线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型昆明制药集团

1、线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型（MCAO）一、 MCAO模型制备选用体质量（260-330）g大鼠，用2%戊巴比妥纳ip麻醉（45mg/kg），仰卧固定于手术台上。减去颈部毛发，75%酒精棉球擦拭消毒。于颈正中偏右1cm处切口（口长2cm左右），剪开浅筋膜，分离乳突泡，显露右侧胸锁乳突肌，钝性分离胸锁乳突肌与胸骨舌骨肌间的肌间隙，暴露右侧颈总动脉（CCA）和迷走神经。钝性撕开颈动脉鞘，分离CCA，注意避免损伤迷走神经。分离右侧颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），结扎ECA近心端不必至颅底找出ICA颅外段的分支翼腭动脉（PPA），并将其分离结扎，结扎CCA近心端，并在其分叉处打一活结备用。用

2、动脉夹夹住ICA，在CCA分叉处剪一小口，插入预先处理好的鱼线（0.26mm），将预制的活结稍打紧（防止鱼线脱出）。松开夹住ICA的动脉夹，将鱼线缓慢向ICA插入（向内上方的角度插入，否则易误入PPA），目视鱼线头部进入ICA，而不是PPA（如果误入PPA，因鱼线不能入颅，插入长度一般不超过10 mm则被阻）。继续将鱼线缓慢向ICA入颅方向推进，插入长度约（18.5±0.5）mm(从CCA分叉处计算)，微遇阻力时停止。扎紧预制活结，以防止ICA内的线栓移动和出血，最后逐层缝合浅筋膜、皮肤（暴漏线头1cm，剪除鱼线多余末端）。庆大霉素肌注预防感染,术后保温至动物清醒。阻断3h后实行再灌

3、注，再灌注（抽出鱼线约1cm）24h或48h后处死大鼠，进行相关指标的测定。二、MCAO模型的评价1）大鼠苏醒后，按Longa评分法（神经学检查分5个等级，0分：正常，无神经功能缺损；1分：左侧前爪不能完全伸展，轻度神经功能缺损；2分：行走时，大鼠向左侧转圈，中度神经功能缺损；3分：行走时，大鼠身体向左侧倾倒。重度神经功能缺损；4分：不能自发行走，有意识丧失。大于0分者入选2）Homer's征阳性3）右侧眼球灰白发暗（插到位后大鼠心跳呼吸加快） 4）取脑时无蛛网膜下腔出血5）脑组织TTC染色有缺血病理改变三、测定指标1、参考Bederson评分法略作修改，作为评分标准，具体如下：（1）

4、 提尾悬空大鼠，手术对侧前肢无屈曲、腕屈及同时腕屈与肘屈分别计为0、1与2分。（2） 大鼠行走路径向手术对侧无偏移、有偏移及偏移呈圆形甚至原地旋转分别计为0、1与2分。（3） 刺激大鼠手术对侧颊须，反应灵敏、不灵敏及没有反应分别计为0、1与2分。（4） 动物躯体向手术对侧无扭转、偶尔扭转及频繁扭转分别计为0、1与2分。（5） 总分为8分。指标观察：分别于再灌注6h及24h进行1次神经病学评分，以24h内2次评分的平均值作为评价指标。2、缺血3h再灌注24h或48h时，各组大鼠麻醉，断头取脑，放于-20度变硬，由前向后做2mm连续冠状切片（5个）（去除嗅球、小脑和低位脑干，然后水平切4刀分成5片

5、。第一刀在脑前极与视交叉连线中点，第二刀在视交叉部位，第三刀在漏斗柄，第四刀漏斗柄与脑叶尾极之间），置于2%TTC溶液中，37度恒温震荡孵育30min后滤除2%TTC溶液。用10%甲醛中避光固定（初步24h左右），拍照，用Motic Images Plus 2.0 显微图象分析系统计算梗塞面积（粉红色为未受损的正常组织，而梗塞区则因线粒体损害不染色，呈白色）。因为脑水肿对其梗塞体积有影响，故采用公式对其修正。具体公式如下：脑梗塞灶体积（mm3）=总梗塞面积×脑片厚度（2mm）水肿修正后的脑梗塞灶体积（mm3）=梗塞体积×对侧半球体积/同侧半球体积梗塞率（%）=水肿修正后的脑

6、梗塞灶体积/双侧大脑半球体积×100%。或者将每个脑平面（5片10面）投射到密度均一的铝箔上，剪下梗塞面积，以“重量求面积法”计算缺血组织重占总脑重的百分比作为梗塞范围的大小。3、脑指数和脑组织水分含量3.1脑指数：断头取脑，冰冷生理盐水洗净，滤纸吸尽水分，称重。指标测定：脑指数=脑湿重/体质量（mg/g）3.2 脑组织水分含量：用干湿重法测定脑组织水分含量。取对侧脑切片，称取湿重，染色后，放入105烘箱12h烘至恒重，称取干重，计算脑组织含水量。指标测定：脑组织含水量=（脑片湿重-脑片干重）/脑片湿重×100%MCAO模型分析线栓法的另一个缺点是模型的操作需要一个熟练过程，不同的操作者之间的误差很大，只有熟练者才能复制出稳定的梗死灶。影响因素1、体温实验中温度过高或过低均会影响神经细胞损伤。37,并在温度传感器涂上润滑膏或凡士林,插入直肠记录身体深部体温的变化。2、血糖脑缺血时动物血糖轻度升高，而高血糖本身就可使脑梗死的面积明显增加。为了