苯丙氨酸定量检测试剂盒(荧光法)说明书

1、苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）说明书【产品名称】通用名称：英文名称： 【包装规格】【预期用途】【检验原理】【主要组成成分】 【储存条件及有效期】【适用机型】【 样本要求】【检验方法】【参考值（参考范围）】【检验结果的解释】【检验方法的局限性】【产品性能指标】【注意事项】【参考文献】【生产企业】【 医疗器械生产企业许可证编号】 【医疗器械注册证书编号】 【产品标准编号】 【说明书批准及修改日期】【产品名称】通用名称：苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法）英文名称：Phenylalanine Kit（FA）【包装规格】96人份/盒 480人份/盒【预期用途】 用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上

2、的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU）的筛查，仅用于体外检测。苯丙酮尿症（简称PKU）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH4缺陷引起。这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。检测方法还有细菌抑制法、酶法等。【检验原理】在含有琥珀酸缓冲液、二肽溶液

3、和茚三酮溶液的混合液中，茚三酮可以和苯丙氨酸反应，产生一种荧光物质，其中二肽可提高此荧光反应，琥珀酸缓冲液控制PH 5.80.1，可保证理想的荧光值和最大的特异性，加入铜溶液后可以使荧光化合物更加稳定并终止反应。使用荧光读数仪（激发光390nm，发射光486nm）测定荧光物质的强弱，即可反映苯丙氨酸的浓度。【主要组成成分】名称96人份/盒480人份/盒包装琥珀酸缓冲液 （琥珀酸）5ml/瓶25ml/瓶无色透明玻璃瓶或白色塑料瓶二肽溶液 （L-leucyl-L-alanine）1 ml/瓶5ml/瓶茚三酮溶液（茚三酮）2 ml/瓶10ml/瓶铜溶液（碳酸钠、酒石酸钾纳、硫酸铜）25ml/瓶125

4、ml/瓶96孔微孔板（透明）1块5块 无色透明塑料袋96孔微孔板（白色）1块5块 标准血片S1S6 （0.24、1.06、2.76、5.32、8.34、13.47 mg/dl）1份2份铝箔袋质控血片C1、C2 1份2份说明书1份质量验证单1份注：标准品或质控血片的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。 【储存条件及有效期】 储存条件：28，防止冷冻。 有效期：12个月。本试剂为一次性使用产品，开启后一次性使用。 【适用机型】 芬兰PE公司WALLAC 1420型荧光仪（激发波长390nm,发射波长486nm）。 【样本要求】遵循卫生部新生儿筛查血斑采集常规采集和保存血斑。【检验方法

5、】1. 实验前将试剂盒先放在室温（1825）平衡，铜溶液仍放在28冰箱内，即取即用。配制80乙醇溶液：无水乙醇和双蒸水按4：1比例混合，即配即用；2. 反应混合液：琥珀酸缓冲液、二肽溶液和茚三铜溶液按512比例混合,避光保存，4小时内用完；3. 用专用打孔器打下直径3mm标准品、质控品、样本的滤纸血斑，放入透明微孔板相应的孔中；4. 每孔加入80乙醇80ul,盖膜，室温振荡30分钟（振荡时避免血片上下跳动，以免萃取不完全)；5. 每孔取出萃取液50ul转移到白色微孔板的相对应孔中；6. 每孔加入反应混合液50 ul，盖膜，振荡15秒，60温育1小时或37温育2小时；7. 从温育箱中取出微孔板，

6、放入冰箱（-18-20）冷冻35分钟；8. 每孔加冷的铜溶液200ul（28冰箱内取出），避光在室温温育1530分钟；9. 上机测定，荧光仪使用的激发波长390nm,发射波长486nm 。10. 结果计算：可利用荧光仪提供数据自动处理软件，自动绘制标准曲线计算样品的苯丙氨酸浓度。手工计算：（a）坐标纸上以标准品荧光值（纵轴或Y轴）和与其相对应的浓度（横轴或X轴）绘制标准曲线。（b）质控品和样品的苯丙氨酸浓度值：首先在Y轴上查找荧光值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的点拉垂直线与X轴相交，得出苯丙氨酸浓度值，判断结果。计算公式：y = ax b （a标准曲线斜率，b标准曲线在y轴上的截距）单位

7、转换：1mg/dl=60.6umol/L【参考值】（参考范围）对1013例正常新生儿血斑样品使用本试剂盒进行检测，95的百分位数为1.5 mg/dl，97.5的百分位数为1.7mg/dl，99的百分位数为2.0mg/dl。参考值即切值（Cut off）：1.7mg/dl。见分布图1图1 建议每个实验室根据所在地区新生儿样品，建立适合本地区自己实验室的正常参考值。【检验结果的解释】1.如果血斑的苯丙氨酸浓度大于1.7 mg/dl，为 可疑阳性，应进行原血斑复检，如果复查的结果仍高于1.7mg/dl, 应采集新的血斑，进行确认实验。2.结果本身不能成为治疗的惟一因素。必须与其他的临床观察和诊断试验

8、相联系。3.质控品的结果必须控制在要求范围之内，否则实验结果不符合可接受范围视为无效。4.血样采集时间为出生72小时，并充分哺乳6次以上，否则会导致假阴性结果。【检验方法的局限性】1. 任何高浓度值的结果都要视为可疑阳性须复查。存在任何苯丙氨酸病历或临床症状都要复查。2. 不排除药物对病人苯丙氨酸的直接影响。若病人有PKU临床症状或相关病历，即使苯丙氨酸的值正常也要复查。3. 应使用新生儿筛查专用S&S 903#滤纸采集血斑。使用其它滤纸结果将不同。【产品性能指标】1. 试剂盒外观整洁，文字符号标识清晰2. 液体组分的外观： 琥珀酸缓冲液、二肽溶液应为无色透明液体；茚三酮溶液应为淡黄色透明液体

9、；铜溶液应为淡蓝色透明液体；以上溶液均应性状均一，无颗粒物，无絮状物。3. 血制品经抗-HIV、HBsAg、抗-HCV、梅毒抗体、转氨酶检测呈阴性4. 剂量反应曲线的线性范围0.24 mg/dl13.47 mg/dl（其确定值以随行质量验证单为准）。5. 批内精密度 不大于10 %；6. 批间精密度 不大于15 %；7. 准确性 回收率为85%119%；8. 特异性 与酪氨酸、组氨酸和甘氨酸无交叉反应；9 灵敏度 最低可检出限小于0.6 mg/dl；10. 相关性 实验中分别使用60温育1小时和372温育小时的温育条件，共检测47例未知样品，其相关性R0.989 见图2 图2【注意事项】1.

10、仅用于体外诊断。一次性使用产品，供专业人员使用。2. 不同批号的试剂不可混用；超出有效期的试剂不可使用。3. 按照检测程序加样，不可颠倒顺序，否则会导致实验失败。4. 试剂和样本应视为存在潜在的生物危害，实验结束后作为潜在传染源处理。5. 茚三酮溶液对皮肤有刺激作用，进行操作时应戴手套。6. 自备实验材料：荧光仪、振荡器、温育箱、无水乙醇溶液、移液器、一次性手套等。【参考文献】1Guthrie R, Susi A. (1963) 小儿科2McCaman M W, Robins E (1962) J.Lab.临床医学 59 8853Wendel U, Hummel W, Langenbeck U (1989)生物化学年鉴 180