮有机药物定量分析方法。 主要运用含有机氨基或酰胺构造的药物主要运用含有机氨基或酰胺构造的药物含量测定。含量测定。 Ch.P收载常量法含氮：收载常量法含氮：2530mg,500ml和半微量法和半微量法12mg,3035ml。NNOOCH3HH+H2SO4+CO2+H2O(NH4)2SO4 原理原理 以扑米酮为例以扑米酮为例 1消解消解(NH4)2SO4+HNH32+N

15、a2SO42 NaOH +2H2O(2)碱化蒸馏水蒸汽碱化蒸馏水蒸汽3酸溶液吸收氨酸溶液吸收氨NH3+H3BO3NH4H2BO2(4) 酸滴定酸滴定H3BO3NH4H2BO+2H2SO4(NH4)2SO4+2半微量凯氏定氮法半微量凯氏定氮法1.参与硫酸钾或者无水硫酸钠提高硫酸的沸点。参与硫酸钾或者无水硫酸钠提高硫酸的沸点。2.硫酸铜作为催化剂。硫酸铜作为催化剂。第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点Ch.PCh.P二部含量测定方法主要二部含量测定方法主要: :容量分析法容量分析法光谱分析法光谱分析法色谱分析法色谱分析法一、容量分析一、容量分析(一一)、特点、特点 测定准确度高，相对

16、误差测定准确度高，相对误差0.2%；操作简；操作简便快速；仪器简单，廉价；便快速；仪器简单，廉价； 用于高含量或中等含量组分的测定，运用用于高含量或中等含量组分的测定，运用于原料药的含量测定；于原料药的含量测定； 专属性差。专属性差。(二二) 计算计算1、滴定度、滴定度 每每1ml规定浓度的滴定液所规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量相当的被测药物的质量mg。如：每如：每1ml的碘滴定液的碘滴定液0.05mol/L相当于相当于8.806mg的的维生素维生素C。2. 滴定度的计算滴定度的计算a A + b B c C + d D 被测物被测物 滴定液滴定液a A + b B c C + d D

17、 WA WBABABbWaWMMBABWWMABABBAaaaM=nM=mVMbbbaTmM(mg/ml)b滴定液的摩滴定液的摩尔浓度尔浓度被测物的被测物的分子量分子量m规碘滴定液规碘滴定液0.05mol/Lm实碘滴定液实碘滴定液0.05150mol/L 在实践任务中，配制的滴定液的摩在实践任务中，配制的滴定液的摩尔浓度与药典规定的有一定的误差规尔浓度与药典规定的有一定的误差规定值定值5 5T实T规m实m规F为校正因数为校正因数T实T规 m实m规= T规 F配制的高氯酸滴定液配制的高氯酸滴定液(0.0981mol/L)(0.0981mol/L)每每1ml 1ml 高氯酸滴定液高氯酸滴定液(0.

18、1mol/L)(0.1mol/L)相相当于当于32.09mg32.09mg的的C17H20N2S.HCl C17H20N2S.HCl 。 F=?3.百分含量的计算百分含量的计算 直接滴定法直接滴定法a . 不做空白实验不做空白实验例如：阿司匹林直接酸碱滴定法例如：阿司匹林直接酸碱滴定法W 供试品取量供试品取量V 耗费滴定液的体积耗费滴定液的体积F 滴定液浓度校正因数滴定液浓度校正因数T实践滴定度实践滴定度T 规定滴定度规定滴定度%100%100%WVFTWTV含量b. 做空白实验做空白实验VVTF%W0100（）含 量V0 空白实验耗费滴定液的体积 取本品约取本品约0.3g0.3g，精细称定，

19、加冰醋，精细称定，加冰醋酸酸10ml10ml与醋酸汞试液与醋酸汞试液4ml 4ml ，温热至完，温热至完全溶解，放冷至室温，加结晶紫指示全溶解，放冷至室温，加结晶紫指示液液1 1滴，用高氯酸滴定液滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴滴定，至溶液显蓝色，并将滴定的结果定，至溶液显蓝色，并将滴定的结果用空白实验校正。每用空白实验校正。每1ml 1ml 高氯酸滴定高氯酸滴定液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于32.09mg32.09mg的的C17H20N2S.HCl C17H20N2S.HCl 。 盐酸异丙嗪非水滴定法盐酸异丙嗪非水滴定法 间接滴定法间接滴

20、定法生成物滴定法和剩余滴定法生成物滴定法和剩余滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 例如：葡萄糖酸锑钠的含量测定例如：葡萄糖酸锑钠的含量测定 取本品约取本品约0.3g0.3g精细称定精细称定置碘瓶置碘瓶100ml+15mlHCl+KI100ml+15mlHCl+KI试液试液10ml 10ml 硫代硫酸钠滴定液硫代硫酸钠滴定液0.1mol/L)0.1mol/L)滴定滴定 空白实验校正。空白实验校正。5+3+22-2-22346Sb2ISbII2S O2I2S O 反响摩尔比：本品：碘：硫代硫酸钠反响摩尔比：本品：碘：硫代硫酸钠=1:1:2=1:1:2a1TmM0.1 121.76=6.088(mg/

21、ml)b20VV )TF100%W（含量b. b. 剩余量滴定法回滴定法剩余量滴定法回滴定法以司可巴比妥钠的含量测定为例以司可巴比妥钠的含量测定为例10ml溶解溶解取本品取本品0.1g 250ml碘瓶碘瓶精细加溴滴定液精细加溴滴定液0.05mol/L25ml+HCl 5ml 密塞振摇密塞振摇1分，暗处放置分，暗处放置15分分微开瓶微开瓶塞加塞加KI T.S 10ml 密塞摇匀密塞摇匀 Na2S2O3滴滴定液定液0.1mol/L滴定滴定近终点淀粉指示近终点淀粉指示蓝色消逝蓝色消逝 空白实验校正。空白实验校正。CCH2=CH-CH2C2H5CC2H5CH2CHCH2BrBr+Br2定量过量定量过量

22、Br2 + 2KI 2KBr + I2I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O61 ： 2 1 ： 1司可巴比妥司可巴比妥 Br2 Na2S2O3 = 1 1 2对于溴滴定液对于溴滴定液空白空白样品样品V0SVRV被测药物的量被测药物的量BrSBrBr(VV )TF2220对于硫代硫酸钠滴定液对于硫代硫酸钠滴定液空白空白样品样品V0SVRV被测药物的量被测药物的量NaS OSNaS ONaS O(VV )TF23232 30BrNa S OaTMm.(mg/ml)baTMm.(mg/ml)b22 231260 230 0513 0111260 230 113 012SB rN a

23、 s oVVTF%W22230100（）含 量二、光谱分析法二、光谱分析法1.特点特点灵敏度高，可达灵敏度高，可达104107gml；准确度高，相对误差为准确度高，相对误差为2%5%；运用较广。运用较广。一紫外可见分光光度法一紫外可见分光光度法2、测定的根本要求、测定的根本要求 仪器校正和检定；仪器校正和检定； 溶剂要求符合规定；溶剂要求符合规定； 吸收波长应在该种类项下规定的波长吸收波长应在该种类项下规定的波长2nm以内以内,以吸光度最大作为检测波长。以吸光度最大作为检测波长。 配制的样品浓度应使吸收度在配制的样品浓度应使吸收度在0.30.7之间；之间； 狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供

24、狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再添加为准。试品的吸收度不再添加为准。3. 测定方法测定方法 对照品比较法对照品比较法RRA xC xAC 分别配制供试品溶液分别配制供试品溶液x和和对照品溶液对照品溶液r，对照品溶液中，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的中被测成分规定量的10010%CxD%W100含量%式中：式中：Cx为供试品溶液的浓度；为供试品溶液的浓度； Ax为供试品溶液的吸光度；为供试品溶液的吸光度； CR为对照品溶液的浓度；为对照品溶液的浓度； AR为对照品溶液的吸光度；为对照品溶液的吸光度； D为稀释体积；为

25、稀释体积； W为供试品取样量。为供试品取样量。【含量测定】【含量测定】 取本品约取本品约50mg50mg，精细称定，置，精细称定，置50ml50ml量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取度，摇匀，精细量取5ml 5ml ，置另一，置另一50ml50ml量瓶量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀， 照分光照分光光度法附录光度法附录 A A，在，在280nm 280nm 的波优点测的波优点测定吸收度；另精细称取炔雌醚对照品适量，定吸收度；另精细称取炔雌醚对照品适量，用无水乙醇稀释制成每用无水乙醇稀释制成每1ml 1ml 中

26、约含中约含100g100g的的溶液，同法测定，计算，即得。溶液，同法测定，计算，即得。 炔雌醚炔雌醚知：Ax=0.654 Ar=0.631 W=0.05213g求：含量？97.5102.5十一酸睾酮贝诺酯双氢青蒿素水杨酸镁卡马西平利血平青蒿素炔雌醚盐酸占替诺酞丁安羟甲香豆素联苯双酯奥沙西泮CxD%W100含量%原料药百分含量：原料药百分含量：2.吸收系数法吸收系数法%XXcmAElC11 按各种类项下的方法配置供试品溶液，按各种类项下的方法配置供试品溶液，在规定的波优点测定其吸收度，再以该种类在规定的波优点测定其吸收度，再以该种类在规定条件下的吸收系数计算含量。在规定条件下的吸收系数计算含量。

27、 吸收系数通常大于吸收系数通常大于100，仪器要校正和验证，仪器要校正和验证g100mlX%cmCxD%WAD%EWl11100100100含 量%cmAxCxEl11100%cmE11为供试品在规定条件下的吸收系数为供试品在规定条件下的吸收系数(g/ml)维生素维生素2 2 【含量测定】【含量测定】 避光操作。取本品约避光操作。取本品约75mg75mg，精细称定，置烧杯中，加冰醋酸精细称定，置烧杯中，加冰醋酸1ml 1ml 与水与水75ml75ml，加热溶解后，加水稀释，放泠，移，加热溶解后，加水稀释，放泠，移置置500ml500ml量瓶中，再加水稀释至刻度，摇量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀

28、匀 ；精细量取；精细量取10ml10ml，置，置100ml 100ml 量瓶中，加量瓶中，加1.4 1.4 醋酸钠溶液醋酸钠溶液7ml 7ml ，并用水稀释至刻，并用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法附录度，摇匀，照分光光度法附录 B B，在在444nm 444nm 的波优点测定吸收度，按的波优点测定吸收度，按C17H20N4O6C17H20N4O6的吸收系数的吸收系数 为为323 323 计计算，即得。算，即得。 %cmE11知：知：Ax=0.479 W=0.07483g求：求：VB2含量含量%？固体制剂含量标示百分含量固体制剂含量标示百分含量DW%WB100XC标示量标示量W为单位制剂的平均

29、分量或装量为单位制剂的平均分量或装量B 为制剂的标示量为制剂的标示量液体制剂的含量标示百分含量液体制剂的含量标示百分含量DV%VB100XC标示量标示量V为单位制剂的标示装量为单位制剂的标示装量V 为供试品的量取体积为供试品的量取体积B 为制剂的标示量为制剂的标示量 公式方法原料含量固体制剂液体制剂容量法直接滴定直接空白剩余滴定紫外法对照品比较法吸收系数法将计算公式填入下表，并每类编一道计算题将计算公式填入下表，并每类编一道计算题3. 计算分光光度法计算分光光度法4. 比色法：比色法： 空白用同体积的溶剂替代对照品空白用同体积的溶剂替代对照品或供试品溶液，依次参与等量的相应或供试品溶液，依次参

30、与等量的相应试剂，并用一样的方法处置。试剂，并用一样的方法处置。 特点：特点： 灵敏度高、选择性强、所需试样量少；灵敏度高、选择性强、所需试样量少； 广泛运用于痕量分析，特别适用于生广泛运用于痕量分析，特别适用于生物体液中药物或代谢产物的分析；物体液中药物或代谢产物的分析； 干扰要素较多，影响测定的准确度和干扰要素较多，影响测定的准确度和精细度。精细度。二荧光分析法二荧光分析法对照品比较法对照品比较法2. 含量测定含量测定iibirrbRRCCrRRCi为供试品浓度为供试品浓度Ri、Rib分别为供试品溶液和供试分别为供试品溶液和供试品空白溶液的读数品空白溶液的读数Cr为对照品溶液的浓度为对照品

31、溶液的浓度Rr、Rrb分别为对照溶液和对照空分别为对照溶液和对照空白溶液的读数白溶液的读数三三.色谱分析法色谱分析法一高效液相色谱法一高效液相色谱法 本法具有高灵敏度本法具有高灵敏度10121015、高选择性、高性能、高速度及运、高选择性、高性能、高速度及运用广泛。用广泛。1. 特点特点2. Ch.P的要求的要求流动相：常用甲醇水、乙腈水流动相：常用甲醇水、乙腈水色谱柱：常用色谱柱：常用C18柱，其次柱，其次C8柱；适柱；适 用的用的pH范围范围28进样量：进样量：20l，也有，也有10l或或5l；柱温：除另有规定外，为室温；柱温：除另有规定外，为室温；检测器：除另有规定外，紫外吸收检测器。检

32、测器：除另有规定外，紫外吸收检测器。反相色谱：反相色谱：C18、C8、氰基、氨基、氰基、氨基正相色谱：硅胶正相色谱：硅胶离子交换色谱：离子交换填充剂填充离子交换色谱：离子交换填充剂填充剂剂分子排阻色谱：凝胶或高分子多孔微分子排阻色谱：凝胶或高分子多孔微球填充剂球填充剂立体异构体色谱：手性键合填充剂立体异构体色谱：手性键合填充剂检测器：紫外、二极管阵列、荧光、检测器：紫外、二极管阵列、荧光、 示差折光、蒸发光散色、示差折光、蒸发光散色、 电化学、质谱电化学、质谱选择性检测器：紫外、二极管阵列、选择性检测器：紫外、二极管阵列、荧荧 光、电化学、质谱光、电化学、质谱通用型检测器：示差折光、蒸发光散通

33、用型检测器：示差折光、蒸发光散色色不可改动的条件不可改动的条件 可改动的条件可改动的条件固定相种类固定相种类 固定相型号、规格固定相型号、规格流动相组分流动相组分 流动相各组分的比流动相各组分的比 例、流速例、流速检测器类型检测器类型 柱温、进样量、检柱温、进样量、检 测器灵敏度测器灵敏度3. 系统顺应性实验系统顺应性实验 色谱柱的实际板数色谱柱的实际板数nRh /tn.W225 54 分别度分别度RRttRWW21122R 1.5 拖尾因子拖尾因子.hWTd0 0512T=0.95 1.05 反复性反复性 取各种类项下的对照品溶取各种类项下的对照品溶液，延续进样液，延续进样5次，除另有规次，

34、除另有规定外，其峰面积丈量值的相对定外，其峰面积丈量值的相对规范差应不大于规范差应不大于2.0%iXXSDn21SRSD100%X4. 测定法测定法 外标法外标法 分别配制供试品溶液分别配制供试品溶液x和对照品溶液和对照品溶液r，对照品，对照品溶液的浓度为供试品溶液浓度溶液的浓度为供试品溶液浓度的的10%。测得相应的峰面积。测得相应的峰面积为为Ax和和Ar。 RRA xC xACCxD%W100含量%讨论：讨论： 外标法操作、计算简单；外标法操作、计算简单； 要务虚验条件稳定：灵敏度、流动要务虚验条件稳定：灵敏度、流动相流速、组成等；相流速、组成等；采用定量环或自动进样为好，进样采用定量环或自

35、动进样为好，进样量准确，有较好的反复性，坚持量准确，有较好的反复性，坚持溶液浓度恒定，减少进样误差。溶液浓度恒定，减少进样误差。 内标法内标法 在同一次实验操作中，被测在同一次实验操作中，被测物的质量呼应值与内标物的质量物的质量呼应值与内标物的质量呼应值的比值是恒定的，不随进呼应值的比值是恒定的，不随进样体积或操作期间所配制的溶液样体积或操作期间所配制的溶液浓度的变化而变化，根据这一原浓度的变化而变化，根据这一原理可以经过内标法得到未知样品理可以经过内标法得到未知样品较准确的定量结果。较准确的定量结果。 内标法加校正因子内标法加校正因子 配制校正因子测定液配制校正因子测定液对照品对照品CR 内

36、标物内标物 CS 混合混合进样进样ARAS 配制供试品溶液配制供试品溶液供试品供试品Cx)内标物内标物 CS )混合混合进样进样AxAS在给定的色谱条件下在给定的色谱条件下RRAs/CsfA /C含内标物的对照品溶液含内标物的对照品溶液As /CsfAx/Cx含内标物的供试品溶液含内标物的供试品溶液校正因子校正因子CxD%W100含量%SSXX/CAAfC 内标对比法内标对比法如：如：CS = CSXSXRRSA /AC CA /A讨论：讨论： 内标物的选择：化学性质稳定，在到达内标物的选择：化学性质稳定，在到达分别度要求前提下，分别度要求前提下，tR与供试品的接与供试品的接近；近； 内标法较

37、外标法准确，但操作和计算较内标法较外标法准确，但操作和计算较复杂；复杂；二气相色谱法二气相色谱法 原理：原理： 样品中各组分在固定样品中各组分在固定相与载气间分配，由于各组相与载气间分配，由于各组分的分配系数不同而分别。分的分配系数不同而分别。2.普通要求普通要求Ch.P2019 载气：载气：N2 ； 进样：直接进样或顶空进样；进样：直接进样或顶空进样； 色谱柱：填充柱、毛细管柱；色谱柱：填充柱、毛细管柱； 进样温度：直接进样，高于柱温进样温度：直接进样，高于柱温3050； 进样量：不大于数微升；进样量：不大于数微升； 检测器：常用氢火焰离子化检测检测器：常用氢火焰离子化检测FID，检，检测温

38、度普通高于柱温，不得低于测温度普通高于柱温，不得低于150，以免，以免水气冷凝，常用水气冷凝，常用250300。不可改动的条件不可改动的条件 可改动的条件可改动的条件固定液种类固定液种类检测器类型检测器类型特殊指定的特殊指定的色谱柱资料色谱柱资料 色谱柱规格、型色谱柱规格、型号、固定液涂布号、固定液涂布浓度、载气流速、浓度、载气流速、检测器灵敏度、检测器灵敏度、柱温、进样量等。柱温、进样量等。3. 系统顺应性实验参见系统顺应性实验参见HPLC4. 测定法测定法 由于由于GC进样在进样在1l左右，易左右，易产生误差，故常采用内标法产生误差，故常采用内标法第三节第三节 药质量量规范分析方法验证药质

39、量量规范分析方法验证 一、目的及要求一、目的及要求 证明所采用的分析方法适宜于相应的检测要证明所采用的分析方法适宜于相应的检测要求。药质量量规范起草时，合成工艺变卦、制剂求。药质量量规范起草时，合成工艺变卦、制剂的组分变卦、原分析方法进展修订时，分析方法的组分变卦、原分析方法进展修订时，分析方法需阅历证。方法验证过程和结果均应记载在药品需阅历证。方法验证过程和结果均应记载在药品规范起草和修订阐明中。规范起草和修订阐明中。 二、需验证的分析工程二、需验证的分析工程1. 1. 鉴别实验；鉴别实验；2. 2. 杂质定量或限制检查；杂质定量或限制检查；3. 3. 原料或制剂中有效成分含量测定；原料或制

40、剂中有效成分含量测定；4. 4. 制剂中其它成分降解产物、防腐剂等的制剂中其它成分降解产物、防腐剂等的测定；测定；5. 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。测试方法。 验证内容有：准确度、精细度验证内容有：准确度、精细度反复性、中间精细度和重现性、反复性、中间精细度和重现性、专属性、检测限、定量限、线性、范专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性围和耐用性三、验证内容三、验证内容 一 准确度accuracy 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率测定回收率R Rrecoveryrecove

41、ry的详细的详细方法可采用方法可采用“回收实验法和回收实验法和“加样回加样回收实验法。收实验法。 1. 含量测定方法含量测定方法1原料药的含量测定原料药的含量测定用知的对照品或供试品进展测定用知的对照品或供试品进展测定回收率回收率测得量测得量参与量参与量1001. 含量测定方法含量测定方法2制剂的含量测定制剂的含量测定用知的对照品或供试品进展测定；用知的对照品或供试品进展测定；向知制剂含量参与向知制剂含量参与“知量的被测物。知量的被测物。回收率回收率 测得量本底量测得量本底量 参与量参与量100 规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9 9次测定结次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各果评

42、价，如制备三个不同浓度样品各测三次。测三次。2.2.数据要求数据要求回收率目的的普通要求回收率目的的普通要求vUV、HPLC 回收率：回收率： 98102v RSD2v容量分析容量分析 回收率：回收率： 99.7100.3v RSD0.2 中药分析的准确度普通用加样回中药分析的准确度普通用加样回收实验衡量。中药回收率普通要求在收实验衡量。中药回收率普通要求在95105%范围内，有些方法操作步骤范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在繁多时，可要求在90110%范围内。范围内。RSD普通在普通在3%以内。以内。 RPHPLCRPHPLC二元梯度洗脱法测定二元梯度洗脱法测定鱿降钙喷鼻剂的含量及有关

43、物质鱿降钙喷鼻剂的含量及有关物质 回收率回收率按处方量配制适量的空白辅料溶液，分别参与按处方量配制适量的空白辅料溶液，分别参与处方量处方量80%80%，100%100%，120%120%的的SCTSCT各各3 3份，按含量份，按含量测定方法测定测定方法测定SCTSCT的含量，与参与量比较，计的含量，与参与量比较，计算 得 回 收 率 ， 平 均 回 收 率算 得 回 收 率 ， 平 均 回 收 率 ( n = 3 )( n = 3 ) 分 别 为分 别 为100.4%(RSD)=1.0%)100.4%(RSD)=1.0%)，99.5%(RSD=1.2%)99.5%(RSD=1.2%)，99.9

44、%(RSD)=1.6%)99.9%(RSD)=1.6%)。回收率实验回收率实验取本品研细，精细称取约取本品研细，精细称取约2.5g2.5g，分别加，分别加人高、中、低人高、中、低(160(160、200200、240g)240g)不同不同量的延胡索乙素对照品，各量的延胡索乙素对照品，各2 2份，按含份，按含量测定方法进展测定，量测定方法进展测定，3 3者的平均回收者的平均回收率和相对偏向分别为率和相对偏向分别为97.8%97.8%，0.51%;0.51%;97.6%97.6%，0.41%;95.8%0.41%;95.8%，0.35%0.35%，总平均，总平均回收率为回收率为98.1%98.1%

45、。高效液相色谱法测定复方胃宁片中延胡索高效液相色谱法测定复方胃宁片中延胡索乙素的含量乙素的含量 二精细度precision 是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。1.精细度表示方法精细度表示方法1平均偏向平均偏向 ：ixxdn2相对平均偏向相对平均偏向RD：dRD%X100d两份平行样：两份平行样：ABRD%AB100最大相对偏向允许值最大相对偏向允许值容量分析容量分析 0.3分量分析分量分析 0.5仪器分析仪器分析 33.规范偏差SD或S12nxxSi4.相对规范偏差相对规范偏差RSD，也称变异系数也称变异系数CV%100 xSRSD1反复性 在一样条件下，

46、由同一个分析人员测定所得结果的精细度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进展评价。2. 精细度的内容精细度的内容 2中间精细度 同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精细度。 调查随机变动要素的影响。变动要素为不同日期、不同分析人员、不同设备。 3. 重现性 不同实验室，不同分析人员测定结果的精细度。当分析方法将被法定规范采用时，应进展重现性实验。如建立药典分析方法时经过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草阐明中。 目的普通要求目的普通要求容量分析：容量分析：n6 RSD0.2

47、HPLC： n6 RSD2UV: n6 RSD1HPLCHPLC法分析罗红霉素及其片剂含量和相关物质法分析罗红霉素及其片剂含量和相关物质精细度和准确度的测定精细度和准确度的测定取罗红霉素的片剂，研细，分别按取罗红霉素的片剂，研细，分别按“2.32.3项制备项制备6 6份供试品溶液，在确定的色谱条件下，分别进份供试品溶液，在确定的色谱条件下，分别进样样20L20L，记录色谱图，计算其含量，记录色谱图，计算其含量，RSDRSD为为0.95%0.95%。采用加样回收的方法，将罗红霉素片研。采用加样回收的方法，将罗红霉素片研细，分别精细称定细，分别精细称定1111，1414，17mg17mg，再相应地

48、参与，再相应地参与罗红霉素对照品罗红霉素对照品8 8，1010，12mg12mg，置，置10mL10mL量瓶中，量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，分别进样用流动相溶解并稀释至刻度，分别进样20L20L，记录色谱图，计算在低、中、高浓度下的平均回记录色谱图，计算在低、中、高浓度下的平均回收率土收率土RSD(n=3)RSD(n=3)分别为分别为99.01%99.01%士士1.0%1.0%，99.2599.25士士0.98%0.98%，99.23%99.23%士士1.0%1.0%。 三专属性三专属性specificityspecificity 指有其他成分杂质、降解物、指有其他成分杂质、降解物、辅料

49、等能够存在情况下，采用的方辅料等能够存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。法能准确测定出被测物的特性。 鉴别反响、杂质检查、含量测定鉴别反响、杂质检查、含量测定方法均应调查其专属性。方法均应调查其专属性。 对照品对照品 75.15h 75.15h破坏液破坏液 供试品供试品 a SCP;b a SCP;b降钙素降钙素C C 四 检测限limit of detection， LOD 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限制实验参数，无需定量测定。1非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用知浓度的被测物，实验出能被可用知浓度的被测物，实验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。靠地检测出的最

50、低浓度或量。 2. 仪器分析时的测定法仪器分析时的测定法如：HPLC S/N=33数据要求数据要求 应附测试图谱，阐明测试过程和检应附测试图谱，阐明测试过程和检测限结果。测限结果。 五定量限1imit of quantitation，LOQ 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精细度。杂质和降解产物定量时，应确定杂质和降解产物定量时，应确定定量限。定量限。 常用信噪比法确定定量限，普通以信噪比S/N为10 1时相应的浓度或注入仪器的量进展确定。 六 线性 在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。UV:

51、n57 相关系数相关系数r0.999HPLC: n57相关系数相关系数r0.999 七范围七范围 指到达一定精细度、准确度和指到达一定精细度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。低限浓度或量的区间。八八 耐用性耐用性 指测定条件稍有变动指测定条件稍有变动时，结果不受影响的接受程度，为常规时，结果不受影响的接受程度，为常规检验提供根据。检验提供根据。 变动要素：被测溶液的稳定性，变动要素：被测溶液的稳定性，流动相的组成、不同型号的色谱柱、流动相的组成、不同型号的色谱柱、pHpH、柱温、流速等。柱温、流速等。 项目项目内容内容鉴别鉴别 杂质测定杂

52、质测定含量测定及溶含量测定及溶出量测定出量测定定量定量限度限度准确度准确度- -+ +- -+ +精密度精密度重复性重复性- -+ +- -+ +中间精密中间精密度度- -+ +- -+ +专属性专属性+ + + + +检测限检测限- - -+ +- -定量限定量限- -+ +- - -线性线性- -+ +- -+ +范围范围- -+ +- -+ +耐用性耐用性+ + + + +六、各种含量测定方法对效能目的的六、各种含量测定方法对效能目的的要求要求 1. 1. 容量分析法：用原料药精制品容量分析法：用原料药精制品( (含量含量99.599.5) )或对照品调查方法的或对照品调查方法的精细度，相对规范差普通应不大于精细度，相对规范