尿核基质蛋白22在膀胱移行细胞癌诊断及术后复发监测中的应用

1、    尿核基质蛋白22在膀胱移行细胞癌诊断及术后复发监测中的应用            作者：苏大军，宋力时间：2007-11-22 11:37:00                     【摘要】  目的： 探讨尿核基质蛋白

2、22（NMP22）检测对膀胱移行细胞癌诊断及术后复发监测中的应用价值. 方法：采用酶联免疫法（ELISA）检测45例膀胱癌、30例非膀胱癌泌尿系疾病、20例健康志愿者尿中NMP22水平并进行比较. 结果： 膀胱癌组NMP22平均为38.7×103U/L高于非膀胱癌泌尿系疾病组（8.7×103U/L）和健康志愿者组（7.1×103U/L, P<0.05)，复发病例（30.7×103U/L）高于未复发患者(6.1×103U/L, P<0.05). 结论： 尿NMP22对膀胱移行细胞癌具有高灵敏度和无创伤性，是检测膀胱移行细胞癌的有效标志

3、物，并可用于判断术后有无复发. 【关键词】  尿核基质蛋白22；癌，移行细胞；膀胱肿瘤；诊断；复发监测0引言膀胱移行细胞癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其中70%为浅表肿瘤，且有易复发的特征，5 a内复发的可能性为50%70%，大多数肿瘤在1 a复发1. 早期发现，定期术后随访，检测复发是膀胱肿瘤成功治疗的关键. 目前临床上常用的诊断及复查方法为膀胱镜检查、尿脱落细胞检查及B超检查. 膀胱镜检查具有侵袭性，许多患者难以接受；尿脱落细胞检查及B超检查虽非侵入性，但灵敏度不高2. 近年来随着分子生物学的发展，尿核基质蛋白22（NMP22）成为临床研究较多的指标之一3. 我们对自膀胱移行

4、细胞癌患者进行了尿NMP22的检查，并进行手术后的复发与未复发的动态观察.1对象和方法1.1对象200401/200512收治膀胱癌组患者45例，男35例，女10例；年龄2981（平均55.7）岁. 其中行膀胱部分切除术12例，TURBT32例. 膀胱癌术后随诊3 mo2 a. 术后20例复发，25例未复发，复发率44.4%. 均有血尿，行膀胱镜检+活检诊断为膀胱移行细胞癌，所有复发病例均经病理证实. 非膀胱癌泌尿系疾病30例，男16例，女14例. 年龄3085（平均47.8）岁. 其中尿石症10例，泌尿系感染（单纯）6例，前列腺增生伴出血8例，前列腺癌1例，肾癌4例，尿道狭窄1例. 健康志愿

5、者20例，男13例，女7例，年龄3569（平均53.5）岁.1.2方法所有尿样均在行膀胱镜检、导尿等腔内操作前于08:0012:00一次性收集. 标本分2份： 1份查NMP22，1份行尿脱落细胞学检查. 查NMP22的尿样标本收集后避光保存，立即转入含有防腐剂的尿样收集瓶500 r/min离心15 min后取上清夜转入塑料试管中320保存. 实验 NMP22试剂盒由美国Matritech公司生产，严格按试剂盒说明书操作，采用双抗体夹层免疫酶标法用酶标仪测得吸光度，建立标准曲线，取得样品NMP22的测定值（单位U/L）.    统计学处理：参照文献以10.0

6、5;103 U/L为NMP22检测临界值，所有数据采用SPSS统计软件包处理. 尿NMP22各组之间比较采用非参数秩和检验. P<0.05为有统计学差异.2结果2.1NMP22含量45例膀胱癌NMP22为7.9×103158.0×103U/L，非膀胱癌泌尿系疾病MP22为2.1×10317.1×103U/L，健康志愿者NMP22为1.4×10310.3×103U/L，膀胱癌患者尿中NMP22浓度高于非膀胱癌泌尿系疾病和健康志愿者（P<0.05）.2.2NMP22与尿脱落细胞学以10.0×103U/L为NMP22检

7、测阳性临界值，NMP22与尿脱落细胞学诊断膀胱癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值有一定差异（表1），NMP22敏感性高于尿脱落细胞学检查（P<0.01），但特异性稍低.表1NMP22和尿脱落细胞学敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值（略）2.3NMP22在膀胱癌术后复发中的检测45例膀胱癌术后复发20例患者尿 NMP22中位数为30.7×103U/L，25例未复发患者尿 NMP22中位数为6.1×103U/L（P<0.01）. 以10.0×103U/L为最适临界值，复发病例NMP2210.0×103U/L者15例，NMP22<

8、10.0×103U/L者5例；未复发病例NMP2210.0×103U/L者5例，NMP22<10.0×103U/L者20例，敏感性75%，特异性80.0%.3讨论核基质蛋白（nuclear matrix protein, NMP）是核基质的重要组成部分，有多种结构和功能，并且有较强的组织器官特异性4，最早于由Berezney等5报道. NMP22属于核基质蛋白的一种，又称为有丝分裂器蛋白. 是构成细胞核网状结构的一个组成部分，与DNA的复制、转录、RNA合成及基因表达的调控有关. NMP22为核有丝分裂装置蛋白（NuMAP）的一个亚单位. NuMAP与有丝分

9、裂期间纺锤体的形成有关，其主要供能为在细胞有丝分裂末期使染色体正确、均匀地分配到子代细胞6. 因此，NMP22与细胞增殖活跃的组织关系密切. 据报道，体外培养的膀胱癌细胞内NMP22浓度较正常膀胱移行上皮细胞至少增加25倍7. 由于膀胱癌中NMP22在细胞凋亡中以可溶性复合物片断形式随尿排出，而这个被释放的片断可通过双单抗酶联免疫法予以测定，检测限达到pg级，这使得尿的NMP22成为膀胱肿瘤的特有标记物. Carpinito等8报道移行细胞癌患者组尿中NMP22浓度明显高于良性泌尿外科组和健康人群，初步认为NMP22作为一种筛选膀胱癌的瘤标在临床上是可行的. 我们用同样的方法检测了45例膀胱癌

10、患者尿中NMP22浓度为38.7×103U/L，明显高于非膀胱癌泌尿系疾病组的8.7×103U/L和正常对照组的7.1×103U/L，结果再次证明NMP22是尿液中诊断膀胱移行细胞癌的良好标记物. SanchezCarbayo等9对187例血尿患者进行NMP22检测，以10.0×103U/L为最适临界值诊断膀胱癌的敏感性、特异性分别为61.2%和89.9%，而细胞学检查敏感性为35.4%. 本组NMP22检测采用10.0×103U/L为最适临界值敏感性与文献报道相似. 本研究表明NMP22具有较高的敏感性，明显高于尿脱落细胞学检查，可作为膀胱镜

11、检查的辅助手段，对膀胱癌患者的筛查十分有利. 但其特异性偏低，其原因可能为某些感染、结石、异物、创伤等可引起尿路上皮损伤，引起细胞破损导致尿中NMP22升高，并且以10.0×103U/L这一标准为临界值亦使特异性有所下降. 因此相对于传统的尿脱落细胞学检查，尿NMP22的检查具有较高敏感性，但缺点是特异性不如尿细胞学检查，因此在临床上NMP22检测不可能完全替代细胞学检查，但可弥补细胞学检查对膀胱癌敏感性过低的不足，二者结合可提高临床早期诊断膀胱肿瘤的能力. 目前比较公认的临界值是Soloway等10提出的10.0×103U/L，以这一临界值监测膀胱肿瘤术后复发敏感性为70

12、.0%，特异性为79.0%. 本试验以10.0×103U/L为临界值检测术后复发结果与Soloway等10的试验结果接近. 本研究结果显示尿NMP22可作为膀胱肿瘤术后复发的常规监测方法. 根据膀胱肿瘤术后高复发特点，NMP22>10.0×103U/L者应及时膀胱镜检查，避免漏诊. NMP22<10.0×103U/L者可协同B超及尿脱落细胞学检查密切观察随诊. 我们研究表明，与尿脱落细胞学和膀胱镜检查相比尿NMP22测定具有较高的敏感性和预测性，又是定量非侵入性的检查方法，因此我们认为检测尿液中NMP22含量可作为膀胱癌诊断及监测复发的较好指标之一.

13、【参考文献】  1 Abel PD. Prognostic indices in transitional cell carcinoma of the bladderJ. Brit J Urol, 1998, 62:103.2 Wiener HG, Vooijs GP, Vant HofGrootenboer B. Accuracy of urinary cytology in the diagnosis of primary and recurrent bladder cancer J. Acta Cytol, 1993, 37:163.3 Droller MJ. Evaluati

14、on of the clinical value of urinary NMP22 as a maker for screening and surveillance of transitional cell carcinoma of the urinary bladder J. J Urol, 2002, 168(2):857-858.4 Yang C H, Lambie E J, Smyder M. NuMAan unusually long coiledcoil related protein in the mamnialian nucleusJ. J Cell Biol, 1992,

15、116:1303-1304.5 Berezney R, Coffey DS. Identification of a nuclear protein matrix J. Biochem Biophys Res Commun, 1974, 60(4):1410-1417.6 Compton DA, Cleveland DW. NuMA is required for the proper completion of mitosis J. Cell Biol, 1993,120(4)：947-957.7 Keesee SK, Briggman JV, Thill C, et al. Utiliza

16、tion of nuclear matrix proteins for cancer diagnosisJ. Crit Rev Eukaryot Gene Expr, 1996,6(2):189-214.8 Carpinito GA, Stadler WM, Briggman JV, et al. Urinary nuclear matrix proteinas a marker for transitional cell carcinoma of the urinary tractJ. J Urol, 1996, 156(4):1280-1285.9 Sanchezcarbayo M, Urrutia M, Silva JM, et al. Comparative predictive values of urinary cytology, urinary bladder cancer antigen, CYFRA211 and NMP22 for evaluating sympotomatic patients at risk for bladder cancerJ. J Urol, 2001,16