培养基及其配制ppt课件

1、第三章第三章 培育基及其配制培育基及其配制 培育基是植物组织培育的重要基质。在离体培育条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不一样，只需满足了它们各自的特殊要求，它们才干很好地生长。因此，没有一种培育基可以适宜一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培育系统时，首先必需找到一适宜的培育基，培育才有能够胜利。第一节培育基成分及作用第一节培育基成分及作用主要成分包括：无机盐类大量和微量元素、维生素类、氨基酸类、有机附加物、植物生长调理物质、糖类，水和琼脂等。 1.大量元素：指浓度大于0.5mmolL的元素等。(1)N：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核

2、酸、磷脂、生物碱等 的组成成分，在制备培育基时以NO3N和NH4N两种 方式供应。(2)P：是磷脂的主要成分。常用的物质有KH2P04或NaH2P04 (3)K：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有亲密关系。 制备培育基时，常以KCI、KN03等盐类提供。(4)Mg、S和Ca、Mg： 是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。它们常以MgSO47H20提供。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、维护质膜不受破坏有显著作用，常以CaCl22H2O提供。 2.微量元素：指小于微量元素：指小于0.5mmolL的元素的元素主要有主要有Fe，B，Mn，Cu，Mo，

3、Co等。等。 铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素构成的必要条件。培育基中的铁对胚的素构成的必要条件。培育基中的铁对胚的构成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。构成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。在制做培育基时不用在制做培育基时不用Fe2SO4，和，和FeCl3(因其在因其在pH值值52以上，易构成以上，易构成Fe(OH)3的不溶性沉淀的不溶性沉淀)，而用，而用FeSO47H20和和Na2EDTA结合成合物运结合成合物运用。用。B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植等，也是植物组织培育

4、中不可短少的元素，短少这些物组织培育中不可短少的元素，短少这些物质会导致生长、发育异常景象。物质会导致生长、发育异常景象。 3.有机化合物有机化合物碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。蔗糖运用浓度在的生长。蔗糖运用浓度在2%3%，常用，常用3%高高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予思索。在大规模消费时，可用食用的绵要给予思索。在大规模消费时，可用食用的绵白糖替代。白糖替代。 维生素：这类化合物主要是以各种辅酶的方维生

5、素：这类化合物主要是以各种辅酶的方式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。主要有的促进作用。主要有VBl(盐酸硫胺素盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸烟酸)、Vc抗坏血抗坏血酸、有时还运用生物素、叶酸、酸、有时还运用生物素、叶酸、VB12等。等。普通用量为普通用量为0.11.0mgL。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，能促进根的生长，Vpp与植物代谢和胚的与植物代谢和胚的发育有一定关系。发育有一定关系。Vc有防止组织变褐的作用。有防止组织变褐的作用。生长

6、培育基是植生长培育基是植物再生的必要条物再生的必要条件件蔗糖蔗糖 0%蔗糖含量蔗糖含量 1%蔗糖含量蔗糖含量 5%外植体完全被绿色的芽所包裹，根生长在其下外表在外植体上既没有芽发生，也没有根和愈伤组织产生在外植体上外表边缘产生芽，也有一些根发生芽从外植体的上外表发生而根从下外表发生tissue culture in the African Violet (3)肌醇又叫环己六醇：在糖类的相互转化中起重要作用。运用肌醇又叫环己六醇：在糖类的相互转化中起重要作用。运用浓度普通为浓度普通为l00mgL，适当运用肌醇，能促进愈伤组织的生长，适当运用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的构成。对组织和

7、细胞的繁衍、分化有促进作用，以及胚状体和芽的构成。对组织和细胞的繁衍、分化有促进作用，对细胞壁的构成也有作用。对细胞壁的构成也有作用。 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培育基氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培育基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。4.有机附加物：其对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，有机附加物：其对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。其成分大多不清楚，所以普通

8、应尽但对器官的分化作用不明显。其成分大多不清楚，所以普通应尽量防止运用。量防止运用。 常用的有机附加物有常用的有机附加物有:椰乳：椰乳：香蕉：香蕉：水解酪蛋白：水解酪蛋白：5.植物生长调理物植物生长调理物植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形状胞分化、分裂、发育，影响到植物的形状建成、开花、结实、成熟、零落、衰老和建成、开花、结实、成熟、零落、衰老和休眠以及萌生等许许多多的生理生化活动，休眠以及萌生等许许多多的生理生化活动，在培育基的各成分中，植物生长调理

9、物是在培育基的各成分中，植物生长调理物是培育基的关键物质，对植物组织培育起着培育基的关键物质，对植物组织培育起着决议性作用。决议性作用。 5.1生长素类生长素类(auxin)： 在组织培育中，生长素主要被用于诱导愈在组织培育中，生长素主要被用于诱导愈伤组织构成，诱导根的分化和促进细胞分伤组织构成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感，在极低的浓度下，就可促进长素最敏感，在极低的浓度下，就可促进根生长，其次是茎和芽。天然的生长素热根生长，其次是茎和芽。天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。稳定性差，高温高压或受光

10、条件易被破坏。在植物体内也易遭到体内酶的分解。普通在植物体内也易遭到体内酶的分解。普通生长素浓度的运用为生长素浓度的运用为0.055mgL。IAA(吲哚乙酸吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官构成的其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官构成的副作用小、，高温高压易被破坏，也易被细胞中的副作用小、，高温高压易被破坏，也易被细胞中的1AA分分解酶降解，受光也易分解。解酶降解，受光也易分解。NAA(萘乙酸萘乙酸)在组织培育中的起动才干要比在组织培育中的起动才干要比IAA高出高出3-4倍，且由于可大批量人工合成

11、，耐高温高压，不易被分解倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以运用较普遍。破坏，所以运用较普遍。NAA和和IBA广泛用于生根，并与广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。IBA(吲哚丁酸吲哚丁酸)是促进发根才干较强的生长调理物质。是促进发根才干较强的生长调理物质。2，4D(2，4二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸)起动才干比起动才干比IAA高高10倍，倍，特别在促进愈伤组织的构成上活力最高，但它剧烈抑制芽特别在促进愈伤组织的构成上活力最高，但它剧烈抑制芽的构成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量的构成，影响器官的发育。适宜的用量

12、范围较狭窄，过量常有毒效应。常有毒效应。5.2细胞分裂素类细胞分裂素类细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而在生根培育时运用较少或用量较低。这类激素是腺嘌吟的在生根培育时运用较少或用量较低。这类激素是腺嘌吟的衍生物，包括衍生物，包括6BA(6苄基氨基嘌呤苄基氨基嘌呤)、Kt (kinetin 激动激动素素)、Zt (zeatin 玉米素玉米素)等，细胞分裂素等，细胞分裂素0.0510mgL。 其中其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是活性最强，但非常昂贵，常用的是6BA。在培育基中添加细胞分裂素有三个作用：在培育基中添加细胞分裂素有

13、三个作用：诱导芽的分化促进侧芽萌生生长。诱导芽的分化促进侧芽萌生生长。促进细胞分裂与扩展。促进细胞分裂与扩展。抑制根的分化。抑制根的分化。5.3激素配比方式激素配比方式生长素与细胞分裂素：它们的比例决议着发育的方向，生长素与细胞分裂素：它们的比例决议着发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培育基中化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培育基中生长素与细胞分裂素的比例。生长素与细胞分裂素的比例。 高：有利于根的构成和愈伤组织高：有利于根的构成和愈伤组织的构成；的构成； 适中：有利于根芽的分化；

14、适中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的构成低：有利于芽的构成生长素/细胞分裂素比例No BAP BAP reduced to 0.1 mg. l-1 No NAAPoor shoot development and no roots. Extensive callus generationPoor shoot development and no rootsNAA reduced to 0.1 mg. l-1 More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developin

15、g at the edges of the explantProfuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explantNAA increased to 5.0 mg. l-1Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callusNo MS saltsNo sign

16、of regeneration from explant at all. MS salts reduced to 0.47 g. l-1 Some root growth but reduced development of shootsMS salts increased to 9.52 g. l-1 Shoots developed on upper surface of explant. No roots or callus.GA (赤霉素赤霉素)：有有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不同、培育基中添加的是同、培育基中添加的是

17、GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长，主要用于促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作用，对构成层的分化有影响，当生长素赤霉素比值高时用，对构成层的分化有影响，当生长素赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外，有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外，赤霉素还用于突破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提早萌赤霉素还用于突破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提早萌生。普通在器官构成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体生。普通在器官构成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。的生长。6.抗生物质抗生物质抗生物质有

18、青霉素、链霉素、庆大霉素等，抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在用量在520mg/L之间。添加抗生物质可防之间。添加抗生物质可防止菌类污染，减少培育中资料的损失。对于止菌类污染，减少培育中资料的损失。对于刚感染的组织资料，可向培育基中注入刚感染的组织资料，可向培育基中注入5%10%的抗菌素。的抗菌素。活性炭的运用：茎尖初代培育，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，普通为0.1%0.2%，不能超越0.2%。活性炭在生根时有明显的促进作用，能够是经过减弱光 照维护IAA。降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用，普通浓度为0.3%。7.活性炭活性炭活性炭构造疏松，孔隙大，吸水力强，有

19、很活性炭构造疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用通常运用浓度为强的吸附作用通常运用浓度为0.5l0gL。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。 活性炭在胚胎培育中也有一定作用，如在葡萄胚珠培育时向培育基参与0.1%的活性炭，可减少组织变褐和培育基变色，产生较少的愈伤组织。但是，活性炭具有副作用，研讨表示，每毫克的活性炭能吸附l00ng左右的生长调理物质，这阐明只需求极少量的活性炭就可以完全吸附培育基中的调理物质。大量的活性炭参与会减弱琼脂的凝固才干，因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，通常在琼脂凝固之前，要悄然摇动培育瓶。总之，那种随意抓一撮

20、活性炭放人培育基，会带来不良的后果。因此，在运用时要有其量的认识，使活性炭发扬其积极作用。、琼脂、琼脂琼脂琼脂(agar)是固体培育基的必要成分，琼是固体培育基的必要成分，琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至在热水中，成为溶胶，冷却至40即凝固即凝固为固体状凝胶。通常所说的为固体状凝胶。通常所说的“煮化培育基，煮化培育基，就是使琼脂溶解于就是使琼脂溶解于90以上的热水。琼脂以上的热水。琼脂条的用量在条的用量在610gL之间，琼脂粉的用之间，琼脂粉的用量在量在34gL之间。假设浓度太高，培育之间。假设浓度太高，培育基就会变得很硬，营养物质难以分散到培基就会变得很硬，营养物质难以分散到培育的组织中去。假设浓度过低，凝固性不育的组织中去。假设浓度过低，凝固性不好。好。新买来的琼脂最好先试一下它的凝固力。新买来的琼脂最好先试一下它的凝固力。普通琼脂以颜色