显微镜高级培训

1、显微镜基础知识光学基础光学基础:安全安全: (图标含义图标含义,自身的保护自身的保护)注意注意 本标识提示某项说明需要特别注意。本标识提示某项说明需要特别注意。警告警告 本标识提示可能对仪器或系统存在某种潜在的危害。本标识提示可能对仪器或系统存在某种潜在的危害。警告警告 本标识提示可能对使用者存在潜在的危害。本标识提示可能对使用者存在潜在的危害。警告警告 注意高温表面。注意高温表面。警告警告 注意注意UV辐射。辐射。警告警告 仪器在打开前需断开电源。仪器在打开前需断开电源。安全安全: 图标的含义图标的含义显微镜基础知识光学基础光学基础:安全安全: (图标含义图标含义,自身的保护自身的保护)自身

2、的保护自身的保护: (UV辐射辐射,烫伤烫伤,用电安全用电安全) UV光源对眼睛有很大的伤害光源对眼睛有很大的伤害,可以导致视网膜脱落可以导致视网膜脱落,造成终身失明造成终身失明,因此调节的因此调节的时候一定要注意保护眼睛时候一定要注意保护眼睛,尽量通过调节工具来调节中心尽量通过调节工具来调节中心.另外非常强的可见光另外非常强的可见光源依然会损伤眼睛源依然会损伤眼睛,因此不要用眼睛直视光源部分因此不要用眼睛直视光源部分.尽量通过保护屏来观察尽量通过保护屏来观察. HBO光源和光源和HAL 100卤素灯光源的灯箱外壳和灯泡部分在使用时或刚刚关闭的卤素灯光源的灯箱外壳和灯泡部分在使用时或刚刚关闭的

3、时候不要用手接触时候不要用手接触,以免烫伤以免烫伤. HBO灯泡内含有汞蒸汽灯泡内含有汞蒸汽,因此使用时要小心因此使用时要小心 在拆卸显微镜的带电部分的时候在拆卸显微镜的带电部分的时候,一定要将电源线拔下一定要将电源线拔下,彻底断电彻底断电.以保护自身安以保护自身安全全. 显微镜基础知识光学基础光学基础:显微镜光路整体结构图显微镜光路整体结构图正置显微镜正置显微镜PrimoStarAxioStar plusAxioSkop 40 Axio Scope A1AxioImager显微镜基础知识光学基础光学基础:显微镜光路整体结构图显微镜光路整体结构图倒置显微镜倒置显微镜AxioObserverAx

4、iovert 200Axiovert 40显微镜基础知识光学基础光学基础:显微镜光路整体结构图显微镜光路整体结构图体视显微镜体视显微镜(解剖镜解剖镜)Stemi DV4Stemi 2000 Discovery V8Discovery V12/20Discovery Lumar体式镜常用分辨率表体式镜常用分辨率表示方式是：每示方式是：每mm能能分辨的最多线数分辨的最多线数 =1000N.A/0.61 =0.55um显微镜基础知识BF 明场明场 采用透射光直接观察样本采用透射光直接观察样本 (透射透射,反射反射)PH 相差相差 利用被检物体的光程（折射率利用被检物体的光程（折射率 x 厚度）差进行

5、镜检厚度）差进行镜检DIC 微分干涉微分干涉 通过特制的棱镜将偏振光分解和合成通过特制的棱镜将偏振光分解和合成,增强光程差使得样品增强光程差使得样品 -Plas DIC 呈现出立体图像呈现出立体图像 塑料微分干涉塑料微分干涉FL 荧光荧光 通过特定光源的照射通过特定光源的照射,使得样品发出特定颜色的光使得样品发出特定颜色的光POL 偏光偏光 通过偏镜和检偏镜通过偏镜和检偏镜,使用偏振光来观察样品使用偏振光来观察样品 DF 暗场暗场 利用丁道尔利用丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射，增大现象，微粒对斜射光反射或衍射，增大 了人眼可见性了人眼可见性光学基础光学基础:常见观察模式常

6、见观察模式显微镜基础知识BF 明场明场应用领域：应用领域：常规镜检、病理、 染色标本优点：优点：视野亮度高、均匀，应用范围广，操作简单，价格低，物镜适用于荧光观察缺点：缺点：透明标本对比度低，标本没有立体感显微镜基础知识PH 相差相差优点：优点：鉴定活体细胞最实用、最经济的方法鉴定活体细胞最实用、最经济的方法缺点：缺点：需要特殊的相差物镜需要特殊的相差物镜(PH)需要光强高需要光强高切片不能太厚切片不能太厚(510um)盖片、载片需符合标准盖片、载片需符合标准最好配用单色滤光镜最好配用单色滤光镜操作较麻烦操作较麻烦荧光效果不如明场物镜荧光效果不如明场物镜显微镜基础知识PH 相差相差相差物镜聚光

7、镜内带相差环PH 1/2/3(阿拉伯数字)显微镜基础知识DIC 微分干涉微分干涉显微镜基础知识DIC 微分干涉微分干涉DIC物镜聚光镜内带DIC棱镜DICI/II/III (罗马数字)检偏器显微镜基础知识DIC 微分干涉微分干涉检偏器聚光镜内带DIC棱镜DICI/II/III (罗马数字)DIC物镜显微镜基础知识FL 荧光荧光优点：优点：检出能力高（放大作用）对细胞的刺激小（可以活体染色）能进行多重染色用途：用途：物体构造的观察荧光素荧光的有无、色调比较进行物质判别抗体荧光等发荧光量的测定对物质定性、定量分析显微镜基础知识FL 荧光荧光荧光模块荧光光源显微镜基础知识FL 荧光荧光荧光滤色块参数

8、荧光滤色块参数例如例如: Filter set 02 shift free EX G 365, BS FT 395, EM LP 420 488002-9901-000其中其中 EX 365 (BP 带通带通) BS 390 EM LP 420 /BP 450/20显微镜基础知识高级荧光高级荧光使用使用CCD成像成像 (单张单张,多通道多通道)2 使用共聚焦成像使用共聚焦成像 (单张单张,多通道多通道,光谱光谱) 光谱意味着可以拆分成不同的颜色通道光谱意味着可以拆分成不同的颜色通道,可以分析更多的成分可以分析更多的成分显微镜基础知识显微镜基础知识POL 偏光偏光应用：应用：矿物质、化学物品鉴别

9、矿物质、化学物品鉴别鉴别纤维、染色体、淀鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细胞中晶体粉粒、细胞中晶体植物病理检验植物病理检验鉴别骨骼、牙齿、胆固鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和瘤细胞、横纹肌和毛发等毛发等冰尿晶显微镜基础知识POL 偏光偏光检偏器起偏器石膏片/石英片显微镜基础知识DF 暗场暗场优点：优点：观察到极其微小物体，分辨率可达0.02 0.004 um (明场0.4um)”超显微“。缺点：缺点：只能观察到物体存在、运动和外部形态不方便调节标本要求高（灰尘、盖片、载片）显微镜基础知识DF 暗场暗场暗场聚光镜暗场聚光镜显微镜基础知识硬件基础硬件基础: (硬件拆解

10、硬件拆解,安装安装,调节调节.各部件介绍各部件介绍)主机及附件的安装主机及附件的安装科勒照明的调节科勒照明的调节灯箱的拆解与灯泡的安装灯箱的拆解与灯泡的安装聚光镜内模块的安装聚光镜内模块的安装荧光模块滤片的安装荧光模块滤片的安装显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识灯箱的拆解与灯泡的安装灯箱的拆解与灯泡的安装显微镜基础知识HBO灯泡调节中心灯泡调节中心将调节工具4拔出,调节1,2,3,使得工具中显示如图5显微镜基础知识聚光镜内模块的安装聚光镜内模块的安装显微镜基础知识荧光模块的拆解安装荧光模块的拆解安装显微镜基础知识物镜

11、类型物镜类型放大倍率放大倍率数值孔径数值孔径无限远光学系统无限远光学系统盖玻片厚度盖玻片厚度机械校正环机械校正环观察方式标签观察方式标签放大倍率标签放大倍率标签介质标签介质标签显微镜基础知识F.N20F.N23F.N25显微镜基础知识科勒照明的调节科勒照明的调节放一张你即将观察的样本放一张你即将观察的样本(最好是染色的切片类样品最好是染色的切片类样品)，使用，使用10X物镜物镜,明明场照明状态（聚光镜转轮选择场照明状态（聚光镜转轮选择 H或或 BF，荧光滤镜轮选择空位，荧光滤镜轮选择空位，DIC 附附件全部拉出光路，照相光路转换到观察状态件全部拉出光路，照相光路转换到观察状态,通过粗调和微调将

12、样品调节通过粗调和微调将样品调节到样本能观察到的最清楚的状态。然后不要再动调焦螺旋。到样本能观察到的最清楚的状态。然后不要再动调焦螺旋。 2，将视场光栏调到最小的状态，如果显微镜的调节状态正确的话，此，将视场光栏调到最小的状态，如果显微镜的调节状态正确的话，此时在视野中应该可以看到一个边缘清楚的多边形时在视野中应该可以看到一个边缘清楚的多边形(如下图如下图)。 显微镜基础知识 如果看到的不是一个边缘清楚的多边形，则说明光路中的聚光镜上下位置不准如果看到的不是一个边缘清楚的多边形，则说明光路中的聚光镜上下位置不准确，此时通过调节聚光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个边缘清确，此时通过调节聚

13、光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个边缘清晰的多边形，此时的聚光镜位置就是晰的多边形，此时的聚光镜位置就是Z轴上最佳位置，以后的调节或观察的时轴上最佳位置，以后的调节或观察的时候都不要再移动其位置了。候都不要再移动其位置了。 3，视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心，如果不在说明聚光镜在水，视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心，如果不在说明聚光镜在水平面上有偏移，需要调节柯勒照明光路调节旋钮（聚光器对中螺钉）平面上有偏移，需要调节柯勒照明光路调节旋钮（聚光器对中螺钉）,通过调通过调节聚光镜上的柯勒照明光路调节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的节聚光镜上的柯勒照明光路调

14、节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的中心。中心。 4，将视场光栏慢慢放大，当多边形正好外切于视场的时候就是视场光栏的最佳工，将视场光栏慢慢放大，当多边形正好外切于视场的时候就是视场光栏的最佳工作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。 显微镜基础知识软件基础软件基础: (版本说明版本说明,安装安装,配置配置,使用介绍使用介绍)AxioVision版本从版本从 3.04.8 .当前主要是的用当前主要是的用4.5以上版本以上版本.版本是不可以无限升级的版本是不可以无限升级的.原因是有的特殊硬件只支持到某个版本原因是有的特殊硬件只支持到某个版本.如果

15、只是显微镜和如果只是显微镜和CCD的话的话,是可以升级的是可以升级的.计算机要求计算机要求:至少至少1GM内存内存,独立的独立的128M以上显卡以上显卡,一块一块1394卡卡(贝尔金贝尔金,或或dell原装卡原装卡, 这这 类卡的特点是绿色的类卡的特点是绿色的),操作系统操作系统win2000 SP4/xp SP2/vista home Premium SP1以上版本以上版本,屏幕分辨率在屏幕分辨率在Y方向必须大于方向必须大于1024. Vista home basic 版本不支持版本不支持Axiovision软件软件软件安装时软件安装时,加密狗加密狗(Dongle)必须拔下必须拔下显微镜基础

16、知识软件安装路径默认软件安装路径默认.驱动的安装驱动的安装汉化版的安装汉化版的安装系统备份系统备份/软件界面的备份软件界面的备份MTB的配置的配置软件的默认参数软件的默认参数比例尺的设置比例尺的设置齐焦至目镜齐焦至目镜显微镜基础知识Axiovision 软件默认参数软件默认参数显微镜基础知识图像调节图像调节亮度亮度/对比度对比度/伽吗值的调节伽吗值的调节(以及参数和曲线的含义以及参数和曲线的含义)参数的测量以及输出参数的测量以及输出显微镜基础知识CCD的成象原理的成象原理ElectricalConnectionPolysilicon GateSilicon DioxideSiliconeeee

17、eCCD 结构示意图显微镜基础知识CCD 基本原理基本原理显微镜基础知识CCD 基本原理基本原理显微镜基础知识CCD 基本原理基本原理显微镜基础知识彩色彩色CCD的成象模式的成象模式Color Pixel Separation显微镜基础知识HRC原理原理显微镜基础知识CCD 分辨率 2. 灵敏度(QE 值)3. 暗电流4. 彩色成像方式5. 拍摄速度6. Binning 模式选购相机需要注意的参数显微镜基础知识ZEISS的的CCD家族家族 相机型号相机型号 最高分辨率最高分辨率 适用范围适用范围Axiocam HRc 4164X3120 高分辨率的彩色照片高分辨率的彩色照片Axiocam HR

18、m 4164x3120 高分辨率的黑白照片高分辨率的黑白照片Axiocam MRc5 2584x1936 常规彩色常规彩色Axiocam MRm 1388x1040 荧荧 光光Axiocam MRC 1388x1040 快速彩色快速彩色Axiocam ICC1 1392x1038 低端彩色低端彩色Axiocam ICC3 2080 x1540 低端彩色低端彩色Axiocam HSm 660 x494 (60fps) 超高速黑白超高速黑白显微镜基础知识光学系统的清洁光学系统的清洁 清洁用品及工具清洁用品及工具a).a).无水乙醚乙醇混合液无水乙醚乙醇混合液(7:3(7:3混合混合) ) 用于一般

19、光学系统表面污渍的清除。用于一般光学系统表面污渍的清除。b)b)吹风球吹风球用于清除灰尘及异物。用于清除灰尘及异物。c)c)软毛刷软毛刷用于清除灰尘及异物。用于清除灰尘及异物。d)d)镜头纸镜头纸. .木棒或棉签木棒或棉签. .长纤维脱脂棉长纤维脱脂棉光学系统清洁的原则光学系统清洁的原则 总原则是能不擦的就不要擦总原则是能不擦的就不要擦. .原因是现在的光学系统表面一般情况下都会有原因是现在的光学系统表面一般情况下都会有镀膜镀膜, ,经常用力擦拭会破坏膜结构经常用力擦拭会破坏膜结构, ,造成系统光学性能下降造成系统光学性能下降. . 清洁顺序应该是先用吹风球吹清洁顺序应该是先用吹风球吹, ,再

20、使用软毛刷清洁再使用软毛刷清洁, ,如果还是不行如果还是不行, ,再使用清再使用清洁液擦拭洁液擦拭显微镜基础知识 木棒或棉签的使用方法木棒或棉签的使用方法: : 在其一端卷绕上脱脂棉在其一端卷绕上脱脂棉 用于擦拭镜片。用于擦拭镜片。显微镜基础知识需清除尘埃的部位需清除尘埃的部位 注意：注意： 应该经常对如图应该经常对如图所示的所示的4 4个部位进个部位进清洁。清洁。显微镜基础知识清洁保养的顺序及部位清洁保养的顺序及部位 先用吹风球或软毛刷由上而下地清除附着在显微镜先用吹风球或软毛刷由上而下地清除附着在显微镜片表面，载物台表面和机架表面的灰尘及其它异物。片表面，载物台表面和机架表面的灰尘及其它异

21、物。 对一般用户来说只需且只能经常清洁擦拭目镜，对一般用户来说只需且只能经常清洁擦拭目镜，物镜，聚光器，集光镜等表面镜片。对于其他镜片或仪物镜，聚光器，集光镜等表面镜片。对于其他镜片或仪器内部的污染物的清洁器内部的污染物的清洁 请联系请联系zeisszeiss工程师来解决。工程师来解决。( (并非所有的光学部件都能使用有机溶剂擦拭并非所有的光学部件都能使用有机溶剂擦拭) )显微镜基础知识各类镜片的擦拭各类镜片的擦拭a) 附着于光学镜片上的灰尘和污脏物部位的识别：附着于光学镜片上的灰尘和污脏物部位的识别： 边观察边转动相关的透镜，如果污渍随镜片的转动而转动，就可以判断其所边观察边转动相关的透镜，如果污渍随镜片的转动而转动，就可以判断其所处在的位置是在镜片上。否则就是光路的其他镜片上处在的位置是在镜片上。否则就是光路的其他镜片上擦拭镜头的基擦拭镜头的基本操作是从中央部位开始本操作是从中央部位开始擦起，采用螺旋渐进的方擦起，采用螺旋渐进的方式逐步地擦到边缘。第一式逐步地擦到边缘。第一次一定不要用力次一定不要用力,以后每次以后每次逐渐的加力逐渐的加力,要不断地重复要不断地重复擦拭，直到镜片完全清洁擦拭，直到镜片完全清洁为止。且方向必须