再生障碍性贫血T淋巴细胞亚群及其功能研究

1、    再生障碍性贫血T淋巴细胞亚群及其功能研究        免疫功能紊乱在再生障碍性贫血（再障）病理过程的发生和发展中起着十分重要的作用。我们通过研究再障患者不同状态和不同分化阶段的T淋巴细胞亚群变化和其对造血的抑制作用，寻找诊断免疫型再障的较准确的方法，为临床治疗提供依据。 病例和方法1病例再障22例，其中重型再障(SAA)型5例，型6例，慢性再障(CAA)11例；男19例,女3例;平均年龄31.3岁（2050岁）。除1例CAA外均接受过治疗。14名献血员为正常对照组。

2、2单个核细胞激活106/ml外周血单个核细胞在体积分数为10%的牛血清，5×10-5mol/L 2-巯基乙醇，2mmol/L L-谷氨酰胺，4g/ml PHA-P（购自Sigma公司）, IMEM培养液条件下，置体积分数为5%的CO2，37及饱和湿度下培养96小时。3T淋巴细胞集落（CFU-T）培养方法见文献1，其中牛血清浓度为体积分数15%，PHA-P 4g/ml。50个细胞组成的细胞团为1个集落。4活化的外周血单个核细胞抑制骨髓粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)形成培养体系中含甲基纤维素9g/L，牛血清、AB血清、胎肌浸液体积分数分别为20%、10%、20%，2mmol/L L-谷

3、氨酰胺，105骨髓单个核细胞，3×105再障或正常人活化的外周血单个核细胞。接种于24孔培养板（购自Costar公司），每孔0.5ml，置体积分数为5%的CO2，37及饱和湿度下培养14天。40个细胞组成的细胞团为1个集落。5间接免疫荧光测定方法见文献2，其中CFU-T观察整个集落阳性率。6统计方法采用秩和检验，t检验。结果1外周血T淋巴细胞亚群变化11例SAA和11例CAA及14名正常对照CD4+细胞百分率分别为(28.9±13.1)%，(29.1±9.4)%和(29.5±6.7)%，三组比较,差异无显著性。CD8+ 细胞CAA为(37.8±

4、8.9)%，SAA为(24.2±11.0)%，正常对照为(21.5±8.7)%，CAA组与SAA和正常对照比,差异有显著性(P<0.01),SAA组与正常对照比,差异无显著性。CD4+/CD8+4+/CD8+1在SAA和CAA，分别占27.3%和63.6%，在正常对照组仅1例（7.0%）。2活化后的外周血T淋巴细胞亚群变化8例SAA和10例CAA T淋巴细胞激活后CD4+细胞分别占(35.8±15.9)%和(29.2±11.3)%，正常对照组为(36.8±8.4)%,三组比较,差异无显著性。SAA和CAA CD8+细胞分别占(35.6&#

5、177;8.6)%和(41.4±8.4)%，正常对照组为(27.2±8.4)%,SAA、CAA与正常对照比,CD8+4+/CD8+4+/CD8+1，正常对照组无倒置者。3CFU-T亚群变化8例SAA和10例CAA其CD4+/CD8+4+/CD8+1。正常对照组仅有1例CD4+/CD8+倒置。4CFU-T形成能力11例SAA和11例CAA CFU-T数为（46.0±25.8)/5×104单个核细胞和(40.6±18.2)/5×104单个核细胞，正常对照组为(67.1±16.6)/5×104单个核细胞。SAA,CAA与

6、正常对照组比,P值分别0.05和0.01。5激活后的T淋巴细胞对CFU-GM生长的影响研究的4例CD4+/CD8+<1的CAA活化的T细胞抑制正常骨髓CFU-GM生长，抑制率达(92.1±5.5)%。3名正常对照活化的T细胞对CFU-GM抑制率为(30.2±29.8)%，两者比较,差异有显著性(P0.01)。讨论18.2%的SAA和18.2%的CAA患者外周血CD4+细胞绝对减少，18.2%的CAA患者外周血CD8+细胞绝对增加，27.3%的SAA和63.6%的CAA患者CD4+/CD8+1,且CAA患者CD8+细胞增加及CD4+/CD8+比值显著减少。再障患者T细胞

7、活化后CD4+细胞增殖弱于正常对照组，而CD8+细胞增殖显著高于正常对照组，揭示部分再障患者TS前体细胞处于超敏状态,因此激活后T细胞亚群的变化更能反映出再障患者免疫功能的异常。再障患者CD4+或CD8+CFU-T亚群与激活的T细胞亚群行为相同。提示免疫型再障在T淋巴细胞分化阶段就出现异常，优势促进CD8+细胞的分化和增殖，并抑制CD4+细胞的分化和增殖。因而TS细胞直接和间接抑制造血。45.4%的SAA和63.6%的CAA CFU-T数低于正常对照组下限，其中2例SAA和5例CAA CD4+/CD8+1，属免疫型再障，尤其是CAA，TS细胞抑制了CFU-T增殖和分化。另外4例SAA，2例CA

8、A，其中包括2例无CFU-T的患者CD4+/CD8+1，属造血细胞异常型再障。正常人激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率为21%59%3。本组3名正常人激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率为(30.2±29.8)%，4例CD4+/CD8+1的CAA激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率高达(92.1±5.5)%，证明CD4+/CD8+1的再障患者其TS细胞抑制髓系祖细胞增殖和分化。本研究结果提示,再障患者外周血T细胞激活后测定CD4+和CD8+亚群可提高免疫型再障的诊断率，并为其治疗和预后判断提供依据。作者单位:胡国柱、张进、聂荣庆330077南昌,江西省中医药研究所陈璋中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所文珠江西省医