芳香胺类药物特殊杂质的检验

1、药品检验技术课程单元教学设计情境：芳香胺类药物的分析（07） 任务：芳香胺类药物特殊杂质的检验(03) 教学目标设计序号5上课地点理实一体化教室授课形式讲授、学生操作练习教 学 目 标技能目标知识目标掌握芳胺类药物的杂质检查、苯乙胺类药物的杂质检查。掌握芳香胺类药物特殊杂质的检验方法教 学 重 点对乙酰氨基酚中乙醇溶液的澄清度与颜色检查、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查、苯乙胺类药物中酮体及有关物质的检查教 学 难 点对乙酰氨基酚中乙醇溶液的澄清度与颜色检查、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查、苯乙胺类药物中酮体及有关物质的检查能力训练任务及案例通过结合案例进行实验讲解，使同学们增强学习兴趣，提

2、高课堂积极性。教学进程设计（下面各格均可合并）步骤教学内容教学方法教学手段学生活动时间分配基础知识讲解杂质的检查方法教师举例、点评、归纳概括引出知识点。任务引导同学们做好课堂笔记，画出知识重点20分钟案例分析例如：盐酸去氧肾上腺素中有关物质的检查分组实验研究，增强同学们的实验操作能力25分钟芳胺类药物的杂质检查1对乙酰氨基酚中杂质检查对乙酰氨基酚的合成可以对硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚，经还原生成对氨基酚，再经乙酰化而制得。反应如下：也可以苯酚为原料，经亚硝化及还原反应制得对氨基酚。在生产过程中除可能引入一般杂质外，还可能引入特殊杂质。因此，中国药典2010年版（二部）规定本品除了检查酸

3、度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分和炽灼残渣等一般杂质外，还需检查以下项目。（1）乙醇溶液的澄清度与颜色 对乙酰氨基酚的生产工艺中使用铁粉作为还原剂，可能带入成品中，致使乙醇溶液产生浑浊。另外，中间体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红色或棕色。乙醇溶液的澄清度与颜色的检查方法为：取本品1.0g，加乙醇10mL溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准溶液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色液（附录 A第一法）比较，不得更深。（2）对氨基酚及有关物质 由于本品的生产工艺路线较多，不同的生产工艺所带入的杂质有所不同。这些有机杂质主要包括中间体、副产物及分解产物，如对氨基酚

4、、对氯苯乙酰胺、邻乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯酪和酮亚胺等。对氨基酚及有关物质的检查，采用高效液相色谱法。其方法为：取本品适量，精密称定，加溶剂甲醇-水（4:6）制成每1mL中约含20mg的溶液作为供试品溶液；另取对氨基酚对照品和对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加上述溶剂溶解并制成每1mL中约含对氨基酚1g和对乙酰氨基酚20g的混合溶液，作为对照品溶液。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000mL，加10%四丁基氢氧化铵溶液12mL）-甲醇（90:10）为流动相；检测波长为245nm；柱温为40；理论板数按对乙

5、酰氨基酚峰计算不低于2000，对氨基酚色谱峰的峰与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。取对照品溶液20L，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基酚色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液中对氨基酚保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，含对氨基酚不得超过0.005%；其他杂质峰面积均不得大于对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积（0.1%）；杂质总量不得过0.5%。对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前配制。（3）对氯苯乙酰胺 取对氨基酚及有关物质项下的供试品溶液作为供试品溶液

6、；另取对氯苯乙酰胺对照品适量，精密称定，加上述溶剂溶解并制成每1mL中约含1g的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法试验（附录 D）。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000mL，加10%四丁基氢氧化铵溶液12mL）-甲醇（60:40）为流动相；检测波长为245nm；柱温为40；理论板数按对乙酰氨基酚峰计算不低于2000，对氯苯乙胺峰与对乙酰氨基酚的分离度应符合要求。取对照品溶液20L，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氯苯乙酰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20L，分别注入液相色谱仪，

7、记录色谱图；按外标法以峰面积计算，含对氯苯乙酰胺不得过0.005%。2盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查盐酸普鲁卡因易发生水解作用，生成对氨基苯甲酸。经长久贮存或高温加热，对氨基苯甲酸还可进一步脱羧转化为苯胺，苯胺又可被氧化为有色物质，导致药物疗效下降，且毒性增加。其检查方法为：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每1mL中含1g的溶液，作为对照品溶液；取供试品溶液1mL与对照品溶液9mL混合均匀，作为系统适用性试验溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L

8、磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）-甲醇（68:32）为流动相；检测波长为279nm。取系统适用性试验溶液10L，注入液相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照品溶液10L，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.5%。苯乙胺类药物的杂质检查1酮体本类药物多由其酮体氢化还原制得，若还原不完全则可能在产品中引入酮体杂质。肾上腺素、重

9、酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素及盐酸异丙肾上腺素等均需检查酮体杂质。中国药典2010年版（二部）采用的检查方法为紫外-可见分光光度法，检查依据为酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身在该波长处几乎没有吸收，见图7-4。II图7-4 重酒石酸去甲腺素及去甲肾上腺素酮的紫外吸收图谱I0.005%重酒石酸去甲腺素溶液；II0.0025%去甲肾上腺酮（含等量的酒石酸）溶液例12：盐酸去氧肾上腺素中酮体的检查取本品2.0g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取10mL，置于50 mL量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录 A），在31

10、0nm的波长处测定吸光度，不得大于0.20。2有关物质本类药物结构中多含有酚羟基，易被氧化，所以除了检查酮体外还需检查有关物质，如盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇等。有关物质检查多采用色谱法，以便使药物与结构性质相近的杂质完全分离，避免相互干扰。中国药典2010年版（二部）收载的本类药物除盐酸苯乙双胍采用纸色谱法，盐酸去氧肾上腺素及其注射液采用薄层色谱法，其余均采用高效液相色谱法检查有关物质。例13：盐酸去氧肾上腺素中有关物质的检查取本品，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中约含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇稀释成每1mL中含约0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（

11、附录VB）试验，吸取上述两种溶液各10L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-三氯甲烷-浓氨溶液（80:5:15）为展开剂，展开，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，颜色不得更深（0.5%）。该项检查需避光操作。例14：盐酸多巴胺中有关物质的检查取本品，加流动相溶解并稀释制成浓度约为0.3mg/mL的溶液，作为供试品溶液；精密量取1mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取盐酸多巴胺对照品与4-乙基邻苯二酚适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中分别含6g的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法（附录V D）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.005mol/L十二烷基硫酸钠-乙腈-冰醋酸-0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠（700:300:10:2）为流动相；检测波长为280nm。取系统适用性试验溶液20L，注入液相色谱仪，盐酸多巴胺峰和4-乙基邻苯二酚峰的